氣相色譜法測定藥用輔料苯甲醇含量

葛紅莉 吳愛莉

(南京威爾藥業(yè)股份有限公司，江蘇 南京 210047)

苯甲醇，又名芐醇，是一種無色透明的液體，隨著科學(xué)技術(shù)的日新月異，苯甲醇的用途越來越廣泛[1]。苯甲醇作為藥用輔料，在制劑中主要作用是止痛、防腐，因不良反應(yīng)，其止痛作用已經(jīng)弱化，主要用作防腐劑、抑菌劑，應(yīng)用于液體制劑及半固體制劑[2～4]。本品的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《中國藥典》2015年版四部[5]，為藥用輔料品種，藥典中含量測定采用氣相色譜法，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，該方法準(zhǔn)確性易受進(jìn)樣重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定性的影響。因此，擬建立氣相色譜法，以1,3-丁二醇為內(nèi)標(biāo)物測定苯甲醇的含量，該方法方法簡便，快速、靈敏、準(zhǔn)確，結(jié)果較滿意。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

⑴ 氣相色譜儀：GC-2014型氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器，日本島津(中國)有限公司。⑵ 分析天平：AL-204，梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 試劑

苯甲醇對照品(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，純度99.95%)；苯甲醇供試品(自制)；1,3-丁二醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，純度99.9%)、乙醇(美國ACS恩科化學(xué))。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；檢測器：FID；載氣為氮?dú)狻錃?、壓縮空氣(所有氣體經(jīng)凈化處理)流量都為1.2 mL/min；進(jìn)樣口溫度200 ℃；分流比100∶1；檢測器溫度250 ℃；柱溫130 ℃維持30 min；進(jìn)樣量：1 μL。

2.2 溶液配制

2.2.11,3-丁二醇內(nèi)標(biāo)溶液的制備

精密稱取1,3-丁二醇適量，用乙醇稀釋制成每1 mL中約含1 mg 1,3-丁二醇的溶液，做為1,3-丁二醇內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.2對照品溶液的制備

精密稱取苯甲醇對照品適量，用1,3-丁二醇內(nèi)標(biāo)溶液(1 mg/mL)稀釋制成每1 mL中約含苯甲醇對照品1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備

精密稱取苯甲醇供試品適量，用1,3-丁二醇內(nèi)標(biāo)溶液(1 mg/mL)稀釋制成每1 mL中約含苯甲醇供試品1 mg的溶液，作為供試品溶液。

2.2.4系統(tǒng)適用性溶液的制備

精密稱取苯甲醇對照品適量，用1,3-丁二醇內(nèi)標(biāo)溶液(1 mg/mL)稀釋制成每1 mL中約含苯甲醇對照品10 mg的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。

2.3 專屬性與系統(tǒng)適應(yīng)性考察

專屬性：精密量取空白溶液，1,3-丁二醇內(nèi)標(biāo)溶液、對照品溶液和供試品溶液，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，檢測結(jié)果見圖1～4，空白溶劑和內(nèi)標(biāo)物1,3-丁二醇在苯甲醇主峰位置未出現(xiàn)干擾峰，說明空白溶劑和內(nèi)標(biāo)物在苯甲醇含量測定中沒有干擾。

圖1 苯甲醇?xì)庀嗌V圖(空白溶液)Fig 1 Benzyl alcohol by gaschromatogram (blank solvent)

圖2 苯甲醇?xì)庀嗌V圖(1,3-丁二醇內(nèi)標(biāo)溶液)Fig 2 Benzyl alcohol by gas chromatogram (1,3-butanediol internal standard solution)

系統(tǒng)適應(yīng)性：取“2.2.4”項(xiàng)下系統(tǒng)適用性溶液檢測，結(jié)果表明，1,3-丁二醇與苯甲醇理論塔板數(shù)≥60 000，各峰之間分離度達(dá)到基線分離(R>2.0)，苯甲醇峰峰高為基線噪音的5倍以上，出峰峰形好(見表1)。

圖3 苯甲醇?xì)庀嗌V圖(對照品溶液)Fig 3 Benzyl alcohol by gas chromatogram(reference substance solution)

