大紅菇水不溶性多糖硫酸酯的制備及抗氧化性研究

王白娟，楊青松，陳 婷，秦向東, 3，唐卿雁，肖 堯，楊云宇，趙 艷*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，云南 昆明 650201； 2.云南民族大學(xué) 民族醫(yī)藥學(xué)院，云南 昆明 650500；3.云南省高校生物天然氣產(chǎn)業(yè)化技術(shù)工程研究中心，云南 昆明 650201；4.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201)

大紅菇水不溶性多糖硫酸酯的制備及抗氧化性研究

王白娟1，楊青松2，陳 婷1，秦向東1, 3，唐卿雁4，肖 堯1，楊云宇1，趙 艷1*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院，云南 昆明 650201； 2.云南民族大學(xué) 民族醫(yī)藥學(xué)院，云南 昆明 650500；3.云南省高校生物天然氣產(chǎn)業(yè)化技術(shù)工程研究中心，云南 昆明 650201；4.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201)

【目的】大紅菇(RussulaalutaceaFr.)子實(shí)體中含有大量堿溶性的多糖，由于具有難溶于水的特性而限制開發(fā)，可以借助化學(xué)改性的方法，通過提高其水溶性來促進(jìn)生物活性，并使應(yīng)用范圍得到大幅度拓寬?！痉椒ā勘狙芯刻崛∷苄远嗵呛?，用堿提法提出水不溶性多糖,并對其采用硫酸法進(jìn)行修飾，改善其水溶性?！窘Y(jié)果】分析并比較水溶性多糖、水不溶性多糖、硫酸酯多糖和維生素c對羥基自由基、DPPH自由基、超氧陰離子的清除能力。結(jié)果表明：水溶性多糖的得率為1.447 %、水不溶性多糖的得率為1.346 %；硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14.95 %，取代度(DS)為0.763 %。【結(jié)論】根據(jù)其EC50值表明，對羥基自由基的清除能力：硫酸酯多糖>維生素c >水不溶性多糖>水溶性多糖；對超氧陰離子的清除能力：維生素c > 硫酸酯多糖>水溶性多糖>水不溶性多糖；對DPPH的清除能力為：維生素c >硫酸酯多糖>水溶性多糖>水不溶性多糖。

大紅菇；水不溶性多糖；硫酸酯；羥基自由基；DPPH；超陰離子

【研究意義】大紅菇(RussulaalutaceaFr.)是一類外生菌根菌，常與林木共生，其在真菌分類系統(tǒng)中，隸屬于擔(dān)子菌綱(Basidiomycetes)，紅菇科(Russulaceae)，紅菇屬(Russula)[1-2]。大紅菇具有重要的經(jīng)濟(jì)價值，它不僅可食用還可以藥用，其營養(yǎng)豐富，味道鮮美可口，藥用方面具有補(bǔ)血、滋陰、清涼、解毒的功效，同時可以降低膽固醇、保肝護(hù)肝和抗癌等效果[3]。作為傳統(tǒng)藥食兩用的食用菌，通過分子修飾的方法對其進(jìn)行改性，能夠得到紅菇多糖的衍生物，不僅類型豐富，而且為全面理解多糖構(gòu)效關(guān)系積累了基礎(chǔ)資料?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】食用菌多糖由于其特有的生物學(xué)活性，受到了廣泛的重視和關(guān)注。目前多糖的提取工藝較成熟，常用方法有溶劑提取法、生物酶解提取法、物理強(qiáng)化提取法等[4]。其中溶劑提取法較為常用，包括水提法、堿提法、酸提法等。但在堿溶液的提取過程中，從子實(shí)體、菌絲體中提取得到的大量多糖，因其水不溶性的特點(diǎn)，會影響后續(xù)的開發(fā)及應(yīng)用?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】為了增加紅菇多糖的水溶性，通過化學(xué)修飾的方法提高其生物活性，并大幅度地拓寬其應(yīng)用范圍。經(jīng)過修飾后得到的硫酸酯多糖，含有硫酸基團(tuán)，因此硫酸酯多糖是一類天然的多糖衍生物，或者是半合成的多糖衍生物[5]，目前一些含有硫酸基團(tuán)的天然動物和植物多糖具有抗病毒[6-7]、抗凝血[8-9]、抗腫瘤[10-13]、抗氧化[13-16]、增強(qiáng)機(jī)體免疫[17-18]等活性，經(jīng)過分子修飾后的硫酸酯多糖，已成為多糖的研究熱點(diǎn)?！緮M解決的關(guān)鍵問題】利用分子修飾的方法，通過改變其原來的理化性質(zhì)及生物學(xué)功能，進(jìn)一步揭示紅菇多糖的構(gòu)效關(guān)系，還可以為研發(fā)具有高活性紅菇多糖的產(chǎn)品提供理論指導(dǎo)，并促進(jìn)紅菇多糖的理論研究，拓寬其產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用范圍，并為豐富多糖構(gòu)效關(guān)系提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)樣品大紅菇購自云南省普洱市景谷縣。

