丹參對(duì)大鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響

盧尚兵，金 昊，趙鑫鑫，朱 玲，李俊岑，曾 茜，李 龍，康春雨

(1.米蘭柏羽醫(yī)學(xué)美容醫(yī)院美容整形外科 四川 成都 610041；2.成都醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)技術(shù)教研室 四川 成都 610081)

皮膚創(chuàng)傷后修復(fù)過(guò)程復(fù)雜，大致經(jīng)歷以下三個(gè)階段：①止血和炎癥反應(yīng)階段；②細(xì)胞增殖分化階段；③組織重建或瘢痕形成階段[1]。如何縮短愈合周期，減少感染發(fā)生，是臨床外科醫(yī)生所面臨的難題。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[2]：丹參是皮膚愈合，創(chuàng)傷修復(fù)的良藥，但其中的分子機(jī)制尚待闡明。本文通過(guò)建立大鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)模型，探討丹參對(duì)傷口愈合的作用以及對(duì)創(chuàng)傷后血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表達(dá)的影響，為進(jìn)一步闡明其潛在的修復(fù)分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為臨床治療皮膚創(chuàng)傷提供新的思維。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：取3月齡SD品系大鼠36只，雌雄不限，體重200～220g，平均(200±20)g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(川)2013-15。

1.2 藥品和試劑：丹參注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字Z51021303，5支/盒，四川升和藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)）置冰箱4℃保存；免疫組化所用一抗：VEGF Antibody(貨號(hào)BA0407)，效價(jià)1:200，抗體來(lái)源為兔，購(gòu)自Boster Biological Technology；二抗：購(gòu)自中杉金橋的SP-9001兔SP檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：17173A02；B液：生物素化山羊抗兔二抗工作液；C液：辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器：智能程控生物組織自動(dòng)脫水機(jī)：TC-120（泰維科技生產(chǎn)）；生物組織自動(dòng)包埋機(jī)：TB-718（泰維科技生產(chǎn)）；輪轉(zhuǎn)切片機(jī)：RM2235（Leica BiosystemsNusslochGmbh生產(chǎn)）；電腦生物組織攤烤片機(jī)：KD-T（浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（型號(hào)：HROP-80AB，青島海爾特種電冰柜有限公司生產(chǎn)）；生物顯微鏡（型號(hào)：BA210，麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)）。均由成都醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)技術(shù)教研室提供。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 創(chuàng)傷模型制備：36只3月齡SD大鼠，隨機(jī)分為丹參組和對(duì)照組。將所有SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，實(shí)驗(yàn)前1d脫毛，稱重；用3.6%水合氯醛腹腔注射麻醉(劑量：1ml/kg) ，固定大鼠于手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)消毒；在距脊柱0.5cm處，用刀將1.5cm×1.5cm范圍內(nèi)的皮膚切除，但不傷及脊柱旁肌肉上的脂肪及筋膜，簡(jiǎn)單包扎后待后續(xù)處理。

1.4.2 創(chuàng)傷修復(fù)：造模成功后，大鼠單籠飼養(yǎng)。術(shù)后1h開(kāi)始用藥，丹參組用丹參注射液噴灑創(chuàng)面（劑量：1ml/只），對(duì)照組用相同劑量的生理鹽水噴灑創(chuàng)面。各組每日09:00、18:00各噴1次，持續(xù)1周，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，供給清潔水，動(dòng)物飼養(yǎng)室溫維持在25℃～30℃，鼠籠每隔2d重?fù)Q墊料。

1.4.3 組織取材：按術(shù)后1d、3d、7d時(shí)間點(diǎn)取材，取材前行3.6%水合氯醛腹腔注射麻醉，切取距離創(chuàng)緣8mm以內(nèi)的皮膚全層組織，置于4%多聚甲醛溶液中固定。

1.4.4 HE染色和免疫組織化學(xué)染色（immunohistochemistry staining, IHC）：標(biāo)本用4%多聚甲醛固定后制作5μm厚的石蠟切片。每例標(biāo)本間隔取石蠟切片20張，入60℃烤箱30min，梯度酒精水化，一部分常規(guī)HE染色，另一部分高壓熱抗原修復(fù)，非生物素二步法進(jìn)行VEGF免疫組化染色：用3% H2O2預(yù)處理10min，封閉內(nèi)源性過(guò)氧化酶，用0.01mol/L PBS漂洗3次，每次2min。用正常山羊血清在37℃溫箱中封閉非特異性抗原10min。用0.01mol/L PBS漂洗3次，每次2min。用VEGF抗體（效價(jià)1:200）孵育切片，入冰箱（4℃）過(guò)夜，用0.01mol/L PBS漂洗3次，每次2min。用羊抗兔二抗37℃恒溫孵育30min，用PBS洗3次，每次2min；把切片入DAB-H?2O2顯色液，室溫下反應(yīng)，待顯色充分，及時(shí)用0.01mol/L PBS漂洗2次，每次2min；蘇木素復(fù)染，梯度灑精逐級(jí)脫水，二甲苯透明，樹(shù)膠封片。

