培養(yǎng)基模擬灌裝試驗相關缺陷分析與改進建議

毛 紅

（重慶市藥品技術審評認證中心，重慶 401120）

《藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范（2010年修訂）》[1]（以下簡稱GMP）及《無菌藥品附錄》[2]要求，非最終滅菌藥品的無菌工藝驗證應進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗。該試驗是指采用微生物培養(yǎng)基替代產(chǎn)品（無菌粉末分裝的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗是將產(chǎn)品替代品溶于培養(yǎng)基中）對無菌工藝進行評估的驗證技術，它解決了無菌檢查不能復檢的問題，灌裝批量即為無菌檢查取樣量，更能體現(xiàn)污染率問題[3－4]。該試驗是非最終滅菌藥品GMP管理中一項重要的驗證工作。2014年至2015年，國家食品藥品監(jiān)督管理總局食品藥品審核查驗中心在組織的無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)的GMP認證檢查缺陷中，共發(fā)現(xiàn)與培養(yǎng)基模擬灌裝相關的缺陷項378條。本研究中對這些缺陷項進行了分類匯總和梳理，現(xiàn)報道如下。

1 缺陷項目分類及分析

選取近年來收集的與培養(yǎng)基模擬灌裝試驗相關的378條認證檢查缺陷，出現(xiàn)頻次較高的缺陷分為人員與培訓、方案設計、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件、記錄缺失、最差條件、干擾設計、偏差調查7個方面。

人員與培訓：無菌藥品生產(chǎn)中，人是最大的污染源，操作人員應始終按無菌技術操作，并在日常操作中努力降低風險[5－6]。檢查中人員與培訓缺陷主要為試驗中未包括所有日常生產(chǎn)人員；模擬灌裝前未對人員無菌更衣效果進行確認，人員更衣不規(guī)范；無菌更衣培訓記錄過于簡單，無視頻資料；未對進入灌裝區(qū)域的維修人員、環(huán)境監(jiān)測人員進行表面微生物監(jiān)測；模擬灌裝后培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果由灌裝車間燈檢崗位人員執(zhí)行，但未對該崗位人員進行微生物學知識和檢查技能的培訓。人員方面的缺陷對無菌藥品最終質量的影響最大。

方案設計：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗要求盡可能模擬整個工藝過程，但也要考慮到培養(yǎng)基的生長條件，避免某些工藝抑制微生物的生長。檢查中方案設計缺陷主要為，試驗時按照正常生產(chǎn)工藝充氮氣保護，未考慮氮氣可能對需氧菌的抑菌效果；凍干時真空度過低造成培養(yǎng)基中的水分減少；培養(yǎng)基在凍干箱中溫度降低導致微生物生長抑制，未同步進行促生長試驗；試驗中模擬了開門、停電、停風等會帶來污染風險的操作。試驗應當經(jīng)過詳細的計劃和良好的組織，以保證真實反映工藝中的污染風險[7]。

培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的選擇對于培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的成敗至關重要。檢查中此類缺陷主要為，未對試驗用培養(yǎng)基進行靈敏度試驗；培養(yǎng)結束后，未進行培養(yǎng)基促生長能力試驗；培養(yǎng)條件未嚴格按照微生物的繁殖規(guī)律，先低溫、后高溫進行培養(yǎng)，如驗證方案規(guī)定“灌裝后的培養(yǎng)基一半置23～28℃的溫度條件下培養(yǎng)7 d，另一半置30～35℃培養(yǎng)7 d，7 d后交換培養(yǎng)”；培養(yǎng)之前未對已灌裝好的瓶子進行倒置和旋轉操作，而是直接采用將瓶子一半正立一半倒置的裝載方式培養(yǎng)，未能確保所有瓶子內的培養(yǎng)基在培養(yǎng)之前均能與瓶壁和膠塞充分接觸；培養(yǎng)室設置的溫控探頭位置與溫度分布試驗結果無對應關系，設置的溫度超標報警系統(tǒng)未進行確認。

