浙江野生三葉青的規(guī)?；M培育苗

三葉青具有活血祛風(fēng)、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒、抗腫瘤等功效，用于治療不明原因的高熱，對(duì)各種炎性水腫、肺炎、肝炎、腎炎、癌癥有奇效。在現(xiàn)代中藥上，三葉青直接用于治療外科傷口感染，療效顯而易見。病人在用藥后的24 h內(nèi)，可見傷口周圍的組織紅腫明顯消退，體溫及局部組織溫度下降，傷口分泌物減少，干燥，結(jié)痂，愈合迅速，效果明顯，優(yōu)于西藥的抗生素，且無副作用，無抗藥性，被稱為“植物抗生素”。

臨床研究已經(jīng)表明，長(zhǎng)期服用三葉青無任何毒副作用，在臨床和民間應(yīng)用中尚無出現(xiàn)耐藥性，在治療過程中攻補(bǔ)兼施，除了直接的治療作用外，三葉青還可以通過增強(qiáng)人體的細(xì)胞免疫和體液免疫，實(shí)現(xiàn)免疫系統(tǒng)的防御、自穩(wěn)、監(jiān)視功能，及時(shí)清除變異細(xì)胞，正因?yàn)槿绱耍~青被越來越多的應(yīng)用于防腫瘤和抗腫瘤。其藥食兼用性、治療與預(yù)防的兩用性更是有利于三葉青的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)。

野生三葉青通常生長(zhǎng)于海拔300～1300 m的山坡林下灌叢、山谷溪邊林下巖石縫中。人們受經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，大量采挖導(dǎo)致野生三葉青數(shù)量劇減，在很多自然分布區(qū)由原先的隨處可見減少為片狀或零星分布，三葉青野生資源逐漸成為一種瀕危植物。因此，十分必要對(duì)野生三葉青資源進(jìn)行系統(tǒng)整理篩選、馴化與人工培育研究。

基于之前研究的基礎(chǔ)上，選用適應(yīng)性強(qiáng)、功效成分高的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)三葉青品系作為試驗(yàn)材料，通過系統(tǒng)的對(duì)比試驗(yàn)后提出了適合規(guī)?；a(chǎn)的三葉青組培快繁體系，希望借此解決野生三葉青轉(zhuǎn)變?yōu)樵耘喾N的關(guān)鍵技術(shù)。

一、外植體的選擇和處理

（一）外植體的選擇

一般選擇無病蟲害、無病毒侵染的，生長(zhǎng)健壯的，當(dāng)年生嫩枝加工外植體。三葉青組培通常以莖尖、帶腋芽的莖段和葉片為外植體，研究證明，三葉青種苗規(guī)?；M培生產(chǎn)時(shí)以帶腋芽的莖段做外植體為好。

（二）外植體的處理

1．外植體清洗消毒

先將采集的三葉青嫩枝，用柔軟毛刷配合洗滌劑洗去表面塵土，再將其置于水龍頭下以流水沖洗10～20 min，然后在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行表面消毒。具體方法是：將外植體嫩枝先放入75%的乙醇溶液中浸泡10 s后，用無菌水洗凈，再放入0．1%HgCl2或 2% 次氯酸鈉溶液中消毒10～20 min后，用無菌水沖洗3～5次。

2．外植體的切段

取出莖段，置于滅過菌的培養(yǎng)皿中，用濾紙吸干表面水分，在超凈工作臺(tái)上，用滅過菌的解剖刀、鑷子將嫩枝均勻切分成大小約0．8～1．0 cm的小段，每段含1個(gè)腋芽。腋芽朝上，接種于事先準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶5～10株。

二、初代培養(yǎng)

（一）培養(yǎng)基

基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。植物激素為：0．3～0．5 mg/L 濃度的芐氨基腺嘌呤（6-BA）和 0．01～0．05 mg/L濃度的萘乙酸（NAA）