1.4.5 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)：用PBS代VEGF抗體，其余步驟不變。

1.4.6 觀察指標(biāo)

1.4.6.1 未愈面積的測(cè)量：造模成功后，采用OLYMPUS數(shù)碼照像機(jī)采集每只動(dòng)物造模后1d、3d、7d的未愈面積圖像，然后利用Image-Pro Plus6.0圖像處理軟件( Mdia Cybernetics公司，美國(guó))測(cè)量面積, 并記錄。

1.4.6.2 平均光密度值（MD）測(cè)定：將各組免疫組化切片置于光學(xué)顯微鏡下，采用OLYMPUS數(shù)碼照像機(jī)采集圖像進(jìn)行觀察分析。在400倍下從每張切片中各隨機(jī)選擇5個(gè)視野進(jìn)行拍照。然后用Image-Pro Plus6.0圖像處理軟件對(duì)染色陽(yáng)性的細(xì)胞進(jìn)行光密度分析，測(cè)量陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：各組未愈合面積和平均光密度值數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS20.0軟件包，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用方差分析LSD 法。

2 結(jié)果

2.1 兩組創(chuàng)傷未愈面積測(cè)量結(jié)果：損傷后1d、3d、7d對(duì)照組和丹參組大鼠創(chuàng)傷皮膚未愈合面積均逐漸縮小，3d、7d丹參組未愈合面積均小于對(duì)照組(P＜0.05)。見(jiàn)圖1，表1。

圖1 兩組創(chuàng)傷皮膚未愈合創(chuàng)面

表1 兩組創(chuàng)傷后不同時(shí)間段未愈合面積測(cè)量結(jié)果

表1 兩組創(chuàng)傷后不同時(shí)間段未愈合面積測(cè)量結(jié)果

注：*表示與對(duì)照組比較，P＜0.05

組別 例數(shù) 未愈合面積（mm2）1d 3d 7d丹參組 18 131.85±11.451 82.38±3.392* 4.02±0.217*對(duì)照組 18 138.61±3.637 132.85±1.321 14.21±1.617

2.2 HE染色結(jié)果：損傷后1d，丹參組和對(duì)照組鏡下均可見(jiàn)真皮層毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，大量紅細(xì)胞散布于組織間隙，小血管內(nèi)紅細(xì)胞淤積形成血栓，損傷周?chē)?jiàn)少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，表皮層可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。見(jiàn)圖2A、D。

損傷后3d，大量肉芽組織形成并向創(chuàng)口生長(zhǎng)。各組真皮層和表皮層均可見(jiàn)明顯擴(kuò)張的毛細(xì)血管，損傷區(qū)周?chē)梢?jiàn)毛細(xì)血管生成，大量中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，除炎癥細(xì)胞外，尚可見(jiàn)大量成纖維細(xì)胞。丹參組小血管內(nèi)紅細(xì)胞淤積情況較對(duì)照組輕，新生毛細(xì)血管數(shù)量較對(duì)照組多。見(jiàn)圖2B、E。

損傷后7d，各組創(chuàng)口已基本為肉芽組織填平，創(chuàng)口基本愈合。成纖維細(xì)胞大量增殖，分泌膠原蛋白。肉芽組織纖維化，向瘢痕組織轉(zhuǎn)變。損傷區(qū)周?chē)仔约?xì)胞少見(jiàn)。見(jiàn)圖2C、F。

圖2 兩組創(chuàng)傷皮膚組織HE染色結(jié)果

2.3 免疫組化染色結(jié)果

2.3.1 損傷邊緣皮膚內(nèi)VEGF免疫陽(yáng)性反應(yīng)物的分布概況：在本實(shí)驗(yàn)中觀察到VEGF在動(dòng)物皮膚表皮細(xì)胞、皮脂腺上皮細(xì)胞、毛囊、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中有表達(dá)，但以成纖維細(xì)胞的表達(dá)為主，陽(yáng)性反應(yīng)物主要定位在胞核、胞漿和基質(zhì)中。

