生物炭不同施用量對煙草內(nèi)生細菌多樣性的影響

夏體淵，陳澤斌，靳 松，趙 鳳，王定康，郭麗紅，徐勝光

(1.昆明學(xué)院 農(nóng)學(xué)院，云南 昆明 650214；2.云南省高校生物炭工程研究中心，云南 昆明 650214；3.云南省高校特色生物資源開發(fā)與利用重點實驗室，云南 昆明 650214)

生物炭不同施用量對煙草內(nèi)生細菌多樣性的影響

夏體淵1,2，陳澤斌1，靳 松1，趙 鳳1，王定康1，郭麗紅3，徐勝光2*

(1.昆明學(xué)院 農(nóng)學(xué)院，云南 昆明 650214；2.云南省高校生物炭工程研究中心，云南 昆明 650214；3.云南省高校特色生物資源開發(fā)與利用重點實驗室，云南 昆明 650214)

【目的】為了對施用生物炭后的煙葉細菌的種類變化進行全面而準確的調(diào)查?！痉椒ā恳詿熑~為研究對象，設(shè)置4個處理：處1理為施用生物炭50 g/株(Y4.1)；處理2為施用生物炭100 g/株(Y5.1)；處理3為施生物炭150 g/株(Y6.1)和處理4不施用生物炭作為對照(Y1.1)。應(yīng)用Illumina測序平臺的MiSeq高通量測序儀對施用生物炭后煙葉內(nèi)生細菌的16S rDNA-V4區(qū)擴增子進行測序。并應(yīng)用Qiime和Mothur等軟件整理和統(tǒng)計樣品序列數(shù)目和操作分類單元(OTUs)數(shù)量，分析物種的豐度和Alpha多樣性。【結(jié)果】在97 %的序列相似性水平上把所測得的序列劃分為1177、1429、1228、1182操作分類單元(OTUs)。通過OTU豐度聚類分析表明：施用生物炭處理后樣品的OTUs數(shù)低于不施用生物炭處理，說明施用生物炭能提高煙葉細菌群落豐度；施用生物炭50 g/株處理后樣品的OTUs數(shù)高于施用生物炭100 g/株處理，施用生物炭100 g/株處理后樣品的OTUs數(shù)高于施用生物炭150 g/株處理，說明隨著施炭量增加到100、150 g/株細菌群落豐度又開始減少?！窘Y(jié)論】通過屬的水平分析表明：鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)在施用生物炭處理的樣品中豐度比不施用生物炭處理的高，說明施用生物炭有利于增加該菌屬的豐度。芽球菌屬(Blastococcus)、Solirubrobacter屬、Gaiella屬、節(jié)細菌屬(Arthrobacter)這4個屬在施用生物炭50 g/株處理的樣品中豐度大于不施用生物炭處理，在不施用生物炭處理的樣品中豐度大于施用生物炭100、150 g/株處理，說明施用生物炭超過50 g會降低這4個菌屬的豐度。

