原癌基因和鏈蛋白在肝癌中的表達(dá)及臨床意義

王娟+黃炳臣+盧運(yùn)龍+羅春英+吳雪銘+馬鳳艷+成迎迎+龍喜帶+黃小英

【摘要】目的探討原癌基因（c-myc）和β-鏈蛋白（β-catenin）在肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC，以下簡稱“肝癌”）中的表達(dá)及意義。方法通過免疫組化EnVision法檢測108例肝癌組織及癌旁組織中c-myc和β-catenin的表達(dá)，觀察c-myc和β-catenin在肝癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果c-myc和β-catenin在肝癌組織中的表達(dá)率分別為42.59%（46/108）和40.74%（44/108），c-myc和β-catenin在癌旁組織中陽性率分別為1481%（16/108）和4.63%（5/108），二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。c-myc和β-catenin在癌組織中的表達(dá)與腫瘤分化程度相關(guān)（P<0.001），與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個(gè)數(shù)、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（P>005）。結(jié)論在肝癌組織中c-myc和β-catenin表達(dá)密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】c-myc；β-catenin；肝癌；表達(dá)；臨床意義

中圖分類號(hào)：R735.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2017.06.001

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and significance of c-myc and β-catenin in HCC（Hepatocellular carcinoma）.MethodsThe relationship between c-myc and β-catenin expression in HCC and the clinicopathological characteristics was observed through respectively detecting the expression of c-myc and β-catenin in 108 cases of HCC tissues and adjacent tissues by Immunohistochemical EnVision method.ResultsThe expression rate of c-myc and β-catenin in HCC tissues was 42.59%（46/108）and 40.74%（44/108）respectively，and the positive rate of them in the adjacent tissues was 1481%（16/108）and 4.63%（5/108），respectively，so difference between the two groups was statistically significant（P<0001）.The expression of c-myc and β-catenin in cancer tissues was correlated with the degree of tumor differentiation（P<0001），but it was not statistically related to age，sex，tumor thrombus，tumor number，tumor diameter and cirrhosis of adjacent tissues（P>0.05）.ConclusionThe expression of c-myc and β-catenin in HCC tissues was closely related.

【Key words】c-myc；β-catenin；HCC；expression；clinical significance

肝癌（HCC）是最常見的惡性腫瘤，是多基因突變、多因素和多步驟的復(fù)雜過程。近年來肝癌的發(fā)病率和死亡率呈逐步上升趨向[1]。該病具體的發(fā)病機(jī)制仍是研究熱點(diǎn)。由于肝癌早期癥狀隱匿、進(jìn)展迅速，很多患者臨床確診時(shí)已為晚期。原癌基因（c-myc）是細(xì)胞增殖的重要調(diào)節(jié)因子，與多種腫瘤發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。β-鏈蛋白（β-catenin）是一種通過參與信號(hào)傳導(dǎo)、影響腫瘤發(fā)生發(fā)展的癌基因。筆者應(yīng)用免疫組化方法檢測c-myc和β-catenin在肝癌中的表達(dá)情況，分析它們表達(dá)的相關(guān)性及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。1資料與方法1.1一般資料收集2013年5月至2017年5月在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院手術(shù)的108例肝癌患者癌組織以及相應(yīng)的癌旁組織作為研究對(duì)象，其中男性患者95例，女性患者13例，年齡22～74歲?；颊咝g(shù)前均未進(jìn)行任何抗癌診斷及治療，每例均取肝癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁肝組織（距腫瘤邊緣2 cm），且所有病例均無明確肝外轉(zhuǎn)移。按Edmondson分級(jí)法進(jìn)行分級(jí)：Ⅰ～Ⅱ級(jí)為高分化75例，Ⅲ～Ⅳ級(jí)為低分化33例。臨床資料包括患者的姓名、性別、年齡；病理資料包括腫瘤直徑、腫瘤個(gè)數(shù)、癌旁組織伴肝硬化、門脈癌栓等。

1.2檢測方法肝癌手術(shù)切除的所有標(biāo)本經(jīng)10%的福爾馬林固定24 h，常規(guī)石蠟包埋切片。免疫組化染色EnVision兩步法，DAB顯色。c-myc和β-catenin抗體和試劑盒均購自福州邁新，所有操作步驟均按照說明書上進(jìn)行。用PBS緩沖液作為一抗陰性對(duì)照。

1.3免疫組化結(jié)果判定β-catenin蛋白的陽性定位于細(xì)胞核，以核內(nèi)有明顯的棕色顆粒作為核陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)；c-myc陽性定位于細(xì)胞核，以核內(nèi)有明顯的棕色顆粒作為核陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料的組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用MeNemar相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1肝癌組織和癌旁組織中c-myc和β-catenin的表達(dá)肝癌組織病理形態(tài)學(xué)發(fā)生改變（圖1-A），c-myc陽性表達(dá)著色位于胞核，呈棕黃色（圖1-B）；β-catenin陽性表達(dá)位于胞核，呈棕黃色（圖1-C）。c-myc在肝癌組織、癌旁組織中陽性率分別為42.59%（46/108）和1481%（16/108）；β-catenin在肝癌組織、癌旁組織中陽性率分別為40.74%（44/108）和4.63%（5/108），二者差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。見表1。endprint

