芋兒七的成分鑒定及抗氧化作用

王曉梅 王怡捷 趙立芳 段宇航 王金鎖

(寶雞文理學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，陜西省植物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 寶雞 721013；*西安醫(yī)學(xué)院附屬寶雞醫(yī)院，陜西 寶雞 721000)

芋兒七，又名魚兒七、獅兒七、佛手七。為百合科延齡草屬植物延齡草TrillimtschonoskiiMaxim.的干燥根和根莖，是著名的太白山“七藥”之一。為多年生草本，生于海拔1300-2200米的山坡林下。性味：甘、辛，溫。功效：補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，止痛，止血，生肌。治療肝腎虛損、腰膝酸軟、關(guān)節(jié)不利、肢體麻木、頭暈、目眩、月經(jīng)不調(diào)、不孕不育、外傷出血等病[1,2]。芋兒七主要在當(dāng)?shù)孛耖g使用，且具有顯著的療效，但對(duì)其所含化學(xué)成分及有效部位的研究卻鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用各種化學(xué)方法對(duì)芋兒七的化學(xué)成分進(jìn)行初步的鑒定，并對(duì)芋兒七幾種提取物的抗氧化活性進(jìn)行探討，以期為太白草藥的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料、試劑與儀器

芋兒七(購于眉縣)，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)胡本祥教授鑒定。茚三酮(上海源葉生物公司)；α-萘酚(上海鼓臣生物)；三羥甲基氨基甲烷(上海探求生物技術(shù)有限公司)；鄰苯三酚(南京展云化工有限公司)；香草醛(阿拉丁試劑)；鹽酸，濃硫酸，酒石酸鉀鈉，無水碳酸鈉，次硝酸鉍，三氯化鐵，三氯化鋁，枸櫞酸，丙酮，醋酸鎂，95%乙醇，無水乙醇，氫氧化鈉，硫酸銅等均為市售分析純。

ZF-7型暗箱三用紫外線分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)；UV-1200紫外可見分光光度計(jì)(鄭州美譜達(dá)儀器有限公司)；DK-98-1電熱恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司)；KQ5200E型超聲波清洗器(上海市超聲儀器有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取物的制備

稱取粉碎的芋兒七，分別以水、95%乙醇及乙酸乙酯為溶劑，以質(zhì)體比1∶12浸泡提取芋兒七，超聲提取30 min，靜置后傾出上清液，沉渣再次提取，合并兩次的上清液，經(jīng)濃縮、干燥，研成粉末備用。

2.2 芋兒七提取物化學(xué)成分的鑒定

2.2.1氨基酸的鑒定

取芋兒七提取物溶液1 mL分別于試管中加入1%茚三銅試液2-3滴，加熱煮沸4～5 min，觀察現(xiàn)象。

2.2.2皂苷的鑒定

取芋兒七提取物溶液2 mL于帶塞試管中，用力振搖3 min，觀察現(xiàn)象。

2.2.3糖、多糖或苷類的鑒定

α-萘酚試驗(yàn)：取芋兒七提取物溶液1 mL加5%萘酚試液數(shù)滴振搖后，沿管壁滴入5-6滴濃硫酸，觀察現(xiàn)象。

斐林反應(yīng)：取2支試管，加入斐林試劑A和B各1.0 mL搖勻后分別加入取芋兒七提取物，搖勻后置沸水浴中加熱數(shù)分鐘，取出冷卻，觀察現(xiàn)象。

本尼迪哥特反應(yīng)：取芋兒七提取物1 mL于試管中，分別加入本尼迪哥特試劑2 mL置沸水浴中加熱數(shù)分鐘，取出冷卻，觀察各管顏色變化。

2.2.4鞣質(zhì)及酚類的鑒定

三氯化鐵試驗(yàn)：取芋兒七提取物溶液1 mL加1%三氯化鐵試液1～2滴，觀察現(xiàn)象。

香草醛試驗(yàn)：取芋兒七提取物溶液點(diǎn)于濾紙上，干后滴加1%香草醛，觀察現(xiàn)象。

2.2.5黃酮及苷類的鑒定

鹽酸—鎂粉試驗(yàn)：取芋兒七提取物溶液1 mL加少量鎂粉后加濃鹽酸4-5滴置沸水浴加熱2-3 min，觀察現(xiàn)象。

三氯化鋁試驗(yàn)：取芋兒七提取物溶液點(diǎn)于濾紙上，干后噴霧1%三氯化鋁乙醇試液，在紫外燈下觀察現(xiàn)象。

硼酸丙酮枸櫞酸丙酮試驗(yàn)：取芋兒七提取物溶液1 mL在沸水浴上蒸干加入飽和硼酸丙酮溶液及10%枸櫞酸丙酮液各0.5 mL，蒸去丙酮后，在紫外燈下觀察現(xiàn)象。