煙草；內(nèi)生細菌；生物炭；測序；多樣性

【研究意義】生物炭是生物有機材料(生物)在缺氧或厭氧環(huán)境下高溫裂解產(chǎn)生的一種固體[1]。在以往的研究中，生物炭作為一種新型的碳材料，引起了廣泛的關(guān)注，主要是因為其在土壤改良、減少溫室氣體排放和環(huán)境修復(fù)中的應(yīng)用潛力，它可以為解決諸如農(nóng)田肥力下降等環(huán)境問題提供新的思路[2]。使用生物炭肥對根結(jié)線蟲有很好的抑制作用[3]。生物炭基質(zhì)有助于煙苗地上、地下部干重的積累，證明可以使用生物炭基質(zhì)替代常規(guī)基質(zhì)[4]。施用生物炭和石灰均能促進紅壤中煙草的生長，并有效改善紅壤的理化性狀[5]。生物炭與常規(guī)肥料配施能顯著提高煙草各部位生物量及煙葉抗氧化酶活性，促進煙株的生長[6]。施用生物炭能促進烤煙生長，煙葉產(chǎn)量呈增加趨勢，然而，當(dāng)生物炭用量達到2 025 kg/hm2時，煙葉質(zhì)量開始下降[7]。【前人研究進展】植物內(nèi)生菌是指整個生命周期都在宿主植物體內(nèi)生存的細菌、放線菌和真菌，其存在于所有植物中。內(nèi)生菌的次生代謝產(chǎn)物豐富多樣，在農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥工業(yè)中具有重要的應(yīng)用價值[8]，是生物活性物質(zhì)篩選的重要來源[9-13]。韓瑋等人以南方水稻土為研究對象，施用不同溫度處理后的生物炭后，結(jié)果表明施加生物炭后土壤微生物量相比對照有所提高[14]。廖娜通過田間實驗對滴灌棉田土壤施用不同類型的生物炭，結(jié)果表明施用生物炭提高土壤碳氮轉(zhuǎn)化相關(guān)的酶活性和微生物群落對碳源底物的利用能力，改變土壤微生物群落結(jié)構(gòu)組成[15]。尚杰等人通過大田實驗對耬土施用生物炭，結(jié)果表明施用生物炭對耬土土壤中微生物量有所增加，土壤中酶的活性得到提高[16]。胡鋒等人通過室內(nèi)培育實驗對江西紅壤水稻土施用生物質(zhì)炭，結(jié)果表明加入生物質(zhì)炭后土壤中有機碳和微生物生物量碳氮的含量顯著增加[17]。【本研究切入點】在前人的研究進展中所采用的都是一代測序技術(shù)，然而早期第一代測序技術(shù)仍然存在諸如文庫構(gòu)建過程復(fù)雜、測序成本依然較高、通量低、難以做大量的平行測序等缺點。為了克服上述缺點，近年來發(fā)展的新二代測序技術(shù)，不僅在文庫構(gòu)建等方面取得了重要突破，更進一步簡化了測序操作、降低了測序成本、縮短了測序時間?！緮M解決的關(guān)鍵問題】在本研究中，將Illumina MiSeq二代測序技術(shù)應(yīng)用于生物炭施用后的煙草內(nèi)生細菌種類組成研究，與傳統(tǒng)的純培養(yǎng)方法和基于16S rDNA的非培養(yǎng)方法相比，可以產(chǎn)生覆蓋深度較大的數(shù)據(jù)，能準確調(diào)查生物炭對煙草內(nèi)生細菌物種的影響，為豐富植物微生態(tài)學(xué)理論奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

于2016年3月20日到宣威市洛水鎮(zhèn)，在農(nóng)民連作3年的煙地設(shè)計田間試驗，選擇一塊烤煙連作地進行整地栽種烤煙。設(shè)置4個處理：處理1為不施用生物炭，處理2為每株施用生物炭50 g，處理3為每株施用生物炭100 g，處理4為每株施用生物炭150 g。種植煙苗時就施用生物炭，與底肥混勻施入。于2016年7月18日采集成熟期無明顯病蟲害的烤煙葉片，放入樣品袋中，并表標(biāo)寫樣品名，不施用生物炭樣品編號為Y1.1，施用生物炭50 g樣品編號為Y4.1，施用生物炭100 g樣品編號為Y5.1，施用生物炭150 g樣品編號為Y6.1。

1.2 表面消毒和總DNA提取

方法參照文獻[18-19]。

1.3 16S rDNA-V4區(qū)的PCR擴增

以稀釋后的基因組DNA為模板，使用特異引物515F(5’-GTTTCGGTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3’)和806R(5’-AGTTCCGGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’)進行PCR擴增。擴增產(chǎn)物的測序委托北京諾禾致源生物信息科技有限公司完成[20-22]。