2.3.2 皮膚創(chuàng)傷后VEGF的變化情況：損傷后1d，各組皮膚表皮細(xì)胞、皮脂腺上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的胞漿內(nèi)可見(jiàn)VEGF免疫反應(yīng)陽(yáng)性物。在浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞中少數(shù)細(xì)胞胞漿中呈VEGF陽(yáng)性染色，在擴(kuò)張的血管內(nèi)皮細(xì)胞中也可見(jiàn)VEGF陽(yáng)性表達(dá)。經(jīng)平均光密度值測(cè)定，丹參組VEGF表達(dá)強(qiáng)度高于對(duì)照組(P＜0.05)。見(jiàn)圖3A、D。

損傷后3d，損傷區(qū)成纖維細(xì)胞大量增殖，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，VEGF在表皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的胞漿表達(dá)增強(qiáng)，表達(dá)強(qiáng)度明顯高于損傷后1d(P＜0.05)。丹參組VEGF表達(dá)強(qiáng)度仍高于對(duì)照組(P＜0.05)。見(jiàn)圖3B、E。

損傷后7d，各組皮膚表皮細(xì)胞、皮脂腺上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的胞漿內(nèi)VEGF免疫反應(yīng)陽(yáng)性物減弱，較損傷后3d比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。丹參組VEGF表達(dá)強(qiáng)度與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)圖3C、F。見(jiàn)表2。

免疫組織化學(xué)方法對(duì)照實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陰性。

圖3 兩組創(chuàng)傷皮膚組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(400×)

表2 兩組VEGF免疫反應(yīng)陽(yáng)性物平均光密度值

表2 兩組VEGF免疫反應(yīng)陽(yáng)性物平均光密度值

注：*表示與對(duì)照組比較，P＜0.05；#表示組內(nèi)比較，P＜0.05

組別 例數(shù) 平均光密度值1d 3d 7d丹參組 18 0.21±0.003* 0.36±0.056*,# 0.19±0.042#對(duì)照組 18 0.17±0.015 0.23±0.011# 0.18±0.009#

3 討論

3.1 丹參對(duì)大鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的促進(jìn)作用：丹參為唇形科多年生草木植物，是中醫(yī)活血化瘀的代表性藥物。大量臨床實(shí)踐證明，丹參可通過(guò)促進(jìn)微循環(huán)、免疫調(diào)節(jié)、抑制過(guò)再生、減輕組織缺血-再灌注損傷、促進(jìn)創(chuàng)傷組織再生、抑制炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡等多個(gè)方面促進(jìn)創(chuàng)傷組織修復(fù)[2]。本次研究中大鼠在皮膚創(chuàng)傷后不同時(shí)間點(diǎn)，對(duì)照組和丹參組的未愈皮膚面積均逐漸縮小，3d、7d丹參組未愈合面積均小于對(duì)照組（P＜0.05），表明丹參對(duì)大鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)有促進(jìn)作用。組織病理學(xué)結(jié)果顯示：損傷后1d，丹參組和對(duì)照組鏡下均可見(jiàn)真皮層毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，血管內(nèi)有血栓形成，損傷周?chē)醒仔约?xì)胞浸潤(rùn)，此時(shí)處于止血和炎癥反應(yīng)階段。損傷后3d，大量肉芽組織形成并向創(chuàng)口生長(zhǎng)，進(jìn)入細(xì)胞增殖和分化階段，兩組損傷區(qū)域周?chē)梢?jiàn)新生毛細(xì)血管及大量成纖維細(xì)胞，且丹參組小血管內(nèi)紅細(xì)胞淤積程度較對(duì)照組輕，新生毛細(xì)血管數(shù)量較對(duì)照組多，表明丹參不僅可減少修復(fù)損傷過(guò)程中的血栓形成，還能通過(guò)促進(jìn)毛細(xì)血管增生，加速創(chuàng)傷組織修復(fù)。損傷后7d，進(jìn)入組織重建或瘢痕形成階段，創(chuàng)口已基本為肉芽組織填平，成纖維細(xì)胞大量增殖，并分泌膠原蛋白；肉芽組織纖維化，向瘢痕組織轉(zhuǎn)變，此階段丹參組與對(duì)照組組織病理學(xué)改變相似。

目前認(rèn)為丹參對(duì)血管新生的調(diào)節(jié)作用呈雙向性[3]，Bian W等[4]研究發(fā)現(xiàn)丹參的活性成分二氫丹參酮Ⅰ可抑制毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，從而抑制血管生成。因此，其對(duì)腫瘤細(xì)胞有毒性作用。Luo Y等[5]研究發(fā)現(xiàn)隱丹參酮能通過(guò)抑制VEGFR-3 而調(diào)停細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶磷酸化，從而抑制淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的血管形成。然而，在劉暖[6]、張淑娟[7]等關(guān)于心肌梗死的研究中發(fā)現(xiàn)丹參提取物可以促進(jìn)大鼠心肌梗死后心肌組織血管新生，并且在其他心腦血管疾病研究中也有類似的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[8-9]。因此，丹參在不同的疾病或組織中，對(duì)血管新生具有不同的調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果顯示：在細(xì)胞增殖和分化階段，丹參可促進(jìn)創(chuàng)傷皮膚真皮層及表皮層的毛細(xì)血管增生，加速損傷修復(fù)。

