共刺激分子B7H3在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá)及意義

賈振宇 劉瑤 王超?

共刺激分子B7H3在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá)及意義

賈振宇 劉瑤 王超?

目的 探討共刺激分子B7H3在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá)及意義。方法 收集2013年5月至2016年5月結(jié)直腸癌手術(shù)切除標(biāo)本60例，免疫組織化學(xué)法檢測血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和B7H3的表達(dá)，并分析其與臨床病理間的關(guān)系。結(jié)果 結(jié)直腸癌血管中B7H3陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織血管（P＜0.05），同時(shí)VEGF在結(jié)直腸癌血管中陽性表達(dá)率亦顯著高于癌旁組織血管（P＜0.05）；B7H3在結(jié)直腸癌血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)水平與患者性別、年齡、腫瘤位置、分化程度無相關(guān)性（P＞0.05），但與腫瘤Dukes分期密切相關(guān)（P＜0.05）；在結(jié)直腸癌血管中B7H3和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.60，P＜0.05）。結(jié)論 B7H3在結(jié)直腸癌血管內(nèi)皮細(xì)胞中存在高表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤Dukes分期密切相關(guān)，血管中B7H3的表達(dá)可能與結(jié)直腸癌血管新生和腫瘤免疫逃逸密切相關(guān)。

結(jié)直腸癌 B7H3 血管內(nèi)皮生長因子 血管新生 腫瘤免疫逃逸

結(jié)直腸癌的發(fā)生是一個(gè)緩慢的演變過程，其病死率在惡性腫瘤中居于第4位［1］。近年來，抗血管治療日益成為結(jié)直腸癌靶向治療的熱點(diǎn)，但同時(shí)其應(yīng)用受到諸多因素的限制，導(dǎo)致結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移率仍處于較高水平［2］。血管新生與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)，在缺乏新生血管支持的情況下，惡性腫瘤僅局限于0.1～0.2cm［3］。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能，能夠降低機(jī)體內(nèi)的免疫監(jiān)視功能，從而促進(jìn)免疫逃逸［4-6］。共刺激分子B7H3是B7家族新發(fā)現(xiàn)的一員，其在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用，有研究發(fā)現(xiàn)B7-H3在多種腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中存在高度表達(dá)［7］。本文探討共刺激分子B7-H3在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá)及意義。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集2013年5月至2016年5月本院結(jié)直腸癌患者60例，其中男34例，女26例；年齡40～83歲。所有患者術(shù)前均未接受化療、放療或其他針對腫瘤的治療，其中Dukes分期A期11例（18.33%），B期 22例（36.67%），C期 15例（25.0%），D期 12例（20.0%），術(shù)后病理均為結(jié)直腸腺癌。腫瘤組織取自腫瘤中央非壞死部分，同時(shí)取自切除瘤緣20cm的腸組織作為對照，其經(jīng)病理學(xué)確認(rèn)為正常組織。取上述組織標(biāo)本保存于4%甲醛溶液中。

1.2 免疫組織化學(xué)法檢測VEGF、B7H3的表達(dá) 組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、抗原修復(fù)、內(nèi)源性過氧化物酶阻斷。5%牛血清蛋白37℃封閉30min，抗VEGF（1：100，武漢博士德公司）、抗B7H3（7.5μg/ml，美國RD公司）4℃過夜，PBS洗滌5min×3次，HRP標(biāo)記的二抗37℃孵育30min，PBS洗片5min×3次，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，逐級脫水，透明，中性樹膠封固。

1.3 免疫組化結(jié)果判定 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果按著色程度：（1）按切片中細(xì)胞著色深淺評分：0分：細(xì)胞未見顯色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。（2）按陽性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞數(shù)的比例，＜30%為 1分，30% ～70%為 2分，＞70%為 3分。?。?）、（2）兩項(xiàng)評分的乘積作為總積分，0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），≥4分為陽性（++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用spearman相關(guān)性檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 B7H3和VEGF在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá) B7H3在結(jié)直腸癌血管中表達(dá)率顯著高于癌旁血管，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。VEGF在癌旁組和結(jié)直腸癌組血管內(nèi)皮細(xì)胞中均有不同程度表達(dá)，但結(jié)直腸癌中表達(dá)率顯著高于癌旁組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 B7H3和VEGF在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá)

2.2 B7H3在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá)水平與臨床病理因素的關(guān)系 B7H3在結(jié)直腸癌血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)水平與患者性別、年齡、腫瘤位置、分化程度無相關(guān)性（P＞0.05），與腫瘤 Dukes分期密切相關(guān)（P＜0.05）。見表2。

表2 B7H3在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá)水平與臨床病理因素的關(guān)系