1.4 生物信息學(xué)分析

用Flash軟件對原始數(shù)據(jù)進行拼接，Qiime軟件過濾，Uchime Algorithm軟件去除嵌合體，得到有效數(shù)據(jù)(Effective tags)[23]，然后用Uparse軟件在97 %水平上對有效數(shù)據(jù)進行操作分類單元(Operational taxonomic unit, OTU)劃分，利用Greengene數(shù)據(jù)庫進行物種注釋[24]，利用Mothur軟件做稀釋曲線分析，通過對OTUs進行豐度和α-多樣性分析，得到微生物群落結(jié)構(gòu)組成[25-26]。

2 結(jié)果與分析

2.1 測序結(jié)果及序列深度驗證

4個樣品測得原始序列條數(shù)為60 312、50 468、34 884、57 896條，總計203 560條，過濾掉低質(zhì)量的序列后，得到的序列數(shù)為58 938、49 319、34 022、56 555條，總計198 834條。在上述序列進行去冗余處理后，有效序列數(shù)為58 659、48 851、33 896、56 342條，總計197 748條，一共被劃分為5 016個OTUs(表1)。施用50 g生物炭處理后，葉片中細菌香農(nóng)指數(shù)最高，施用生物炭150 g處理后葉片中細菌香農(nóng)指數(shù)僅次于樣品Y4.1，與對照樣品Y1.1不施用生物炭處理的葉片比較，樣品Y5.1施用生物炭100 g處理后的葉片中細菌香農(nóng)指數(shù)還是高于樣品Y1.1中細菌的香農(nóng)指數(shù)。說明施用生物炭處理后的煙葉內(nèi)細菌的香農(nóng)指數(shù)高于不施用生物炭處理。4個樣品中細菌香農(nóng)指數(shù)高低為：Y4.1 > Y6.1 > Y5.1 > Y1.1，結(jié)果表明烤煙在施用生物炭的條件下細菌群落種群多樣性比不施用生物炭高，施用生物炭50 g時達到最大，施用100 g時降低，當(dāng)施用量增加到150 g時又開始增高。整體從覆蓋率上看，4個樣品的覆蓋率均達到了98 %以上，說明大部分的細菌序列都已經(jīng)被測出，結(jié)果有很好的可信度。

表1 細菌OTU豐度和α多樣性指數(shù)

2.2 樣品復(fù)雜度分析

從OTU的稀釋曲線可以看出4個樣品稀釋曲線均基本趨于平緩(圖1)，隨著測序數(shù)量的增加，細菌稀釋曲線斜率逐漸趨于平坦，即使增加測序數(shù)量也只會產(chǎn)生少量的新操作分類單元；說明測序數(shù)據(jù)足夠多，可以反映樣品中的細菌種類。

圖1 細菌OTU稀釋曲線 Fig.1 Bacteria OTU dilution curve

2.3 各樣品中細菌群落相關(guān)性分析

從圖2數(shù)據(jù)分析，得到4個樣品細菌文庫共有5016個OTUs ，從特有的OTUs個來看，樣品Y1.1有57個OTUs、樣品Y5.1有54個OTUs、樣品Y6.1有55個OTUs、樣品4.1有147個OTUs。施用生物炭50 g比不施用生物炭多90個OTUs，施用生物炭100 g比不施用生物炭少3個OTUs，施用生物炭150 g比不施用生物炭少2個OTUs，說明施用生物炭50 g有利于提高煙葉內(nèi)生細菌種類的數(shù)量，但施用生物炭增加到100、150 g時，會減少煙葉內(nèi)生細菌的種類。還發(fā)現(xiàn)有705個OTUs在4個樣品中均有分布，只占文庫OTUs總數(shù)的14.1 %，說明施用生物炭和不施用生物炭煙葉內(nèi)生細菌的種類組成差異大；通過比較發(fā)現(xiàn)，施用生物炭50 g處理、施用生物炭100 g處理和施用生物炭150 g處理，細菌文庫共有OTUs數(shù)量為3839個，其中有825個OTUs在4個樣品中均有分布，只占相應(yīng)文庫OTUs總數(shù)的21.5 %，說明生物炭不同施用量對煙葉內(nèi)生細菌的種類分布有很大影響。

