NADPH-d在大鼠三叉神經(jīng)脊束核的表達(dá)

劉永亮 丁桂聰

（深圳市兒童醫(yī)院，廣東深圳 518000）

NADPH-d在大鼠三叉神經(jīng)脊束核的表達(dá)

劉永亮 丁桂聰

（深圳市兒童醫(yī)院，廣東深圳 518000）

目的 探究還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）在三叉神經(jīng)脊束核（spinaltrigeminal nucleus，STN）的表達(dá)情況。方法 2015年8月，選擇雌性大鼠六只，取三叉神經(jīng)脊束核冰凍切片，采用NADPH-d化學(xué)組織染色。結(jié)果 NADPH-d在STN存在表達(dá)。結(jié)論 一氧化氮/一氧化氮合酶系統(tǒng)可能參與頜面部感覺傳導(dǎo)調(diào)控。

一氧化氮；一氧化氮合酶；三叉神經(jīng)脊束核

三叉神經(jīng)脊束核（spinaltrigeminal nucleus，STN）是三叉神經(jīng)通路的中級(jí)神經(jīng)元，主要接受來自三叉神經(jīng)節(jié)（trigeminal ganglion，TG）的信號(hào)傳入并上傳至下級(jí)神經(jīng)元。按排列和功能從頭側(cè)自上而下分為口核（oralis，Vo）、極間核（interpolaris，Vi）和尾核（caudalis，Vc）。已有研究證明，Vc在頜面部傷害性信息調(diào)控中必不可少，是疼痛調(diào)控中的基礎(chǔ)核團(tuán)，其解剖結(jié)構(gòu)、細(xì)胞組成與脊髓背角有許多相似之處[1]。

一氧化氮（nitric oxide，NO）被認(rèn)為是神經(jīng)系統(tǒng)中的不典型的神經(jīng)傳導(dǎo)素，具有多種生理功能。NO由一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）合成，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）是激活NOS的必備條件，研究表明NADPH-d組織化學(xué)染色可作為NOS以及NO生成量的非直接指示因素[2]。

NO與頜面部疼痛的關(guān)系受到越來越多的關(guān)注[3]，但在國內(nèi)雜志罕見報(bào)道NO在三叉神經(jīng)通路的分布情況。因此本實(shí)驗(yàn)擬用免疫組化染色探討NADPH-d在STN的表達(dá)情況，以期為NO調(diào)控疼痛的后續(xù)研究提供形態(tài)學(xué)參考。

1 材料與方法

主要實(shí)驗(yàn)試劑：NADPH-d（美國Sigma公司）硝基四唑氮藍(lán)（美國Sigma公司）；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康成年雌性Sprague-Dewley大鼠6只，體重190～220 g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；4%多聚甲醛經(jīng)心灌注固定，取STN梯度脫水，冰凍切片（25 μm）；NADPH-d組織化學(xué)染色；圖像分析

2 結(jié)果

NADPH-d陽性細(xì)胞散在分布于脊束核，NADPH-d陽性細(xì)胞在脊束核中存在表達(dá)，細(xì)胞形態(tài)多為長梭型，從尾端到口端NADPH-d陽性細(xì)胞逐漸減少。

3 討論與結(jié)論

早期研究顯示，Vc與脊髓背角在功能和解剖方面均有較多的相似之處，具有相似的層狀結(jié)構(gòu)并且有著與脊髓背角相似形態(tài)特征的神經(jīng)細(xì)胞類型[1]。事實(shí)上，我們的結(jié)果也表明，在Vc這個(gè)普遍認(rèn)為在調(diào)節(jié)頜面部疼痛中起著關(guān)鍵作用的結(jié)構(gòu)，NADPH-d表達(dá)較Vi、Vo更明顯，提示NO/NOS系統(tǒng)參與頜面部疼痛傳導(dǎo)調(diào)控。我們的結(jié)果與已有文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果類似[4-5]。盡管NADPH-d陽性細(xì)胞在STN散在分布，但研究認(rèn)為在STN，大部分細(xì)胞并不直接產(chǎn)生NO，而是依賴于臨近的NADPH-d陽性細(xì)胞產(chǎn)生NO，并通過胞膜起調(diào)節(jié)作用[6]。脊髓系統(tǒng)的研究也認(rèn)為NO可作為旁分泌信號(hào)因子調(diào)節(jié)衛(wèi)星細(xì)胞[7]。因而，NO/NOS系統(tǒng)在STN層面仍可能發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。

圖A，B：NADPH-d組織化學(xué)染色，黑色箭頭表示NADPH-d陽性細(xì)胞比例尺：100 μm（A）， 50 μm（B）。

NO在頜面部疼痛調(diào)控中的具體通路尚未明確，例如NO與一氧化碳[4]、褪黑素[5]的相互作用也受到關(guān)注，但越來越多的證據(jù)表明降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin-generelated peptide，CGRP）很可能是其中一條通路。在偏頭痛的研究中發(fā)現(xiàn)[8]，無論是NO或CGRP供體均可引起偏頭痛的發(fā)作，而兩者的拮抗劑可緩解癥狀。動(dòng)物研究表明NO供體可促進(jìn)三叉神經(jīng)多級(jí)神經(jīng)元釋放CGRP，并且CGRP受體在TG與STN均存在表達(dá)，與NO的分布類似。Dieterle等報(bào)道NO供體可增加NOS陽性細(xì)胞與CGRP陽性細(xì)胞在TG的表達(dá)，而且兩者的共表達(dá)細(xì)胞比例增高[9]。等報(bào)道了CGRP在三叉神經(jīng)系統(tǒng)被NO激活后才表現(xiàn)出促炎致痛作用，腹腔注射NO供體可引起腦干及TG層面的CGRP釋放增加而在下丘腦及海馬水平未見改變。另有研究證明CGRP拮抗劑有效抑制NO供體導(dǎo)致的STN細(xì)胞活動(dòng)增加。

我們結(jié)果表明NADPH-d在STN存在表達(dá)，提示NO/NOS 系統(tǒng)參與頜面部疼痛調(diào)控，但具體通路仍需進(jìn)一步研究。

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Expression of NADPH-d in the Spinaltrigeminal Nucleus

Liu Yongliang Ding Guicong
（Shenzhen children's Hospital，Shen zheng，Guangdong 518000，China）

Objective To examine the distribution of NADPH-d in the spinaltrigeminal nucleus（STN）. Methods 2015.8，Choose six female rat. The STN were excised，horizontal sections（25μm through the STN，using histochemistry to detect the expression of NADPH-d. Results NADPH-d expressed in the STN. Conclusion The results suggested that nitric oxide/nitric oxide synthase system might mediate the orofacial nociception and sensory feedback of the masticatory reflex.

nitric oxide；nitric oxide synthase；spinaltrigeminal nucleus

本研究由2015年深圳市科創(chuàng)委課題資助；（項(xiàng)目編號(hào)：JCYJ20150403100317053）。

劉永亮，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：褪黑素，一氧化氮與疼痛。