試驗(yàn)試劑活性炭、氫氧化鈉、水楊酸、濃硫酸、硫酸鈉、抗壞血酸氯化鋇、硫酸亞鐵、明膠、雙氧水、鹽酸、石油醚、氯仿、冰醋酸、正丁醇、苯酚、無水乙醇、三氯乙酸、三羥甲基氨基甲烷(Tris)、鄰苯三酚、Tris-HCl緩沖液、DPPH，均為分析純)，購自天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司。電子天平，購自北京賽多利斯天平有限公司；722N型光柵可見分光光度計，購自上海菁華科技儀器有限公司；搖床，購自上海世平實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋(DRHH-S4型)，購自上海雙捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2 方法

1.2.1 預(yù)處理 烘干至恒重的大紅菇子實(shí)體粉碎過50目篩，精密稱取大紅菇10 g于三角瓶中，加入100 mL石油醚，密封，置于搖床中脫脂48 h，抽濾烘干，平行試驗(yàn)5組。

1.2.2 大紅菇水溶性多糖樣品的制備 經(jīng)預(yù)處理后的大紅菇樣品置于圓底燒瓶中，按料液比為1∶20、溫度為80 ℃、提取時間2 h加水提取,重復(fù)提取3次，離心取上清，濾渣備用。向上清液中加入3倍無水乙醇，放入冰箱中(4 ℃)靜置12 h，取出離心，棄去上清液，晾干得到水溶性粗多糖RA1。RA1溶解于蒸餾水中，加入1 %(w/v)的活性炭，75 ℃下恒溫振蕩2.5 h，離心棄沉淀。經(jīng)脫色后的上清液中加入5倍Sevage液(氯仿∶正丁醇=5∶1)，振蕩20～30 min，離心取上層清液，再向其中加入1倍無水乙醇，冰箱中(4 ℃)靜置4 h，10 000 r/min離心取沉淀烘干得大紅菇水溶性精多糖樣品RA2。

1.2.3 大紅菇水不溶性多糖樣品的制備 濾渣置于圓底燒瓶中，料液比(m濾渣∶V5 %氫氧化鈉=1∶20)為1∶20、溫度為40 ℃、提取時間2 h。重復(fù)提取3次，離心棄沉淀。上清液中經(jīng)冰醋酸中和，離心棄上清液，晾干得到水不溶性粗多糖RA3。RA3溶解于3 %氫氧化鈉中，加入1 %(w/v)的活性炭，75 ℃下恒溫振蕩2.5 h，離心棄沉淀。經(jīng)脫色后的上清液中加入5倍Sevage液(氯仿∶正丁醇=5∶1)，振蕩20～30 min，離心取上層清液，再向其中加入1倍無水乙醇，冰箱中靜置(4 ℃)12 h，10 000 r/min離心取沉淀烘干得大紅菇水不溶性精多糖樣品RA4。