2.3 B7H3和VEGF在結(jié)直腸癌血管中表達(dá)的相關(guān)性分析 經(jīng)spearman相關(guān)性檢驗(yàn)，B7H3與VEGF在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.60，P＜0.05）。

3 討論

結(jié)直腸癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，在全球范圍內(nèi)，每年約有超過100萬人確診為本病，嚴(yán)重威脅人類健康。結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展與腫瘤自身免疫、腫瘤血管新生密切相關(guān)。腫瘤微環(huán)境中存在多種免疫細(xì)胞及免疫因子的浸潤，其與腫瘤細(xì)胞相互作用，達(dá)到清除腫瘤細(xì)胞的作用，而惡性腫瘤常可以突破機(jī)體的免疫清除，從而逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視。同時(shí)腫瘤細(xì)胞的生長增殖需要大量的氧氣與能量供應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞可依存于人體成熟的血管網(wǎng)絡(luò)，以此進(jìn)一步發(fā)展成較小的腫瘤團(tuán)塊，在正常情況下，機(jī)體可以識(shí)別這種共存關(guān)系，通過減少血流、抑制血管生成、切斷腫瘤血供達(dá)到抑制腫瘤生長的作用。但在低氧等刺激下，腫瘤細(xì)胞分泌大量VEGF等血管因子，抑制機(jī)體對腫瘤共生血管的識(shí)別作用，減少共生血管退化，進(jìn)一步誘導(dǎo)新生血管發(fā)芽，促進(jìn)腫瘤生長。同時(shí)當(dāng)腫瘤細(xì)胞在遠(yuǎn)處定植后，腫瘤微血管隨之形成，腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步生長形成轉(zhuǎn)移灶［8-10］。因此腫瘤血管新生與腫瘤進(jìn)展及轉(zhuǎn)移亦密切相關(guān)。

B7H3是近年來新發(fā)現(xiàn)的協(xié)同刺激分子B7家族的成員之一，主要由T細(xì)胞、B細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞在多種炎癥因子的刺激下誘導(dǎo)產(chǎn)生［11］。研究發(fā)現(xiàn)，B7H3在多種惡性腫瘤及間質(zhì)中浸潤的免疫細(xì)胞中均有表達(dá)，被認(rèn)為可能是通過提供負(fù)性信號(hào)來限制、和/或減弱T細(xì)胞免疫應(yīng)答來介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸，對于促進(jìn)腫瘤進(jìn)展與轉(zhuǎn)移、影響患者預(yù)后具有重要作用［12-16］。但B7-H3在腫瘤中發(fā)揮的作用尚未完全闡明。Zang等發(fā)現(xiàn)B7H3表達(dá)于卵巢癌血管內(nèi)皮細(xì)胞中，并與組織學(xué)分型、臨床分期、疾病復(fù)發(fā)及預(yù)后密切相關(guān)［17］；Mesri等發(fā)現(xiàn)在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECS）轉(zhuǎn)染B7H3 siRNA后，可顯著抑制HUVECS的生長［7］。

本資料顯示，B7H3在結(jié)直腸癌組織血管中大量表達(dá)，且B7H3在結(jié)直腸癌血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)水平與患者Dukes分期密切相關(guān)，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，B7H3與VEGF在結(jié)直腸癌血管中的表達(dá)呈正相關(guān)，而VEGF作為預(yù)測結(jié)腸癌預(yù)后的重要因子，其與結(jié)腸癌浸潤深度、Dukes分期、免疫逃逸及血管侵犯密切相關(guān)［4，18］。因此，作者認(rèn)為血管內(nèi)皮中表達(dá)的B7H3可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其可能與影響腫瘤血管形成、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸有關(guān)。

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Objective To explore the expression and clinical significances of co-stimulatory molecule B7H3 in the vessel endothelium of colorectal cancer. Methods 60 cases of colorectal patients were included in this experiment. The endothelial expression of VEGF and B7H3 were detected by immunohistochemistry. The correlations between B7H3 and the clinicopathological characteristics of CRC were also analyzed. Results The expressions of B7H3 and VEGF were signif i cantly increased in CRC group compared to control group（P＜0.05）. The endothelial expression of B7H3 was positively correlated with Dukes stage（P＜0.05），but had no signif i cant relations to the age，gender，tumour location and differentiation degree（P＞0.05）. The endothelial expression of co-stimulatory molecule B7H3 is positively correlated with VEGF（r=0.60，P＜0.05）. Conclusion B7H3 was increased in the vessel endothelium of colorectal cancer. The endothelial expression of B7H3 is positively correlated with Dukes stage. B7H3 may be participated in the angiogenesis and immune escape process of colorectal cancer.

Colorectal cancer B7H3 Vascular endothelial growth factor Angiogenesis Tumor immune escape

215000 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院

*通信作者