增液湯對(duì)便秘模型大鼠血清MTL和SS含量的影響

于凡+熊洪艷+梁玲

摘要：目的研究增液湯對(duì)便秘模型大鼠血清胃動(dòng)素（MTL）和生長(zhǎng)抑素（SS）含量的影響，在胃腸激素方面探討增液湯治療便秘的作用機(jī)制。方法將60只SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、麻仁膠囊組、增液湯低、中、高劑量組。除正常組外，其余各組復(fù)方地芬諾酯混懸液灌胃復(fù)制大鼠便秘模型，模型成功后，分別給藥7 d，于第8 d取腹主動(dòng)脈血，ELISA法檢測(cè)血清MTL、SS含量。結(jié)果與正常組相比較，模型組MTL含量明顯下降（P<0.05），SS含量明顯增加（P<0.01）。與模型組相比較，麻仁膠囊組可顯著上調(diào)MTL含量（P<0.01），并明顯下調(diào)其SS含量（P<0.05）。增液湯低、中、高劑量組MTL含量均明顯高于模型組（P<0.05），SS含量均明顯低于模型組（P<0.05，P<0.01）。結(jié)論增液湯通過調(diào)節(jié)血清MTL、SS的含量，以促進(jìn)胃腸道蠕動(dòng)，達(dá)到治療便秘的目的。增液湯治療便秘的作用機(jī)制可能與調(diào)控MTL、SS有關(guān)。

關(guān)鍵詞：增液湯；便秘；胃動(dòng)素；生長(zhǎng)抑素

中圖分類號(hào)：R-33文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2017）12-0061-03

【Abstract】Objective： To study the effect of Fluid-increasing Decoction on serum motilin （MTL） and somatostatin （SS） in constipation rats and explore the mechanism of Fluid-increasing Decoction in treating constipation. Methods： 60 SD rats were randomly divided into a normal group， a model group， a Maren capsule group and a Fluid-increasing Decoction groups with low， medium and high dose. Except the normal group， the other groups were intragastrically administrated with diphenoxylate suspension to replicate constipation rat models. After the models were made successfully and respectively given the drug for 7 days， and on the 8th day abdominal aorta blood was taken. ELISA was used to detect the content of serum MTL and SS. Results： Compared with that in the normal group， MTL content in model group decreased significantly （P<0.05） and SS content increased significantly （P<0.01）. Compared with that in the model group， MTL content in Maren capsule group significantly up-regulated （P<0.01）， and its SS content significantly down-regulated （P<0.05）. The MTL contents in Fluid-increasing Decoction groups with low， medium and high dose were significantly higher than those in model group （P<0.05）， and SS content was significantly lower than that in model group （P<0.05， P<0.01）. Conclusion： Fluid-increasing Decoction can regulate the content of serum MTL and SS to promote gastrointestinal motility and achieve the goal of treating constipation. The mechanism of Fluid-increasing Decoction for the treatment of constipation may be related to the regulation of MTL and SS.

【Key words】Fluid-increasing Decoction， constipation， motilin， somatostatin

便秘為臨床常見病，病因復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制尚未有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。有關(guān)研究[1]已證實(shí)，正常人多種胃腸激素參與調(diào)節(jié)和影響結(jié)腸動(dòng)力，其濃度變化與結(jié)腸動(dòng)力關(guān)系密切，而且慢傳輸型便秘患者血中多種胃腸激素水平異常，與結(jié)腸動(dòng)力障礙密切相關(guān)。增液湯出自清·吳鞠通的《溫病條辨》，由玄參、生地、麥冬組成，具有增液潤(rùn)燥之功。本研究通過觀察增液湯對(duì)便秘模型大鼠血清MTL、SS含量的影響，探討其作用機(jī)制，為其臨床治療便秘提供科學(xué)依據(jù)。

1材料

1.1動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體重180～220 g，許可證號(hào)SCXK（湘）2013-0004。購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.2藥物及試劑中藥飲片玄參、生地、麥冬購于昆明東方藥業(yè)有限公司；麻仁膠囊（湖南樂邦制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：Z10880001）；復(fù)方地芬諾酯（常州康普藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H32022716）；大鼠血清胃動(dòng)素ELISA試劑盒（南京森貝伽生物科技有限公司，貨號(hào)：SBJ-R0507）；大鼠血清生長(zhǎng)抑素ELISA試劑盒（南京森貝伽生物科技有限公司，貨號(hào)：SBJ-R0023）。

1.3儀器連續(xù)波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（美國(guó)Epoch公司）；高速離心機(jī)1580R（GeneSpeed公司）。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1增液湯水提浸膏制備稱取所需中藥飲片，置于煎煮容器中，按重量比加8倍藥量的清水浸泡1 h，武火煮沸后開始計(jì)時(shí)，改為文火繼續(xù)煎煮40 min后，經(jīng)三層紗布過濾取汁。第二次和第三次煎煮均分別按重量比加以藥量的6倍水，用相同方法煎煮40 min，以同樣的方法取汁。三次濾液合并，濃縮成1 g含生藥10 g的浸膏，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2分組及造模SPF級(jí)SD大鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為正常組、模型組、麻仁膠囊組（0.37 g/kg）、增液湯高、中、低劑量組（20.8，10.4，5.2 g/kg），每組10只。