1.2.4 多糖含量測定[19]多糖含量的測定采用苯酚-硫酸法測定[19]。稱取大紅菇多糖，并準(zhǔn)確配制成一定濃度的溶液，各試管中加入新配制的5 %苯酚溶液1.0 mL和濃硫酸溶液5.0 mL，迅速把溶液搖勻，把混勻溶液放入沸水浴，30 min后取出，立刻置于冰水中，冷卻至室溫，在波長490 nm處測吸光度。同時用葡萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線后可以得到，水溶性多糖回歸方程為y=7.6468x(R2=0.9997，圖1)，水不溶性多糖回歸方程為y=7.9307x+0.0088 (R2=0.9998，圖2)，2組曲線在濃度0.04～0.2 mg/mL內(nèi)，線性關(guān)系良好。

1.2.5 多糖提取率的測定 精確稱取RA3 0.05 g、RA4 0.05 g于100 mL容量瓶中，RA3用去離子水、RA4 用3 %的氫氧化鈉定容至刻度。精確吸取1.0 mL于試管中，再分別加入1.0 mL 5 %苯酚、5.0 mL濃硫酸溶液，搖勻試管中的溶液，30 min沸水浴后，立刻將試管取出，冰水浴中迅速冷卻至室溫。在波長490 nm處測定其吸光值A(chǔ)。根據(jù)葡糖糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計算大紅菇多糖的濃度c(以葡萄糖濃度計算)和提取率：

圖1 水溶性多糖含量測定Fig.1 The determination of water-soluble polysaccharide

圖2 水不溶性多糖含量測定Fig.2 The determination of water-insoluble polysaccharide

提取率(%)=(C×V×m1/ 0.05)/m

式中，C：提取液中大紅菇多糖的質(zhì)量濃度(mg/mL)；V：定容體積(mL)；m1：提取多糖的重量(mg)；m：樣品重量(mg)。

1.2.6 大紅菇硫酸酯多糖的制備[20]量取濃硫酸7.5 mL，正丁醇2.5 mL，置于帶干燥管及攪拌裝置的三頸瓶中，把濃硫酸0.125 g緩慢加入，通過溫和攪拌的方法，使用冰浴讓其冷卻到0 ℃，并把水不溶性多糖粉末0.5 g緩慢加入到瓶中，于0 ℃下反應(yīng)30 min。反應(yīng)經(jīng)中和、離心后，用蒸餾水透析48 h，加入乙醇，靜置后離心，收集沉淀物，該沉淀物為制備得到的大紅菇硫酸酯多糖。

1.2.7 大紅菇硫酸酯多糖的結(jié)構(gòu)表征 硫酸基標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。硫酸基的測定采用明膠-比濁法[21]。精確吸取0、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20 mL標(biāo)準(zhǔn)硫酸鈉溶液于試管以鹽酸溶液補(bǔ)至0.2 mL，空白對照用0.2 mL 鹽酸溶液，再緩慢地加入3.8 mL三氯乙酸及1.0 mL明膠-氯化鋇溶液，把溶液混合搖勻，室溫下靜置15 min后，于360 nm波長下測吸收度A1；氯化鋇-明膠溶液用1.0 mL明膠溶液代替，同法進(jìn)行吸光度A2的測定；橫坐標(biāo)為硫酸基毫克數(shù)，吸光度(A1-A2)為縱坐標(biāo)，得圖3。

硫酸基含量測定。取0.1 g大紅菇硫酸酯多糖溶解于水定容至100 mL，按照硫酸基標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定方法，在波長360 nm處，測定吸光度值，并對照硫酸基標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算大紅菇硫酸酯多糖的硫酸基含量。

取代度公式:DS=(1.62×S)/(32-1.02×S)

1.2.8 紅外光譜分析 采用溴化鉀壓片的方法，稱取1 mg的干燥樣品，加入150 mg溴化鉀，充分混合后研磨壓片，并在4000～400 cm-1內(nèi)進(jìn)行掃描測定。

圖3 測定硫酸基標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3 Standard curve of determination sulfate group

