巨細胞病毒性肺炎兒童體內(nèi)淋巴細胞亞群的變化特點

宋恩杰

人巨細胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)是具有雙螺旋結(jié)構(gòu)的DNA病毒，屬于皰疹病毒科中的β亞科。HCMV可以感染成年人但并不發(fā)病，當機體處于免疫功能低下時HCMV可以發(fā)生活動性感染。我國屬于巨細胞病毒(CMV)感染的高發(fā)區(qū)域，特別是兒童由于機體的免疫力低下，容易發(fā)生CMV活動性感染，以CMV肺炎常見[1-3]。當CMV病毒侵入兒童體內(nèi)并引起活動性感染后，CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞亞群的數(shù)量會發(fā)生相應的變化，因此分析CMV感染的患兒淋巴細胞亞群對于診斷CMV活動性感染情況有著診斷價值[4]。本研究在此基礎(chǔ)上，通過CMV-pp65抗原檢測結(jié)果將CMV肺炎患兒分為CMV肺炎高活動性感染組和CMV肺炎活動性感染組，并檢測各組兒童外周血液中CD3+T淋巴細胞、CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞的比例，為臨床輔助診斷CMV肺炎提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年11月至2016年12月在我院收治的幼兒CMV肺炎感染者共102例，其中男67例，女35例，年齡1～2.5歲，平均(1.7±0.2)歲。同時選取健康的兒童外周血液標本15例作為對照組。本研究經(jīng)我院倫理學委員會批準，選擇研究納入人群均獲得其兒童監(jiān)護人的同意并簽署知情同意書。

1.2 試劑及檢測方法 CMV-pp65抗原檢測：采用CMV BriteTM Turbo Kit試劑盒(荷蘭IQ公司)通過ELISA法定性檢測患兒血液中CMV-pp65抗原。CD3、CD4和CD8檢測：CD3、CD4和CD8抗體購買于美國BD公司，使用破膜固定液將白細胞分離后，使用PBS將白細胞密度調(diào)整為5×106/mL細胞懸液，取出195 μL，并加入5 μL CD11b流式抗體，避光保存20 min后，采用流式細胞儀檢測。

1.3 CMV活動性感染診斷標準 兒童外周血中CMV-pp65抗原檢測陽性，CMV-pp65抗原檢驗陽性細胞＞100個/5×104WBC為高活動性CMV感染，CMV-pp65抗原檢驗陽性細胞＜100個/5×104WBC診斷為CMV活動性感染。

兒童CMV肺炎的診斷標準參照1998年有中華醫(yī)學會兒科分會制定的《CMV感染診斷方案》[5]：①從兒童受檢的血、尿、唾液或組織等任何一種中分離出CMV。②用特異的單克隆抗體從受檢的組織或細胞中檢測到CMV抗原如IEA、FA或pp65等。③從外周血白細胞中查得CMV抗原(以上3項中有任何一項陽性時，不僅可以診斷CMV感染，并能診斷為產(chǎn)毒性感染)。④用分子雜交或PCR法從受檢材料中檢出CMV-mRNA，表明產(chǎn)毒性感染，如檢出CMV-DNA特異片段，只能表明CMV感染，不能區(qū)分為產(chǎn)毒性或潛伏性感染。

1.4 統(tǒng)計學分析 數(shù)據(jù)分析使用SPSS 19.5軟件完成，以(±s)表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 CMV-pp65抗原檢測結(jié)果 根據(jù)CMV-pp65抗原檢測結(jié)果，將CMV肺炎的患兒分為CMV高活動性感染組和CMV活動性感染組。其中兒童CMV高活動性感染組21例，占實驗組中兒童總數(shù)的20.59%，CMV活動性感染組81例，占實驗組中兒童總數(shù)的79.41%。

2.2 CMV肺炎患兒體內(nèi)的T淋巴細胞亞群的變化比較 在CMV肺炎高活動性感染組患兒體內(nèi)，與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；在CMV肺炎活動性感染組患兒體內(nèi)，與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，表1)。