堿液試驗(yàn)：取芋兒七提取物溶液點(diǎn)于濾紙上，干后噴霧1%碳酸鈉，觀察現(xiàn)象。

2.2.6蒽醌類化合物的鑒定

Brongtrager’s反應(yīng)：取芋兒七提取物適量，加2%氫氧化鈉溶液數(shù)滴觀察顏色變化。

濃硫酸反應(yīng)：取樣品適量，滴加濃硫酸觀察顏色變化。

2.3 芋兒七提取物對(duì)超氧陰離子生成的影響

取10 mL試管，準(zhǔn)確量取pH 8.2的0.1 mol/L Tris-HCl緩沖液3.6 mL，去離子水3 mL和芋兒七提取物溶液(濃度分別為2 mg/mL，1 mg/mL，0.5 mg/mL，0.25 mg/mL，0.125 mg/mL，0.0625 mg/mL)1 mL，混合均勻，于25 ℃水浴保溫20 min后，立即加入25 ℃預(yù)熱的3 mmol/L鄰苯三酚溶液0.2 mL，反應(yīng)12 min后迅速倒入比色皿中，以0.1 mol/L Tris-HCl緩沖溶液作為參比，在345 nm處測定吸光度，記錄數(shù)據(jù)為A樣品，平行測三組，計(jì)算時(shí)取均值。以等體積去離子水代替鄰苯三酚溶液以扣除樣品本身的干擾，記錄數(shù)據(jù)為A樣品本體，平行測三組，計(jì)算時(shí)取均值。另設(shè)不加提取物溶液的空白組，記錄數(shù)據(jù)為A空白，平行測三組，計(jì)算時(shí)取均值。按下列公式計(jì)算抑制率。

3 結(jié)果與討論

3.1 芋兒七提取物中成分的鑒定

在茚三酮實(shí)驗(yàn)中兩種提取物均呈紫色，說明芋兒七醇提物和水提物中含有氨基酸。

芋兒七醇提物、芋兒七水提物在泡沫實(shí)驗(yàn)中均產(chǎn)生大量持久性的泡沫，說明兩種提取物都含有皂苷類物質(zhì)。

在α-萘酚試驗(yàn)中，兩種提取物均出現(xiàn)微紫色環(huán)，推斷芋兒七醇提物及水提物都含有糖類。在費(fèi)林試驗(yàn)和本尼迪特試驗(yàn)中醇提物分別呈磚紅色和黃綠色，水提取物均呈黃色，提示芋兒七醇和水提物都含有還原糖。

在三氯化鐵試驗(yàn)中，兩種提取物都出現(xiàn)藍(lán)綠色，在香草醛試驗(yàn)中，芋兒七醇提物和水提物均呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，說明芋兒七醇和水提物都含有酚類和鞣質(zhì)。

表1 芋兒七提取物中黃酮類的鑒定Table 1 Identification of flavonoids of extractsfrom Trillium tschonoskii Maxim.

由表1可知在四種實(shí)驗(yàn)條件下，提取物大多發(fā)生陽性反應(yīng)，提示兩種提取物中均含有黃酮類物質(zhì)。

在Brongtrager′s反應(yīng)中，醇和水提物均產(chǎn)生紅色物質(zhì)，在濃硫酸反應(yīng)中兩種提取物均呈深棕色，說明兩種提取物均含有蒽醌類物質(zhì)。

綜上可知，芋兒七中含有氨基酸，皂苷類，糖類，鞣質(zhì)和酚類物質(zhì)，黃酮類以及蒽醌類物質(zhì)。

3.2 芋兒七提取物對(duì)超氧陰離子的抑制作用

圖1 芋兒七提取物對(duì)超氧陰離子的抑制作用Fig 1 Inhibition on superoxide anion of extractsfrom Trillium tschonoskii Maxim.

由圖1可以看出，芋兒七三種提取物對(duì)超氧陰離子的生成均有不同程度的抑制作用。其中乙酸乙酯提取物在各濃度均有強(qiáng)的抑制作用，抑制率隨著提取物濃度的增大而增高，抑制率由66.7%增大到82.1%。芋兒七乙醇提取物對(duì)超氧陰離子的產(chǎn)生同樣有一定的抑制作用，但各濃度的抑制率均低于相應(yīng)濃度的乙酸乙酯提取物，最大抑制率為66.7 %。水提取物的抑制作用在低濃度時(shí)抑制作用很微弱，當(dāng)水提取物濃度大于0.25 mg/mL之后，抑制率急劇增高，水提物濃度為2 mg/mL時(shí)，抑制率高達(dá)84.6%。

藥用植物中含有多種成分且具有各種藥理作用。糖類是植物藥中最常見的成分，其中多糖具有各種藥理活性[3,4]。黃酮類在藥用植物中分布很廣，且藥理作用多種多樣[5]，如黃芩素可降壓、抑菌、利尿。槲皮素、杜鵑素有祛痰作用。蒽醌苷類大都有瀉下作用，有些可抗菌、抗腫瘤。人參皂苷具有強(qiáng)壯作用，柴胡皂苷有止咳、解熱鎮(zhèn)痛等作用等。鞣質(zhì)是具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的酚類化合物，也是藥用植物中最常見的一類成分，鞣質(zhì)在醫(yī)療上常用于收斂止血、止瀉、抗菌消炎等[6,7]。過氧化物質(zhì)是一類性質(zhì)活潑、具有很強(qiáng)氧化性的物質(zhì)，超氧陰離子是生物體細(xì)胞在新陳代謝過程中，氧分子受單一電子還原的產(chǎn)物。超氧陰離子若生成過量可造成DNA、蛋白質(zhì)的損傷進(jìn)而生物功能的異常。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)通過多種實(shí)驗(yàn)方法測得芋兒七中含有氨基酸，皂苷類，糖類，鞣質(zhì)和酚類物質(zhì)，黃酮類以及蒽醌類物質(zhì)。通過鄰苯三酚自氧化法，得知芋兒七乙醇提取物，芋兒七乙酸乙酯提取物，芋兒七水提取物對(duì)超氧陰離子的生成均有較強(qiáng)的抑制作用，進(jìn)而可發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。對(duì)芋兒七化學(xué)成分及藥理作用的深入研究將在今后的工作中繼續(xù)進(jìn)行。

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