1.2.9 抗氧化性測定[22]羥基自由基的測定。向試管中加入1.00 mL蒸餾水，1.8×10-4mol/L FeSO4溶液2.00 mL，水楊酸-乙醇1.50 mL，最后加0.03 % H2O20.10 mL啟動反應(yīng)，振蕩混合, 在波長510 nm處測定其吸光度值，即為A0。

清除羥基自由基作用。向試管中加入一系列不同濃度多糖或抗壞血酸溶液1.00 mL, 7.5×10-3mol/L FeSO4溶液2.00 mL, 1.8×10-4mol/L水楊酸-乙醇1.50 mL, 最后加H2O2( 0.03 % ) 0.10 mL啟動反應(yīng), 振蕩混合, 水浴37 ℃, 保溫30 min, 在波長510 nm下測量各自的吸光度值，即為AS。自由基清除率計算公式為:

D=(A0-AS)/A0×100 %

超氧陰離子的清除作用。準(zhǔn)確量取0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液(pH 8.2)5 mL，放在在25 ℃水浴中，20 min預(yù)熱后，分別往試管中加入不同濃度的多糖溶液4 mL，于25 ℃水浴中20 min，再加入25 ℃水浴中預(yù)熱20 min的3 mmol/L鄰苯三酚溶液1 mL，混勻溶液后，置于25 ℃水浴中，反應(yīng)5 min后，加入10 mol/L 鹽酸溶液 1 mL來終止反應(yīng)，于波長320 nm處測定吸光度，用相同體積的蒸餾水代替樣品作為空白對照。超氧陰離子自由基清除率計算公式為:

E=(A空白-A樣品)/A空白

A樣品用相同樣品濃度的空白調(diào)零，消除樣品顏色的影響。

DPPH自由基的清除作用。準(zhǔn)確吸取待測2.0 mL溶液，接著加入0.2 mmol/L DPPH溶液2.0 mL，溶液充分混勻，放置30 min后。用無水乙醇作為調(diào)零溶液，在波長517 nm處，測定吸光值A(chǔ)樣品。同時，把待測樣品溶液2.0 mL和無水乙醇2.0 mL充分混合，在波長517 nm處，測定混合液的吸光度A對照，然后把DPPH溶液2.0 mL和無水乙醇2.0 mL充分混合，在波長517 nm處，測定混合液的吸光值A(chǔ)空白。

清除率( %)=[1-(A樣品-A對照)/A空白]×100

2 結(jié)果與分析

2.1 多糖得率

準(zhǔn)確吸取樣品液，在波長490 nm處，測定樣品液的吸光度，代入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，計算得到樣品多糖的含量。大紅菇水溶性多糖的得率為1.447 %、水不溶性多糖的得率為1.346 %。

2.2 大紅菇硫酸酯多糖的制備及其結(jié)構(gòu)表征

2.2.1 硫酸基含量的測定 利用濃硫酸法修飾大紅菇多糖，制備得大紅菇硫酸酯多糖，硫酸基的含量通過明膠比濁法進(jìn)行測定，通過測定結(jié)果可知大紅菇硫酸酯多糖的硫酸基質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14.95 %，取代度(DS)為0.763 %。

2.2.2 紅外光譜分析 硫酸酯多糖在1240 cm-1處有S=O伸縮振動，815 cm-1處有C-O-S的拉伸振動。以上結(jié)果表明多糖已經(jīng)形成了硫酸酯。

2.3 抗氧化活性測定

2.3.1 清除羥基自由基(·OH) 活性的測定 維生素c 為已知的一種強(qiáng)抗氧化劑。由表1可以看出，水溶性多糖、水不溶性多糖、大紅菇硫酸酯多糖、維生素c對·OH有較強(qiáng)的清除作用，在質(zhì)量濃度0.05～0.40 mg/mL，可以看出樣品質(zhì)量濃度增加，羥基自由基的清除率增加。水溶性多糖、水不溶性多糖、大紅菇硫酸酯多糖、維生素c的最高清除率分別為79.75 %、82.81 %、91.37 %、74.59 %；在質(zhì)量濃度0.05～0.10 mg/mL，水溶性多糖與水不溶性多糖對·OH 的清除能力沒有顯著性差異，清除率低于15 %；質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL時，水溶性多糖、水不溶性多糖與大紅菇硫酸酯多糖均高于抗壞血酸；大紅菇硫酸酯多糖與水不溶性多糖相比較，清除·OH的能力遠(yuǎn)高于水不溶性多糖。根據(jù)EC50的值可以看出，清除·OH的能力為大紅菇硫酸酯多糖>維生素c>水不溶性多糖>水溶性多糖；硫酸酯化以后，水不溶性多糖活性增強(qiáng)。