2.2肝癌組織中c-myc和β-catenin的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系c-myc和β-catenin在HCC中的表達(dá)與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個(gè)數(shù)、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無顯著性相關(guān)（P>0.05），與HCC組織分化程度有顯著相關(guān)性（P<0.001）。見表2。

2.3c-myc和β-catenin在肝癌中表達(dá)的相關(guān)性c-myc和β-catenin均為陽性表達(dá)30例，均為陰性表達(dá)48例，依據(jù)MeNemar的相關(guān)性分析，二者在肝癌中表達(dá)呈正相關(guān)性（r=0.855，P<0.001）。見表3。

3討論目前為止，HCC的發(fā)病機(jī)制尚不是十分明確，主要是通過各基因的表達(dá)產(chǎn)物作用于肝癌細(xì)胞的增殖、分化、代謝過程，最終導(dǎo)致肝細(xì)胞癌變。

c-myc是一種基因核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖及分化。研究發(fā)現(xiàn)，致癌基因c-myc擴(kuò)增或過表達(dá)參與多種腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移[2]，在腫瘤的分化及預(yù)后方面起到關(guān)鍵作用[3]，其表達(dá)紊亂時(shí)會(huì)造成癌基因的激活，促進(jìn)胃癌程序性細(xì)胞死亡[4]，它的異常表達(dá)參與胃癌的增殖及分化[5]。c-myc等多種原癌基因的激活及p53等抑癌基因的失活在肝癌形成的過程中起到至關(guān)重要的作用。此外，c-myc癌基因連續(xù)激活時(shí)可引起肝細(xì)胞的增殖和選擇性轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致HCC的發(fā)生。黃炳臣等[6]檢測81例肝癌組織發(fā)現(xiàn)c-myc參與肝癌的形成，且與肝癌的分化密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，c-myc在癌組織中陽性表達(dá)顯著高于癌旁組織，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明c-myc的異常表達(dá)與肝癌的發(fā)生有密切的聯(lián)系。我們還發(fā)現(xiàn)c-myc在HCC中的表達(dá)與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個(gè)數(shù)、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)，與HCC分化程度有關(guān)，此結(jié)果與某些文獻(xiàn)報(bào)道相一致，表明c-myc參與肝癌的形成，且可能與肝癌的分化程度有關(guān)。

Wnt信號(hào)通路主要有3條信號(hào)通路構(gòu)成，Wnt/β-catenin信號(hào)通路是經(jīng)典Wnt信號(hào)通路。迄今為止，Wnt/β-catenin是最受重視的信號(hào)通路，涉及多種腫瘤的形成機(jī)制。研究[7～9]發(fā)現(xiàn)在惡性腫瘤的細(xì)胞核中，Wnt/β-catenin異常的積聚與腫瘤預(yù)后不良有關(guān)。已有文獻(xiàn)猜測Wnt/β-catenin信號(hào)通路可能參與了肝細(xì)胞癌變的過程。劉銘等人[10]通過110例肝癌標(biāo)本發(fā)現(xiàn)β-catenin在HCC中的異常表達(dá)與腫瘤分化、被膜浸潤等因素有關(guān)。Evason等[11]研究發(fā)現(xiàn)β-catenin在肝細(xì)胞癌早期發(fā)生改變、胞肝癌發(fā)生機(jī)制中起著重要作用。劉德忠等[12]用免疫組化檢測83例肝癌組織發(fā)現(xiàn)β-catenin與肝癌的分化有關(guān)，癌組織分化越低其陽性表達(dá)越高，此外其表達(dá)紊亂對(duì)肝癌患者的預(yù)后有一定的影響。Witjes等[13]發(fā)現(xiàn)β-catenin與HCC組織學(xué)分化程度相關(guān)，低分化癌細(xì)胞中β-catenin表達(dá)升高。另外有文獻(xiàn)認(rèn)為阻斷β-catenin的異常表達(dá)，可提高患者預(yù)后的情況，可為臨床上治療肝細(xì)胞癌提供一些新的思路。我們的研究結(jié)果顯示，β-catenin在肝癌組織中陽性表達(dá)明顯高于癌旁組織，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明β-catenin的異常表達(dá)參與肝癌的形成。我們研究還發(fā)現(xiàn)β-catenin在HCC中的表達(dá)與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個(gè)數(shù)、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)，與HCC組織分化的程度有關(guān)，與某些文獻(xiàn)報(bào)道相一致，表明在肝癌中存在β-catenin胞核的異常積聚，猜測該因子在肝癌發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。