2.4 各樣品中細菌群落分布特征分析

如圖3～5所示，利用RDP classifier 對各樣品中OTU 依次進行門(Phylum)、綱(Class)、科(Family)、屬(Genus)分類信息分析。本研究采用的是CTAB法提取烤煙葉基因組DNA，因為植物葉綠體16S rDNA和線粒體18S rDNA與細菌16S rDNA序列具有高度同源性，所以出現(xiàn)了藍藻細菌門(Cyanobacteria，83.90 %)中葉綠體(unidentified chloroplast，83.90 %)和變形菌門(Proteobacteria，12.78 %)中(Unidentified Mitochondria，12.78 %)線粒體污染宿主的現(xiàn)象。通過圖表分析，把4個樣本中所有的細菌按門、綱、目、科、屬依次劃分，共有4個門。其中優(yōu)勢群落為變形菌門(Proteobacteria)，占總菌落的12.78 %，分為2個綱為α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)，占12.37 %，又分兩目為立克次氏體目(Rickettsiales)，占10.36 %；另一個目為鞘脂單胞菌目(Sphingomonadales)，占2.01 %，由鞘脂單胞菌科(Sphingomonadaceae，2.01 %)，鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas，2.01 %)；δ-變形菌綱(Deltaproteobacteria)，占0.41 %，黏球目(Myxococcales，0.41 %)，Haliangiaceae科(0.41 %)，Haliangium屬(0.41 %)；第2個門是放線菌門(Actinobacteria)，占2.84 %；分為2個綱，Thermoleophilia 綱(1.17 %)，unidentified Actinobactria綱(1.67 %)，分別有5個目：Gaiellales目(0.55 %)，Gaiellaceae 科(0.55 %)，Gaiella屬(0.55 %)；Solirubrobacterales目(0.62 %), Solirubrobacteraceae科(0.62 %)，Solirubrobacter屬(0.62 %)；Frankiales目(0.72 %)，地嗜皮菌科(Geodermatophilaceae，0.62 %)，芽球菌屬(Blastococcus，0.72 %)；微球菌目(Micrococcales，0.46 %)，微球菌科(Micrococcaceae，0.46 %)，節(jié)細菌屬(Arthrobacter，0.46 %)；鏈霉菌目(Streptomycetales，0.49 %)，鏈霉菌科(Streptomycetaceae，0.49 %)，鏈霉菌屬(Streptomyces，0.49 %)。第3個門是芽單胞菌門(Gemmatimonadetes)，占0.48 %，有一個綱為不明芽單胞菌綱(unidentified Gemmatimonadetes，0.48 %)，芽單胞菌目(Gemmatimonadales，0.48 %)，芽單胞菌科(Gemmatimonadaceae，0.48 %)，芽單胞菌屬(Gemmatimonas0.48 %)。從屬的水平上來看，可發(fā)現(xiàn)鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)在每個樣品中都是優(yōu)勢菌屬，但在樣品Y4.1中占的比例最大，占3.45 %，比樣品Y1.1(占1.17 %)不施用生物炭處理多出2.28 %，在樣品Y5.1中占2.01 %，在樣品Y6.1中占了1.77 %，分別比樣品Y1.1多出0.84 %、0.60 %，表明施用生物炭提高了這個菌屬的分布，但施用量超過50 g后又開始減少。芽球菌屬(Blastococcus)在樣品Y1.1和樣品Y4.1中為第2優(yōu)勢菌屬，各占0.62 %、1.62 %，在樣品Y4.1中明顯比樣品Y1.1高出1 %，在樣品Y5.1和Y6.1中各占了0.46 %、0.38 %，明顯比樣品Y1.1少0.16 %、0.24 %。Solirubrobacter屬在4個樣品Y1.1、Y4.1、Y5.1、Y6.1中各占0.61 %、1.31 %、0.47 %、0.24 %，只有Y4.1中占的比例大于樣品Y1.1，大出0.70 %，在樣品Y5.1和樣品Y6.1中都比樣品Y1.1小。Gaiella屬在樣品Y4.1中占的比例最大，占1.14 %，在Y1.1中次之，占0.5 %，第3是樣品Y5.1中，占0.44 %，在樣品Y6.1中最小，占0.27 %，相比之下，施用生物炭50 g提高了這3個菌屬的分布，當(dāng)施用生物炭為100 g、150 g時，這3個菌屬的分布隨施用量的增加而減低，并且比對照樣品Y1.1中的分布還少。節(jié)細菌屬(Arthrobacter)在樣品Y4.1中占的比例最高，占0.88 %，比樣品Y1.1(占0.27 %)高出0.61 %，在樣品Y5.1中占了0.47 %，比樣品Y1.1高出0.20 %，在樣品Y6.1中占了0.33 %，只比樣品Y1.1高出0.06 %；鏈霉菌屬(Streptomyces)在樣品Y4.1中占1.11 %，比樣品Y1.1(占0.35 %)高出0.76 %，在樣品Y5.1中占0.24 %，比樣品Y1.1少0.11 %，在樣品Y6.1中占0.41 %，只比樣品Y1.1高出0.06 %；芽單胞菌屬細菌(Gemmatimonas)在樣品Y4.1中占1.12 %，比樣品Y1.1(占0.40 %)高出0.72 %，在樣品Y5.1中占了0.24 %，比樣品Y1.1少0.16 %，在樣品Y6.1中占0.29 %，比樣品Y1.1少0.11 %；Haliangium屬在樣品Y4.1中占0.82 %，比樣品Y1.1(占0.28 %)高出0.54 %，在樣品Y5.1中占0.40 %，比樣品Y1.1高出0.12 %，在樣品Y6.1中占0.26 %，只比樣品Y1.1少0.02 %