記錄缺失：GMP要求，所有與質量相關的活動均應當有記錄，記錄缺失是GMP檢查中普遍存在的問題。常見記錄缺失缺陷主要為，缺少在線懸浮粒子的監(jiān)測數(shù)據(jù)和B級背景沉降菌／浮游菌的數(shù)據(jù)；未記錄操作人員進出潔凈區(qū)時間和表面微生物的監(jiān)測情況；未記錄維修工模擬了哪些操作，帶入了什么工具等；未記錄滅菌后的配液系統(tǒng)、工作服、容器具、西林瓶、膠塞等放置多長時間后使用；對灌裝過程中模擬干預的動作、頻次等的記錄不具體；未記錄報廢品的原因及數(shù)量；未記錄針頭更換、設備維修與停機的時間；未記錄所用培養(yǎng)箱的設備編號、培養(yǎng)溫度、放入時間、培養(yǎng)數(shù)量等信息；未記錄模擬產(chǎn)品在凍干機中的裝載方式；缺少培養(yǎng)基的批號、配制過程、靈敏度試驗及促生長試驗記錄；操作人員無菌性檢查未記錄取樣時間。

最差條件選擇：最差條件是指與正常生產(chǎn)條件相比，更有可能造成工藝或生產(chǎn)失敗的條件[7]。企業(yè)在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中對最差條件常常選擇不當，主要存在的缺陷為，沒有挑戰(zhàn)灌裝器具（包含玻瓶、膠塞、工作服、工器具）滅菌后存放的最長時間；未對實際生產(chǎn)時多臺分裝機同時分裝時的情景進行模擬；未根據(jù)企業(yè)生產(chǎn)實際情況模擬同一品種同一天內更換批號的操作；試驗前對環(huán)境分別進行了乳酸和甲醛的熏蒸，人為制造了良好的生產(chǎn)環(huán)境，導致評估結論不準確。

干擾設計：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗必須模擬所有正常生產(chǎn)中的活動，如取樣、加塞等，但生產(chǎn)中還有一些意外情況，如倒瓶、卡瓶、故障維修等，所以應按常規(guī)生產(chǎn)情況模擬影響無菌的關鍵操作和可能出現(xiàn)的各種干預。檢查中常見干擾設計缺陷主要為，未考慮理瓶期間分裝機隔離門開關次數(shù)、裝量檢查、卡塞，班次更替、維修人員進入等干預；缺少更換軌道和更換灌裝頭的模擬；實施干預的次數(shù)不能反映正常生產(chǎn)狀況（如正常生產(chǎn)時，每批加膠塞的次數(shù)約為30次，但模擬灌裝只設計了12次加塞操作；正常生產(chǎn)時每批產(chǎn)品灌裝過程中會有約16次檢查裝量，但模擬灌裝試驗只設計了12次）；干擾試驗中未包括A級區(qū)沉降菌更碟等操作；未模擬設備維修、停機等狀況。

偏差調查：試驗過程中應詳細記錄出現(xiàn)的偏差，并進行調查，但在檢查過程中，常常發(fā)現(xiàn)企業(yè)缺少偏差調查或偏差調查不充分的情況。常見的此類缺陷問題包括，對試驗中樣品染菌情況的調查不充分，不能確認調查結果與染菌的相關性；試驗中所使用的膠塞與實際生產(chǎn)用膠塞供應商不一致，未按偏差進行處理；試驗完成后未立即進入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，而是存放在常溫留樣室數(shù)日，對此偏差未開展評估；動態(tài)監(jiān)測懸浮粒子超過警戒限時未進行調查和處理。