表1 CMV肺炎患兒體內(nèi)的T淋巴細胞亞群的變化比較(±s) 單位：%

表1 CMV肺炎患兒體內(nèi)的T淋巴細胞亞群的變化比較(±s) 單位：%

注：與健康對照組比較，*P＜0.05。

組別 例數(shù) CD3+T淋巴細胞 CD3+CD4+T淋巴細胞 CD3+CD8+T淋巴細胞CMV高活動性感染組 21 71.35±2.58* 30.31±2.47* 41.36±1.24*CMV活動性感染組 81 74.89±1.78* 45.69±3.11* 33.39±2.01*健康對照組 15 85.22±3.13 65.41±4.34 21.58±2.43

3 討論

兒童由于免疫力低下容易誘發(fā)丙肝病毒、柯薩奇B病毒、風疹病毒、流行性腮腺炎病毒、輪狀病毒和CMV等病毒感染[6]。巨細胞病毒是已知的病原微生物中最容易引起兒童急、慢性感染的病毒之一，而且巨細胞病毒具有潛伏-活化的生物學特征，有研究顯示1周歲兒童CMV抗原的陽性檢出率高達80%，一旦兒童的免疫功能低下時，就可以直接誘發(fā)巨細胞病毒的活化并最終導致CMV活動性感染，其臨床表現(xiàn)以兒童CMV肺炎最為常見[7]。在早期由于缺乏特異性的檢測指標，因此極易引起誤診，造成病情延誤。同時，CMV具有泛嗜性的特點，特別是在免疫力低下的患者中，CMV感染可以引起多個器官的病變，而且臨床表現(xiàn)往往不典型，臨床上鑒別診斷CMV感染十分困難。因此，臨床上應對兒童巨細胞病毒性肺炎引起高度重視，及時完善相關(guān)檢查，做好鑒別診斷并采用適當治療方案，實現(xiàn)搶先治療，以改善兒童病情及預后，提高兒童生存質(zhì)量。

目前，對兒童CMV肺性肺炎主要依靠CMV-pp65抗原檢測和CMV基因的PCR檢查，其中CMV基因的PCR檢查是應用最為廣泛的檢查手段，但是這種方法的假陽性率高，因此CMV-pp65抗原檢測逐漸發(fā)展為診斷CMV感染的金標準[8-10]。CMV-pp65抗原檢測的優(yōu)點是可以有效的檢出CMV的活動性感染，而且通過陽性檢出的數(shù)量可以判斷CMV感染的情況，但這種方法耗時長，成本高，而且需要人工計數(shù)。由于CMV病毒在感染機體后，人體內(nèi)的T淋巴細胞活化并清除體內(nèi)的CMV，因此患兒體內(nèi)的T淋巴細胞亞群也隨之發(fā)生改變。這種變化可以從一定程度上反映出機體的免疫功能和病情，為判斷患兒的感染狀況提供參考依據(jù)。

在1～6歲兒童外周血中T淋巴細胞的比例明顯高于成人，約占白細胞總數(shù)40%～70%，而在CMV感染的過程中，T淋巴細胞介導的細胞免疫對CMV的清除發(fā)揮了關(guān)鍵作用[11]。其中CD3+的細胞為T淋巴細胞，CD3+CD4+陽性為輔助性T淋巴細胞，CD3+CD8+陽性為抑制性T淋巴細胞[12]?，F(xiàn)有的研究顯示[13]，MHCⅡ類分子可以將CMV基因中US2-11編碼的蛋白通過抗原提呈給CD4+和CD8+T淋巴細胞進行識別和殺傷，從而改變T淋巴細胞亞群的免疫功能，因此T淋巴細胞亞群的變化與病毒復制的活動程度密切相關(guān)。在CMV肺炎高活動性感染組患兒體內(nèi)，CD3+T淋巴細胞、CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞的比例分為(71.35±2.58)%、(30.31±2.47)%和(41.36±1.24)%，與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學意義；在CMV肺炎活動性感染組患兒體內(nèi)，CD3+T淋巴細胞、CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞的比例分為(74.89±1.78)%、(45.69±3.11)%和(33.39±2.01)%，與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。由此可見，當CMV肺炎活動性感染嚴重時，患兒體內(nèi)CD3+T淋巴細胞和CD3+CD4+T淋巴細胞比例下降，而CD3+CD8+T淋巴細胞則相反，而這種變化特點與CMV-pp65抗原檢測結(jié)果相對應，因此可為臨床輔助診斷CMV肺炎提供參考依據(jù)。

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