圖2 煙葉內(nèi)生細菌OTU韋恩圖Fig.2 OTU Venn diagram of tobacco endophytic bacteria

圖3 綱水平上的細菌類群豐度Fig.3 Abundance of bacteria groups on class level

圖4 科水平上的細菌類群豐度Fig.4 Abundance figure of bacteria groups on family level

圖5 屬水平上的細菌類群豐度Fig.5 Abundance of bacteria groups on genus level

圖6 PCA分析結(jié)果Fig.6 PCA analysis results

2.5 樣品間Beta多樣性分析

基于OTU水平的PCA分析結(jié)果展示如圖6所示。從圖6可以看出，PCA主成分分析表明，主成分1(PC1)和主成分2(PC2)的差異貢獻率分別為49.27 %和25.92 %，合計達到75.19 %，表明除了主成分1和主成分2對樣品差異有影響外還有其他成分對其差異也有影響。對樣品在各主成分的影響進行繪圖可以看出，樣品Y5.1施用生物炭100 g和樣品Y6.1施用生物炭150 g均位于PC1和PC2的負軸區(qū)，說明2個樣品間的差異最小。樣品Y1.1不施用生物炭和樣品Y4.1施用生物炭50 g間的距離最遠，所以這2個樣品間的差異最大，其次是樣品Y6.1施用生物炭150 g和Y1.1不施用生物炭均在PC2的負軸區(qū)，但從PC1來看，一個在負軸區(qū)一個在正軸區(qū)，說明2個樣品的差異來自于主成分1。樣品Y5.1施用生物炭100 g和樣品Y1.1不施用生物炭也有較大的差異，差異來自于主成分2。相比之下樣品Y4.1、樣品Y5.1、樣品Y6.1間的差異要小于與樣品1.1的差異，說明施用過生物炭后的煙葉內(nèi)和不施用生物炭的煙葉內(nèi)細菌群落差異是比較大的。從施用過生物炭的樣品中來看，樣品Y4.1施用50 g和樣品Y5.1施用生物炭100 g、樣品Y6.1施用生物炭150 g間的差異都比較大，說明施用生物炭50 g對煙草葉片內(nèi)細菌群落結(jié)構(gòu)有很大的影響。