本研究對(duì)c-myc和β-catenin進(jìn)一步行MeNemar相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)二者表達(dá)有密切相關(guān)性，呈正相關(guān)。程云娟等[14]檢測40例肝癌樣本發(fā)現(xiàn)c-myc和β-catenin的異常表達(dá)與肝癌的發(fā)生相關(guān)，且可以用于評(píng)估肝癌發(fā)病程度的進(jìn)展及預(yù)后。姚忠強(qiáng)等[15]研究發(fā)現(xiàn)肝外轉(zhuǎn)移、術(shù)后復(fù)發(fā)及腫瘤分化的程度都與c-myc和β-catenin的異常表達(dá)有關(guān)，表明c-myc和β-catenin二者在肝癌形成的過程中起到協(xié)同作用，二者具有細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)增殖和癌變的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，即Wnt途徑。但本課題目前僅研究二者在蛋白水平的表達(dá)，二者在基因水平的表達(dá)與蛋白水平的表達(dá)是否具有一致性尚不是非常明確，因此需進(jìn)一步檢測c-myc和β-catenin在基因程度中的表達(dá)，明確其與腫瘤分化、增殖及凋亡之間的關(guān)系。

綜上所述，c-myc和β-catenin參與肝癌的形成，可能作為判斷惡性腫瘤的程度及轉(zhuǎn)移的重要依據(jù)。因此，深入研究c-myc和β-catenin二者在肝癌中的關(guān)系，為進(jìn)一步探討肝癌的具體發(fā)病機(jī)制提供新的思路。

參考文獻(xiàn)

[1] 張金梁，翟博，方泰石，等.晚期肝癌和復(fù)發(fā)性肝癌治療的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016，16（2）：358-361.

[2] Chang C，Liu J，He W，et al.A regulatory circuit HP1γ/miR-451a/c-Myc promotes prostate cancer progression[J].Oncogene，2017：332.[Epub ahead of print].

[3] 陳晨，郭遂群.子宮內(nèi)膜癌組織中DAPK3和c-Myc的表達(dá)及其與患者預(yù)后的關(guān)系[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，36（6）：863-869.

[4] 潘晟，羅浩，李力.胃癌變患者C-myc mRNA與幽門螺桿菌感染及細(xì)胞程序性死亡的關(guān)系[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2013，30（11）：2408-2410.

[5] Wang F，Zhang D，Mao J，et al.Morusin inhibits cell proliferation and tumor growth by down-regulating c-Myc in human gastric cancer[J].Oncotarget，2017，8（34）：57187-57200.endprint

[6] 黃炳臣，黃永秩，羅春英，等.肝細(xì)胞癌中c-myc和c-fos表達(dá)及意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2010，26（4）：484-486.

[7] Wang ZY，Zhang H，Hou JX，et al.Clinical implications of β-catenin protein expression in breast cancer [J].Int J Clin Exp Pathol，2015，8（11）：14989-14994.

[8] Di Bartolomeo M，Pietrantonio F，Pellegrinelli A，et al.E-cadherin，and β-catenin expression as prognostic biomarkers in patients with radically resected gastric cancer.[J].Gastric Cancer，2016，19（2）：412-420.

[9] Nazemalhosseini ME，Kashfi SM，Mirtalebi H，et al.Prognostic Significance of Nuclearp-Catenin Expression in Patients with Colorectal Cancer[J].Iran Red Crescent Med J，2015，17（7）：e22324.

[10] 劉銘，師藝，張巍，等.CK19及β-catenin在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，39（8）：1004-1011.

[11] Evason KJ，Grenert JP，F(xiàn)errell LD，et al.Atypical hepatocellular adenoma- like neoplasms with catenin activation show cytogenetic alterations similar to well-differentiated hepatocellular carcinomas[J].Hum Pathol，2013，44（6）：750-758.

[12] 劉德忠，常波，林飛翔，等.β-catenin在肝癌組織中的表達(dá)及對(duì)肝癌患者預(yù)后的影響[J].癌變畸變突變，2017，29（4）：300-303.

[13] Witjes CD，Ten Kate FJ，Verhoef C，et al.Immunohis chemical characteristics of heatocellular carcinoma in noncirrhotic liver[J].J Clin Pathol，2013，66（8）：687-691.

[14] 程云娟，羅新華，程明亮.AEG-1、β-catenin和C-myc在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的臨床特性與分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2015，22（7）：633-636.

[15] 姚忠強(qiáng)，歐超，朱波，等.β-catenin，cyclinD1及c-myc在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)[J].腫瘤防治研究，2006，33（12）：849-852.

（收稿日期：2017-09-21修回日期：2017-11-09）

（編輯：梁明佩）endprint