圖4 水不溶性多糖紅外圖譜Fig.4 Infrared spectrum of water-insoluble polysaccharide

圖5 硫酸酯多糖紅外圖譜Fig.5 Infrared spectrum of water-insoluble polysaccharide

2.3.2 超氧陰離子的清除作用 由表2可以看出，水溶性多糖、水不溶性多糖、大紅菇硫酸酯多糖、維生素c對超氧陰離子有較強(qiáng)的清除作用，在質(zhì)量濃度0.05～0.40 mg/mL，當(dāng)樣品的質(zhì)量濃度增加，超氧陰離子的清除率增強(qiáng)。水溶性多糖、水不溶性多糖、大紅菇硫酸酯多糖、維生素c的最高清除率分別為68.74 %、68.28 %、76.24 %、81.74 %；在質(zhì)量濃度0.05～0.10 mg/mL，水溶性多糖與水不溶性多糖對超氧陰離子的清除能力沒有顯著性差異，清除率低于15 %；在各個質(zhì)量濃度時，大紅菇硫酸酯多糖、水溶性多糖、水不溶性多糖對超氧陰離子的清除效果均低于維生素c；大紅菇硫酸酯多糖與水不溶性多糖相比較，清除超氧陰離子的能力遠(yuǎn)高于水不溶性多糖。根據(jù)EC50的值可以看出，清除超氧陰離子的能力為維生素c > 大紅菇硫酸酯多糖>水溶性多糖>水不溶性多糖；硫酸酯化以后，水不溶性多糖活性增強(qiáng)。

表1大紅菇多糖對·OH清除作用

Table 1 The scavenging effect ofRussulaalutaceaFr. glycan on hydroxyl free radicals

樣品名稱Name樣品濃度(mg/mL)Concentration清除率(%)ScavengingactivityEC50(mg/mL)水溶性多糖00554101143102289202707035138047975 水不溶性多糖00562401143102386202399036753048281 硫酸酯多糖00566401162502457402024037259049137 抗壞血酸(Vc)0059030116040243802251036437047459

表2大紅菇多糖對超氧陰離子清除作用

Table 2 The scavenging effect ofRussulaalutaceaFr. glycan on superoxide anion

樣品名稱Name樣品濃度(mg/mL)Concentration清除率(%)ScavengingactivityEC50(mg/mL)水溶性多糖00551701134602314902855035035046874 水不溶性多糖00555201116702265303010034761046828 硫酸酯多糖00574901164302417302426035461047624 抗壞血酸(Vc)00059850012231002430800218500358460048174

2.3.3 DPPH的清除作用 由表3可知，水溶性多糖、水不溶性多糖、大紅菇硫酸酯多糖、維生素c對DPPH有較強(qiáng)的清除作用；在質(zhì)量濃度0.05～0.40 mg/mL，隨著樣品的質(zhì)量濃度的增加，DPPH清除率明顯上升。水溶性多糖、水不溶性多糖、大紅菇硫酸酯多糖的最高清除率分別為61.8 %、57.48 %、68.19 %、74.59 %;維生素c在質(zhì)量濃度0.005～0.040 mg/mL隨著質(zhì)量濃度的增加而變化，最高清除率為86.15；大紅菇硫酸酯多糖與水不溶性多糖相比較，清除DPPH的能力高于水不溶性多糖。根據(jù)EC50的值可以看出，清除DPPH的能力為維生素c >大紅菇硫酸酯多糖>水溶性多糖>水不溶性多糖；硫酸酯化以后，水不溶性多糖活性增強(qiáng)。