2 改進建議與措施

為指導和規(guī)范無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)開展無菌工藝模擬試驗，國家食品藥品監(jiān)管管理總局食品藥品審核查驗中心2016年1月組織啟動了《無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）》和《無菌工藝模擬試驗指南（無菌制劑）》，并于2016年12月向社會公開征求意見，目前尚未正式頒布。GMP的認證實施，使大部分藥品生產(chǎn)企業(yè)的管理水平得到了提升，特別是硬件設施的保證有了很大提高。GMP要求企業(yè)進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗，以確保無菌生產(chǎn)過程的可靠性，為企業(yè)及時識別風險和改進無菌控制措施提供數(shù)據(jù)支持[8－10]。

針對培養(yǎng)基模擬灌裝試驗相關認證缺陷發(fā)生比例較高的7個方面，擬訂具體改進措施如下。

人員與培訓方面：試驗的參與人員應包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測和設備設施維護人員，且還需通過文件或其他方式確認各人員可以進入的區(qū)域和允許的無菌操作項目。只有經(jīng)過專門培訓并經(jīng)批準的人員方可進入無菌生產(chǎn)潔凈區(qū)內，只有按照要求參加過培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的人員才能直接參與實際生產(chǎn)，并且無菌生產(chǎn)的培訓、人員考核等原則也同樣適用于無菌取樣、微生物分析人員。

試驗方案設計：企業(yè)應對無菌生產(chǎn)過程開展系統(tǒng)性風險評估，以充分識別無菌生產(chǎn)過程中潛在的風險點，重點關注操作時限和“開放”操作[11]。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件：要注意培養(yǎng)基類型的合理選擇及工藝過程中微生物生長的影響，避免出現(xiàn)假陰性結果。培養(yǎng)基一般選用廣譜培養(yǎng)基，如果在環(huán)境監(jiān)控中或在成品的無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生物，則需要評估增加厭氧培養(yǎng)基，為避免培養(yǎng)基因過度滅菌或其他工藝條件造成促生長性能的降低，均應進行促生長能力試驗，試驗用菌應包含藥典要求的6種試驗菌[12]。

記錄缺失：企業(yè)應采取上下聯(lián)動的方式，首先制訂出合理的操作性強的試驗方案和操作規(guī)程，還要同時設計出合理的記錄表格，便于操作人員填寫。完整和準確的記錄能保證藥品放行責任人完全掌握藥品是否能放行的所有信息，便于出現(xiàn)偏差和失敗結果時進行事后調查分析和原因查找[13－14]。

最差條件選擇：值得注意的是，最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境，而是可以考慮選擇單批產(chǎn)品無菌生產(chǎn)周期末端、間歇式生產(chǎn)的空調系統(tǒng)重新開啟后或連續(xù)生產(chǎn)期間周期性滅菌最長的時間間隔，設備、工器具、無菌器具滅菌后最長的放置時間，培養(yǎng)基在灌裝前保存在儲罐中的最長工藝允許時間，試驗時間涵蓋最長實際生產(chǎn)時間、生產(chǎn)過程人數(shù)允許最多等最差條件。并結合生產(chǎn)實際操作過程中出現(xiàn)的各種狀況進行模擬，盡量選擇極端的條件。

干擾設計：干擾措施應模擬實際運行時可能發(fā)生的情況，應詳細記錄所有發(fā)生的干預措施，但不得挑戰(zhàn)不合理的干預，如模擬停電等情況。

偏差調查：特別是對于發(fā)現(xiàn)污染瓶的調查應從人、機、料、法、環(huán)各個方面開展，可以借助各種分析工具，以保證調查的全面性和科學性，所有調查均需要詳細記錄，并根據(jù)調查結果采取針對性的措施，然后重新進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗。此外，對于污染的調查應將發(fā)現(xiàn)的污染微生物進行鑒別，并對上一次培養(yǎng)基模擬灌裝試驗后生產(chǎn)的產(chǎn)品進行充分評估。影響產(chǎn)品無菌的因素相當多，試驗結果的分析和調查是整個試驗的重點與難點，即使結果不合格，仍需進行大量的調查，并采取有效的糾偏措施，不能簡單斷定試驗無效[15]。