3 討 論

本研究將Illumina MiSeq第二代測序技術(shù)應(yīng)用于植物內(nèi)生細菌研究，不但把解析微生物群落結(jié)構(gòu)從傳統(tǒng)分子生物學(xué)方法提升到基因組的水平上，還克服了以往在傳統(tǒng)分子生物學(xué)方法存在著通量低的缺陷，與傳統(tǒng)的純培養(yǎng)方法及16S rDNA非培養(yǎng)方法相比較，高通量測序技術(shù)涵蓋了整個微生物群落的信息，可以檢測到一代測序技術(shù)不能發(fā)現(xiàn)的低豐度內(nèi)生細菌種類，豐富植物內(nèi)生菌資源。通過利用高通量測序?qū)熑~內(nèi)生細菌16S rDNA-V4區(qū)進行測序，經(jīng)過對比分析4個樣品中優(yōu)勢群落為變形菌門(Proteobacteria，12.78 %)，此外還檢測到一些幾乎沒有報道過的低豐度細菌類群，例如：Solirubrobacter屬(0.61 %)、Gaiella屬(0.55 %)、Haliangium屬(0.41 %)，顯示出了新一代測序技術(shù)的優(yōu)勢。在以往通過傳統(tǒng)組織分離方法對烤煙內(nèi)生細菌進行分離鑒定的報道中，均發(fā)現(xiàn)優(yōu)勢菌變形菌門Proteobacteria的芽孢桿菌屬(Bacillus)細菌[20]，這與本研究的結(jié)果不一致，這可能與煙草品種及生長環(huán)境有關(guān)，研究表明，同一種植物栽培在不同的地方可能有著不同的內(nèi)生菌組成特征[10]。也可能與芽孢桿菌屬(Bacillus)細菌在植物體內(nèi)多是以孢子形式存在有關(guān)，而提取植物組織DNA目前多采用CTAB、SDS法，無法使其裂解，導(dǎo)致未能獲取到該類群細菌的基因組DNA。

本研究全面而準確地分析了4個煙草樣品Y1.1不施用生物炭、Y4.1施用生物炭50 g/株、Y5.1施用生物炭100 g/株、Y6.1施用生物炭150 g/株的內(nèi)生細菌的種類分布，發(fā)現(xiàn)鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)在每個樣品中都是優(yōu)勢菌屬，但在施用生物炭處理后的樣品中的豐度比不施用生物炭處理的高，表明施用生物炭提高了這個菌屬在煙葉內(nèi)的分布，但施用量增加到100、150 g/株后在煙葉內(nèi)的分布又開始降低。芽球菌屬(Blastococcus)、Solirubrobacter屬、Gaiella屬這3個菌屬在樣品Y4.1中的豐度最大，在樣品Y1.1中次之，說明施用生物炭50 g/株提高了這3個菌屬在煙葉內(nèi)的分布，當(dāng)施用生物炭為100、150 g/株時，這3個菌屬的分布隨施用量的增加而降低，并且比在對照樣品Y1.1中的分布還少。