（二）培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度為25±2 ℃。前期暗培養(yǎng)，待有芽萌發(fā)后光照強(qiáng)度3000～5000 lx培養(yǎng)，每天的光照時(shí)間為10～12 h，待組培苗生長(zhǎng)滿瓶后再進(jìn)行增殖培養(yǎng)。

三、增殖培養(yǎng)

（一）增殖培養(yǎng)基

基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。植物激素為：2．0～4．0 mg/L 濃度芐氨基腺嘌呤（6-BA）和 0．1～0．3 mg/L濃度的萘乙酸（NAA）。

（二）增殖培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度為25±2 ℃。光照強(qiáng)度3000～5000 lx，每天的光照時(shí)間為10～12 h。待組培苗株高長(zhǎng)至2 cm，可以將小苗切斷進(jìn)行生根培養(yǎng)。

四、生根培養(yǎng)

（一）生根培養(yǎng)基

基本培養(yǎng)基為1/2 mS培養(yǎng)基。植物激素為 0．5～2．0 mg/L 濃度的吲哚丁酸（IBA）。

（二）生根培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度為25±2 ℃。光照強(qiáng)度3000～5000 lx，每天的光照時(shí)間為10～12 h。待組培苗株高長(zhǎng)至5 cm，可以將組培苗著手進(jìn)行煉苗和移植。

五、組培苗移植

（一）基質(zhì)配制

以70%細(xì)泥土+20%泥炭+5%珍珠巖+3%緩釋肥+2%草木灰作移栽基質(zhì)，總體要求疏松透氣且有一定肥力，將 pH 值調(diào)節(jié)為 5．5～6．0。

（二）煉苗和栽植

移植前，將培養(yǎng)瓶按批次分層放置在溫室自然散射光下，盡量減少彼此遮光。先封口煉苗3～7 d，然后再開口煉苗3～7 d，開口煉苗時(shí)可在培養(yǎng)基表面灑薄薄一層水，最好能將溫度控制在25±4 ℃。

煉苗完成后，繼續(xù)加水將培養(yǎng)基打散倒出，用清水仔細(xì)將小苗根部附著的培養(yǎng)基清洗干凈后，栽植于72穴穴盤中。根據(jù)環(huán)境溫度及光照條件，適時(shí)選擇將穴盤置于溫室或陰棚下進(jìn)一步培育壯苗。

六、移栽后的管理

三葉青移栽后的管理內(nèi)容主要是水分管理及光照和溫度條件控制，同時(shí)需注意適當(dāng)施肥。移栽時(shí)澆足水分，以后每2～3 d淋水1次。移植后14～21 d，育苗環(huán)境相對(duì)濕度控制宜在80%～90%，當(dāng)?shù)谝黄氯~完全張開后，降低濕度至60%～70%。移栽28天內(nèi)，光照強(qiáng)度控制在2000～3000 lx，28天后逐漸增大光照強(qiáng)度至3000～6000 lx。整個(gè)育苗期，溫度宜控制在15～30 ℃。

移栽后第28～56 d，每 7天噴施液肥1次，通常選擇濃度為0．3%的磷酸二氫鉀肥液。

三葉青苗期病蟲害較少，可通過降低濕度、加強(qiáng)通風(fēng)、保持生產(chǎn)環(huán)境清潔、及時(shí)清除病殘株等方法防治病害；可采用殺蟲燈、黏蟲板、防蟲網(wǎng)減輕蟲害。

七、出圃標(biāo)準(zhǔn)

由于各地栽培的三葉青來源地復(fù)雜，品種也較多，彼此間生物學(xué)特性差異較大，所以三葉青商品苗分級(jí)與出圃標(biāo)準(zhǔn)目前難以確定。出于對(duì)商品苗在移入大田后能盡快緩苗、快速生長(zhǎng)的普遍要求，我們考慮主要從培育時(shí)間及生物學(xué)性狀兩方面來界定三葉青商品苗的出圃標(biāo)準(zhǔn)。即組培苗移栽培育90天左右，植株生長(zhǎng)健壯、根系發(fā)達(dá)、無病蟲害。新根3條以上，新葉3～5片，葉色翠綠即可出圃。