根據(jù)文獻(xiàn)[2]報(bào)道方法進(jìn)行大鼠便秘模型的復(fù)制，造模前大鼠禁食不禁水16 h，除正常組外，其余各組大鼠給予復(fù)方地芬諾酯混懸液10 mg/kg灌胃，每天一次，正常組給予等體積蒸餾水灌胃，連續(xù)4周。于造模第2周開始，記錄大鼠體重及排便情況。造模4周后，各治療組大鼠飲食減少，活動(dòng)減少，大便量少，便粒干硬；正常組精神狀態(tài)、二便正常。與正常組相比較，從第2周開始，各治療組大鼠體重及排便粒數(shù)均低于正常組，第4周各治療組大鼠體重及排便粒數(shù)與正常組比較，差異顯著，確定便秘模型復(fù)制成功。

2.3藥物干預(yù)模型成功后，進(jìn)行藥物干預(yù)，以成人每日臨床用量作為等效劑量，按照人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的等效劑量折算法計(jì)算。增液湯以臨床等效量作為中劑量，低劑量：中劑量：高劑量=1：2：4，增液湯各組按照5.2，10.4，20.8 g/kg灌胃不同劑量增液湯，麻仁膠囊組以成人每日臨床用量作為等效劑量，按照人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的等效劑量折算法計(jì)算，灌胃0.37 g/kg麻仁膠囊混懸液，正常組和模型組灌胃蒸餾水正常飼養(yǎng)，給藥7天。

2.4標(biāo)本檢測(cè)藥物干預(yù)7天后，于第8天進(jìn)行標(biāo)本采集。大鼠禁食不禁水24h，10%水合氯醛3 mL/kg腹部注射麻醉，迅速剖開大鼠腹腔，充分暴露腹主動(dòng)脈，取腹主動(dòng)脈血5 mL，靜置30 min后，離心，3000 r/min，4℃，15 min，離心結(jié)束，取血清作為待測(cè)標(biāo)本，存放于-80℃冰箱中待用。后續(xù)操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，檢測(cè)大鼠血清MTL、SS的蛋白濃度。

2.5統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1一般行為表現(xiàn)造模4周，藥物干預(yù)1周，由于灌胃操作不當(dāng)，大鼠死亡5只，收集標(biāo)本過程中，由于實(shí)驗(yàn)操作不當(dāng)，大鼠死亡6只。模型組大鼠飲食、活動(dòng)、大便量均減少，且便粒干硬，正常組精神狀態(tài)、二便正常。

3.2增液湯對(duì)便秘模型大鼠血清MTL含量的影響與正常組相比較，模型組MTL含量明顯下降（P<0.05）。與模型組相比較，麻仁膠囊組可顯著上調(diào)MTL含量（P<0.01）；增液湯低、中、高劑量組MTL含量均明顯升高（P<0.05）。（結(jié)果見表1）

4討論

便秘是臨床多發(fā)病、常見病，主要表現(xiàn)為排便次數(shù)減少、持續(xù)排便費(fèi)力、排便不盡感、糞便干硬等，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量。目前，許多學(xué)者[3-7]認(rèn)為便秘的發(fā)生主要與腸神經(jīng)系統(tǒng)異常、腸神經(jīng)遞質(zhì)異常、Cajal間質(zhì)細(xì)胞異常、胃腸激素異常等有關(guān)。

增液湯由玄參、生地、麥冬組成，具有滋陰潤(rùn)燥的功用，主治陽明溫病，津虧便秘證。方中玄參可滋陰潤(rùn)燥，壯水制火，啟腎水以滋腸燥。生地清熱養(yǎng)陰，壯水生津，以增玄參滋陰潤(rùn)燥之力；麥冬滋養(yǎng)肺胃陰津以潤(rùn)腸燥。正如吳鞠通在《溫病條辨·中焦篇》第11條自注云：“此方妙在寓瀉于補(bǔ)，以補(bǔ)藥之體作瀉藥之用，既可攻實(shí)，又可防虛?！?/p>

復(fù)方地芬諾酯為復(fù)方制劑，主要包含鹽酸地芬諾酯和硫酸阿托品，二者可通過減弱腸道蠕動(dòng)，抑制腸道腺體分泌，造成腸內(nèi)容物通過時(shí)間延長(zhǎng)，腸道水分減少，從而復(fù)制便秘模型。

胃腸激素是由胃腸道內(nèi)分泌細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞釋放的一類小分子化學(xué)物質(zhì)，廣泛分布于人體內(nèi)，是調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的重要物質(zhì)，在便秘的發(fā)生發(fā)展中也有重要作用。其中MTL可在消化間期刺激胃和小腸的運(yùn)動(dòng)，對(duì)胃腸道運(yùn)動(dòng)起興奮作用，研究顯示[8]結(jié)腸MTL水平顯著降低，可引起消化道平滑肌蠕動(dòng)減弱、張力降低，傳輸時(shí)間延長(zhǎng)，從而導(dǎo)致便秘的發(fā)生。SS則對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)有一定抑制作用，通過抑制胃腸平滑肌運(yùn)動(dòng)，延長(zhǎng)腸道內(nèi)容物通過時(shí)間，有研究證實(shí)[9]，SS通過影響結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的興奮性而導(dǎo)致便秘。

本實(shí)驗(yàn)采用增液湯干預(yù)便秘模型大鼠，研究結(jié)果亦表明，增液湯可明顯上調(diào)血清MTL含量，下調(diào)血清SS含量。本課題前期研究發(fā)現(xiàn)增液湯可增加正常大鼠離體腸肌肌張力，縮短實(shí)驗(yàn)動(dòng)物排便時(shí)間，促進(jìn)排便。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，提示增液湯治療便秘的作用機(jī)制可能是通過增加血清MTL含量，減少血清SS含量，以促進(jìn)胃腸道蠕動(dòng)，同時(shí)增加腸肌肌張力，以促使糞便快速通過腸道，縮短排便時(shí)間，從而達(dá)到治療便秘的目的。

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（收稿日期：2017-10-16）