表3大紅菇多糖對DPPH清除作用

Table 3 The scavenging effect ofRussulaalutaceaFr. glycan on DPPH free radicals

樣品名稱Name樣品濃度(mg/mL)Concentration清除率(%)ScavengingactivityEC50(mg/mL)水溶性多糖0058080117630238750306103442604618 水不溶性多糖0053370191502264203488034153045748 硫酸酯多糖00541201116702393502683035327046819 抗壞血酸(Vc)000514470013746002780100122400385850048615

3 討 論

硫酸酯化技術(shù)在多糖的抗氧化活性的研究中是重要的方法之一，由李國榮等[23]發(fā)表的研究硫酸酯化修飾對雞腿菇多糖抗氧化活性的影響，為天然抗氧化劑的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。采用氯磺酸-吡啶法，制備硫酸酯化多糖；以取代度為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)對制備硫酸酯化的酯化條件進(jìn)行優(yōu)化；采用鄰苯三酚自氧化法和鄰二氮菲-金屬鐵離子-H2O2體系，研究 硫酸酯化的體外抗氧化活性。最佳酯化條件為：酯化試劑體積比[V(氯磺酸)∶V(吡啶)= 1∶3]，反應(yīng)溫度90 ℃，反應(yīng)時間2 h。 硫酸酯化后的大紅菇多糖對羥自由基清除率和超氧陰離子自由基清除率均有明顯提高。與雞腿菇多糖相比，硫酸酯化多糖清除羥自由基的能力顯著提高，但清除超氧陰離子自由基的能力有所下降。硫酸酯化的雞腿菇多糖(SWPC)對羥自由基和超氧陰離子自由基均具有一定的清除能力，但對不同基團(tuán)的敏感性差異明顯[23]。由此，多糖及其衍生物在抗氧化能力上的表現(xiàn)，與糖的種類密切相關(guān)，同時受取代位點(diǎn)和硫酸酯化多糖的立體結(jié)構(gòu)影響，具體的機(jī)理有待進(jìn)一步研究。姚秋萍等[24]研究中，對硫酸酯化修飾的油菜花粉多糖的抗氧化活性進(jìn)行了研究，采用濃硫酸法分別在 0和 10 ℃條件下對油菜花粉多糖(RPP)進(jìn)行硫酸酯化修飾，測定了其清除羥基自由基、超氧陰離子自由基和 DPPH自由基的能力，并進(jìn)行了比較和分析。研究結(jié)果表明酯化后得到了取代度分別為 0.89 和 1.36 的 2 個改性產(chǎn)物(S-RPP 1 和 S-RPP 2 )，同時發(fā)現(xiàn)RPP，S-RPP 1 和 S-RPP 2 表現(xiàn)出不同程度的抗氧化活性。清除自由基能力大小順序?yàn)?S-RPP 1 >S-RPP 2 >RPP，研究結(jié)果表明硫酸化修飾能提高油菜花粉多糖的體外抗氧化活性[24]。分析油菜花粉多糖的抗氧化活性提高的原因，可能是因?yàn)檠苌?，多糖的部分支鏈被水解，空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，進(jìn)而使抗氧化活性提高[24]。謝明勇等[25]的研究中對多糖的硫酸化修飾及其結(jié)構(gòu)與生物活性關(guān)系進(jìn)行了討論，分析了硫酸酯化改變抗氧化活性的原因。由于多糖的分子鏈具有一定的構(gòu)象，即多糖分子在溶液中所形成的糖鏈的形態(tài)特點(diǎn)，包括多糖構(gòu)象以及分子鏈的柔順行等。相關(guān)研究表明硫酸化修飾可以改變多糖在溶液中的構(gòu)象，多糖和硫酸化多糖均在水溶液中呈現(xiàn)球形鏈構(gòu)象，而硫酸基團(tuán)的引入使得多糖的構(gòu)象變得更為伸展，進(jìn)而提高其水溶性，從而利于其活性的表達(dá)。