3.2 丹參上調(diào)VEGF的表達(dá)水平促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)：VEGF是一種對(duì)血管生成有極強(qiáng)誘導(dǎo)作用的多功能誘導(dǎo)因子，能特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖、細(xì)胞質(zhì)鈣聚集以及誘導(dǎo)血管生成、使血管通透性增強(qiáng)等作用，是已知促血管生成所有因子中的最強(qiáng)因子[10-12]。研究顯示，其在心腦血管疾病、腎臟疾病、創(chuàng)傷修復(fù)及腫瘤的形成中均有重要作用[13-14]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組織化學(xué)染色方法對(duì)損傷邊緣皮膚內(nèi)VEGF免疫陽(yáng)性反應(yīng)物的分布進(jìn)行觀察，并對(duì)VEGF陽(yáng)性反應(yīng)物進(jìn)行了光密度檢測(cè)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)其表達(dá)水平的半定量分析。結(jié)果顯示：VEGF在大鼠皮膚表皮細(xì)胞、皮脂腺上皮細(xì)胞、毛囊、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中均有表達(dá)，但以成纖維細(xì)胞的表達(dá)為主。目前研究表明，正常皮膚表皮中有少量 VEGF存在，具有維持自身穩(wěn)態(tài)的作用[15-16]。Corral 等[17]研究發(fā)現(xiàn)VEGF mRNA 在皮膚損傷后表達(dá)可提高 6～7倍，可持續(xù)至傷后10d，提出VEGF在局部創(chuàng)傷修復(fù)中的作用超過(guò)了堿性成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化因子。因此，VEGF在皮膚損傷修復(fù)中起有益作用。

相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[18]，皮膚損傷后，隨炎性細(xì)胞的趨化、滲出，VEGF在表皮及毛囊上皮細(xì)胞的表達(dá)逐漸減弱，而在中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及成纖維細(xì)胞的表達(dá)逐漸增加，巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞產(chǎn)生VEGF，TGF-β等多種細(xì)胞因子參與創(chuàng)傷的愈合過(guò)程。本研究結(jié)果顯示：3d、7d后成纖維細(xì)胞的胞漿內(nèi)可見(jiàn)VEGF免疫反應(yīng)陽(yáng)性物，明顯多于傷后1d；經(jīng)平均光密度值測(cè)定，1d、3d后丹參組VEGF表達(dá)強(qiáng)度高于對(duì)照組，而7d后丹參組VEGF表達(dá)強(qiáng)度與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示丹參可增加創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中止血和炎癥反應(yīng)階段和細(xì)胞增殖分化階段VEGF的表達(dá)水平。目前，國(guó)內(nèi)外已有大量研究表明丹參可以調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)。高麗等[19]提出丹參酮ⅡA可通過(guò)抑制VEGF的表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞株MDAMB-231的體外血管生成擬態(tài)的形成和細(xì)胞增殖。周利紅等[20-21]研究也證實(shí)，丹參酮ⅡA能夠通過(guò)抑制VEGF的表達(dá)從而明顯抑制小鼠腸癌皮下移植瘤內(nèi)血管新生。而Wang W等[22]研究證明丹參酮ⅡA可抑制 VEGFR-1影響腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞(TECs)的血管形成功能。以上研究均表明丹參的活性物質(zhì)能夠調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)水平，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，筆者認(rèn)為丹參可通過(guò)上調(diào)VEGF的表達(dá)水平促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷修復(fù)。此外，也有研究提出隱丹參酮能夠通過(guò)影響TGF-β1、b-FGF、bax、bcl-2、NF-kB等多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞增殖、遷移及血管生成[3,23-24]。因此，丹參對(duì)損傷修復(fù)的作用機(jī)制并不是通過(guò)單一因子的調(diào)節(jié)，而是一個(gè)復(fù)雜的分子網(wǎng)絡(luò)，值得進(jìn)一步深入探索。

[1]李曉康,王舒,于楊,等.皮膚創(chuàng)傷修復(fù)研究進(jìn)展[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志,2016,15(1):62-65.

[2]張澤曦,夏慶梅,劉洋,等.丹參促創(chuàng)傷修復(fù)機(jī)制的研究進(jìn)展[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2015,34(1):51-54.