圖4 苯甲醇?xì)庀嗌V圖(供試品溶液)Fig 4 Benzyl alcohol by gaschromatogram (test solution)

品名分離度理論塔板數(shù)1,3-丁二醇66005苯甲醇34.1676825

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密稱取苯甲醇對照品，用1,3-丁二醇內(nèi)標(biāo)液(1 mg/mL)分別稀釋制成濃度為：0.2、0.6、0.8、1、1.2、1.4 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。取1 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以苯甲醇的濃度(C，mg/mL)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程為y=120 641.24x-5 005.73，r= 0.999 4。結(jié)果表明，苯甲醇的濃度在0.203 8～1.630 1 mg/mL范圍內(nèi)，與苯甲醇峰面積呈良好的線性關(guān)系(n=7)。

2.5 檢出限和定量限

精密配制苯甲醇對照品系列濃度溶液，取1 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以儀器3倍信噪比作為檢測限，10倍信噪比作為定量限，檢測得苯甲醇的檢測限為4 ng，定量限為20 ng。

2.6 精密度試驗(yàn)

按照“2.2.2”和“2.2.3”項(xiàng)中要求配制對照品溶液、供試品溶液，取1μL注入氣相色譜儀，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，對照品溶液苯甲醇峰面積RSD為1.79%；供試品溶液苯甲醇峰面積RSD為0.15%，RSD均小于2.0%，說明本法進(jìn)樣精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液6份，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果顯示，苯甲醇峰面積的RSD為0.30%，小于2.0%，說明本法重復(fù)性良好。

2.8 回收試驗(yàn)

精密稱定苯甲醇對照品適量，制成低、中、高3個不同濃度的對照品溶液，每種濃度各3份。注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算回收率(見表2)。

結(jié)果表明，三種濃度的對照品溶液的平均回收率為100.42、101.04、101.06%，RSD為0.55、1.17、1.04%，均小于2.0%，表明具有良好的準(zhǔn)確度(n=3)。

表2 苯甲醇加樣回收率結(jié)果Table 2 Recovery

2.9 耐用性試驗(yàn)

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下對照品溶液，另選用HP-INNOWAX氣相毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)和FFAP氣相毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm×0.5 μm)，分別對同一對照品溶液進(jìn)行測定，這2種不同型號的色譜柱對苯甲醇含量檢測結(jié)果與DB-WAX氣相毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)的檢測結(jié)果相近，說明本法色譜柱耐用性好。

2.10 樣品含量測定

精密稱取供試品(批號為20150924、20150925、20151012)，按照“2.2.3”項(xiàng)中要求配制供試品溶液，精密量取1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按照內(nèi)標(biāo)法計(jì)算供試品中苯甲醇的含量，檢測結(jié)果見表3。

表3 供試品測定結(jié)果Table 3 Results of test sousolutions

3 結(jié) 論

本文采用乙醇做空白溶劑，1,3-丁二醇為內(nèi)標(biāo)物，用氣相色譜儀測定苯甲醇含量，通過對專屬性、系統(tǒng)適用性、線性、檢出限、定量限、精密度、重復(fù)性等試驗(yàn)驗(yàn)證，得出本檢測方法操作簡單，快速、靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于測定苯甲醇含量。

[1] 袁雪芬,周樺.氣相色譜法測定化妝品中苯甲醇[J].中國公共衛(wèi)生,2000,16(4):322～322.

[2] Rowe RC,Sheskey PJ,Weller PJ編，鄭俊民主譯.藥用輔料手冊[M].化學(xué)工業(yè)出版社,2004:64～66.

[3] 孫占松.國內(nèi)苯甲醇生產(chǎn)及應(yīng)用分析[J].精細(xì)與專用化學(xué)品,2012,20(12):12～14

[4] 粟貴,劉雁鳴,李蘭 等.高效液相色譜法測定藥用輔料苯甲醇中苯甲酸和苯甲醛含量[J].中南藥學(xué),2014(12):1 239～1 241.

[5] 中國藥典2015年版.四部[S].2015:519.