根據(jù)不同文獻(xiàn)的報道，硫酸酯化改變抗氧化活性的研究的進(jìn)展突飛猛進(jìn)，將拓寬多糖的應(yīng)用領(lǐng)域和應(yīng)用范圍。同時為探索大紅菇多糖的構(gòu)效關(guān)系，豐富多糖構(gòu)效關(guān)系研究及拓寬研究領(lǐng)域提供了理論基礎(chǔ)基礎(chǔ)。

4 結(jié) 論

大紅菇經(jīng)過水提、堿提得到的水溶性多糖、水不溶性多糖以及硫酸酯多糖化以后得到的硫酸酯多糖對羥基自由基、超氧陰離子、DPPH都有很好的清除作用。根據(jù)其EC50值表明：對·OH的清除能力：硫酸酯多糖>維生素c >水不溶性多糖>水溶性多糖；維生素c > 大紅菇硫酸酯多糖>水溶性多糖>水不溶性多糖；對DPPH的清除能力為：維生素c >大紅菇硫酸酯多糖>水溶性多糖>水不溶性多糖。

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PreparationandinvitroAntioxidantActivityofSulfatedWater-insolublePolysaccharidesfromRussulaalutaceaFr.

WANG Bai-juan1，YANG Qing-song2，CHEN Ting1，QIN Xiang-dong1, 3，TANG Qing-yan4，XIAO Yao1，YANG Yun-yu1，ZHAO Yan1*

(1.College of Science, Yunnan Agricultural University, Yunnan Kunming 650201, China；2.School of Ethnic Medicine, Yunnan Minzu University, Yunnan Kunming 650500, China ；3.Engineering and Research Center of Industrial Biogas Technology of Yunnan Province University, Yunnan Kunming 650201, China；4.College of Food Science and Technology, Yunnan Agricultural University, Yunnan Kunming 650201, China)

【Objective】 The fruit ofRussulaalutaceaFr. contained a large amount of alkali-soluble polysaccharides, which was chemically modified to increase its water solubility and thereby significantly improved the biological activity of polysaccharides and expanded its application.【Method】In this study, after water-soluble polysaccharides were extracted, the water-insoluble polysaccharides were extracted with alkali and the polysaccharide was modified by sulfuric acid method to improve its water solubility. The scavenging ability of water-soluble polysaccharides, water-insoluble polysaccharides, sulfuric acid polysaccharides and vitamin c to hydroxyl radicals, DPPH radicals and superoxide anions were analyzed and compared.【Result】 The water-soluble polysaccharide withRussulaalutaceaFr. content was 1.447 %, water-insoluble polysaccharide withRussulaalutaceaFr. content was 1.346 %, the sulfate mass parent was detected to be 14.95 %, the degree of sulfation was 0.763 %; 【Conclusion】According to itsEC50values, the values of scavenging activities of hydroxyl radical was in order:sulfated polysaccharides>vitamin C >water-insoluble polysaccharides > water-soluble polysaccharides, the values of scavenging activities of superoxide anion radical was in order:vitamin C > sulfated polysaccharides > water-insoluble polysaccharides > water-soluble polysaccharides, and the values of scavenging activities of DPPH was in order:vitamin C > sulfated polysaccharides > water-insoluble polysaccharides > water-soluble polysaccharides.

RussulaalutaceaFr.; Water-insoluble polysaccharide; Sulfate; Hydroxyl free radical; Superoxide anion; DPPH

1001-4829(2017)12-2673-07

10.16213/j.cnki.scjas.2017.12.010

2016-06-26

國家自然科學(xué)基金項目(31460137)；云南省教育廳基金一般項目(2014C070Y)；云南農(nóng)業(yè)大學(xué)自然科學(xué)青年基金資助項目(2015ZR15)；云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃項目(2015FB147)；云南農(nóng)業(yè)大學(xué)校企合作項目(KX140811)

王白娟(1979-)，副教授，主要從事生物物理研究工作，E-mail：wangbaijuan123@126.com；*為通訊作者：趙 艷，E-mail：zhaoyankm@126.com。

R284.1

A

(責(zé)任編輯王家銀)