4 結(jié) 論

施用生物炭對煙葉中細菌群落分布多樣性確實有很大的影響，研究表明施用生物炭50 g/株后煙葉中細菌群落豐度大于不施用生物炭煙葉中細菌群落豐度。說明施用生物炭50 g/株對煙葉中細菌群落豐度影響最大，施用生物炭100 g/株后煙葉中細菌群落豐度有所減少，施用生物炭150 g/株后煙葉中細菌群落豐度最小。施用生物炭量為100、150 g/株時會使煙葉中的個別菌屬的豐度有所減少，例如：芽球菌屬(Blastococcus)、Solirubrobacter屬、Gaiella屬、節(jié)細菌屬(Arthrobacter)這幾個屬，說明生物炭施用量超過50 g/株會抑制這幾個菌屬的生長。

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EffectofDifferentBiocharApplicationRatesonDiversityofTobaccoEndophyticBacteria

XIA Ti-yuan1,2, CHEN Ze-bin1, JIN Song1, ZHAO Feng1, WANG Ding-kang1, GUO Li-hong3, XU Sheng-guang2*

(1.College of Agriculture,Kunming University, Yunnan Kunming 650214, China; 2.Engineering Research Center for Biochar of High Education in Yunnan Province, Yunnan Kunming 650214, China; 3. Key Laboratory of Development and Utilization of Characteristic Biological Resources in Universities of Yunnan Province, Yunnan Kunming 650214, China)

【Objective】The study aims to conduct a comprehensive and accurate investigation on the species change of bacteria in tobacco leaves after the application of biochar. 【Method】Tobacco was chosen as the object of this study, and 4 treatments were set including treatment 1, the application of biochar 50 g each plant (Y4.1); Treatment 2, the application of biochar 100 g each plant (Y5.1); Treatment 3, the application of biochar 150 g each plant (Y6.1); And treatment 4, as control group without biochar (Y1.1). Amplicons in 16S rDNA-V4 region of endophytic bacteria from biochar-applied tobacco were sequenced by the use of MiSeq high-throughput sequencer from Illumina sequencing platform. And Qiime and Mothur were adopted to sort out and calculate the number of sample sequences and operational taxonomic units (OTUs) and analyze abundance and Alpha diversity of species. 【Result】The measured sequences were divided into 1177, 1429, 1228 and 1182 OTUs at 97 % of sequence similarity level. OTU abundance clustering analysis showed that the number of OTUs with the application of biochar was higher than that of non-biochar treatment, which indicated that the application of biochar could increase the abundance of tobacco bacteria groups; The number of OTUs with the treatment of 50 g each plant biochar was higher than that of 100 g each plant biochar and the later was higher than that of 150 g each plant, which indicated that as the weight of biochar increased to 100 g each plant and 150 g each plant, the abundance of tobacco bacteria groups began to decrease. 【Conclusion】The analysis on genus level showed that the abundance ofSphingomonasin the samples treated with biochar was higher than that without biochar treatment, which demonstrated that the application of biochar was beneficial to the abundance of this genus. The abundances ofBlastococcus,Solirubrobacter,GaiellaandArthrobacterin samples treated with 50 g each plant biochar were higher than those without biochar treatment, and the later were greater than those with 100 g each plant and 150 g each plant treatments, indicating that the application of biochar over 50 g each plant would inhibit the growth of these 4 genera.

Tobacco; Endophytic bacteria; Biochar; Sequencing; Diversity

1001-4829(2017)12-2711-06

10.16213/j.cnki.scjas.2017.12.016

2016-12-26

國家自然科學(xué)基金項目(41361056)；昆明學(xué)院“人才引進項目”(YJL14005)；云南省高校優(yōu)勢特色重點學(xué)科(生態(tài)學(xué))建設(shè)項目(05000511311)；云南省特色生物資源開發(fā)與利用重點實驗室開放基金項目(GXKJ201631)

夏體淵(1978-)，男，云南宣威人，博士，副研究員，主要從事山區(qū)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究，E-mail: xiatiyuan@sohu.com；*為通訊作者：徐勝光，E-mail: sgxu2011@126.com。

S572.06

A

(責(zé)任編輯王家銀)