[3]余楊瀟,趙硯瑾,常先磊,等.新型芳基脲類血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑的合成與抗腫瘤活性研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2016,32(3):198-201.

[4]Bian W,Chen F,Bai L,et al.Dihydrotanshinone I inhibits angiogenesis both in vitro and in vivo[J]. Acta Biochim Biophys Sin(Shanghai),2008,40(1):1-6.

[5]Luo Y,Chen W,Zhou H,et al.Cryptotanshinone inhibits lymphatic endothelial cell tube formation by suppressing VEGFR-3/ERK and small GTPase pathways[J].Cancer Prev Res(Phila),2011,4(12):2083-2091.

[6]劉暖,楊雷,毛秉豫,等.丹參提取物促大鼠心肌梗死后心肌組織血管新生的作用[J].中國(guó)病理生理雜志,2015,31(8):1490-1494.

[7]張淑娟,王振濤,韓麗華,等.丹參注射液對(duì)心肌梗死后大鼠缺血心肌血管新生的影響[J].中醫(yī)雜志,2011,52(18):1590-1592.

[8]劉朝輝,高曉虹.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物與臨床,2017,17(8):1162-1164.

[9]唐乾利,郭滿,吳標(biāo)良.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].中國(guó)燒傷創(chuàng)瘍雜志,2017,29(2):77-87.

[10]閆怡軒.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在口腔惡性腫瘤研究中的進(jìn)展[J].現(xiàn)代診斷與治療,2015,26(24):5550-5551.

[11]范雪,屈藝,母得志,等.缺氧缺血性腦病中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子作用的研究進(jìn)展[J].中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志(電子版),2016,12(4):453-457.

[12]莊欽,毛威.丹參多種活性成分調(diào)節(jié)血管新生機(jī)制的研究概述[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,38(4):506-510.

[13]何帥兵,張百霞,王慧慧,等.基于“中藥作用機(jī)理輔助解析系統(tǒng)”的丹參治療心血管疾病作用機(jī)制解析[J].中國(guó)中藥雜志,2015,40(19):3713-3717.

[14]余小平,張超群,覃仁安,等.復(fù)方丹參片對(duì)急性腦缺血大鼠血管新生因子影響的研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2011,29(5):1145-1148.

[15]Mcluckie M,Schmidt CA,Oosthuysen A,et al.High heparin content surface-modified polyurethane discs promote rapid and stable angiogenesis in full thickness skin defects through VEGF immobilization[J].J Biomed Mater Res A,2017,105(9): 2543-2550.

[16]李學(xué)鋒,李道萍,王慧君.小鼠皮膚創(chuàng)傷愈合過(guò)程中VEGF、TGF-β、bFGF表達(dá)的免疫組織化學(xué)研究[J].中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2003,12(4):367-371.

[17]Corral CJ,Siddiqui A,Wu L,et al.Vascular endothelial growth factor is more important than basic fibroblastic growth factor during ischemic wound healing[J].Arch Surg,1999,134(2):200-205.

[18]Wang N,Wu Y,Zeng N,et al.E2F1 Hinders Skin Wound Healing by Repressing Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) Expression,Neovascularization, and Macrophage Recruitment[J].PLoS One,2016,11(8):160-164.

[19]高麗,徐長(zhǎng)亮,何赟綿,等.丹參酮ⅡA對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDAMB-231體外血管生成擬態(tài)(VM)的抑制作用[J].藥學(xué)與臨床研究,2011,19(4):315-317.

[20]周利紅,劉宣,王炎,等.丹參酮ⅡA對(duì)小鼠腸癌皮下移植瘤血管新生的抑制作用[J].世界華人消化雜志,2009,17(31):3203-3209.

[21]周利紅,王炎,范忠澤,等.丹參酮ⅡA調(diào)節(jié)COX-2對(duì)人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響[J].世界華人消化雜志,2011,19(15):1561-1567.

[22]Wang WQ,Liu L,Sun HC,et al.Tanshinone IIA inhibits metastasis after palliative resection of hepatocellular carcinoma and prolongs survival inpart via vascular normalization[J].J Hematol Oncol,2012,5(69):58-62.

[23]Takamiya M,Saigusa K,Aoki Y.Immunohistochemical study of basic fi broblast growth factor and vascular endothelial growth factor expression for age determ inationof cutaneous wounds[J].Am J Forensic Med Pathol,2002,23(3):264-267.

[24]周建清,王永忠,胡治國(guó),等.大鼠創(chuàng)傷皮膚內(nèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的免疫組化研究[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版),2003,13(5):46-49.