木本錦帶的組培快繁技術(shù)研究

張春吉

（吉林工程職業(yè)學(xué)院，吉林 四平 136000）

木本錦帶的組培快繁技術(shù)研究

張春吉

（吉林工程職業(yè)學(xué)院，吉林 四平 136000）

以休眠的錦帶枝條作為試驗(yàn)材料進(jìn)行了木本錦帶組織培養(yǎng)試驗(yàn)。在分別比較了不同培養(yǎng)基成分對外植體生根及不定芽生成情況的影響后得出試驗(yàn)結(jié)論。試驗(yàn)結(jié)果表明：叢生芽增殖的適宜培養(yǎng)基是1/2 MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L；生根培養(yǎng)基則以1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+瓊脂8 g/L+蔗糖40 g/L為宜。

木本錦帶；組培；快繁技術(shù)

錦帶花，忍冬科錦帶花屬落葉灌木，產(chǎn)自東北、華東地區(qū)，是一種觀賞價值較高的植物。因其花色艷紅粉嫩、葉片翠綠、葉形橢圓可愛，且花期較長，達(dá)3個月之久，故多用于早春灌木，應(yīng)用于園林綠化之中，是一種可增加園林色相、豐富園林綠化景觀的彩葉觀花植物[1,2]。

木本錦帶是由四平市林業(yè)科學(xué)研究院于2012年引入的一批錦帶新品種，頗具觀賞價值，且耐陰、耐寒；對土壤要求不嚴(yán)，能耐貧瘠土壤；萌芽力強(qiáng)，生長迅速。但在繁殖方面因?yàn)殄\帶花屬的植物種子較難采集，制約了錦帶花的大量繁殖。又因在生產(chǎn)時雖采用分株和扦插等方法進(jìn)行生產(chǎn)但仍繁殖數(shù)量有限，因此建立組織快繁技術(shù)對其栽培應(yīng)用具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。紅王子錦帶的組織快繁技術(shù)已有較多報(bào)道，它可通過葉片、莖段再生途徑進(jìn)行擴(kuò)繁，也可通過體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑進(jìn)行增殖[3-5]。與之相比較，木本錦帶的組培快繁研究較少。因此本試驗(yàn)就以休眠的木本錦帶枝條為試驗(yàn)材料，研究了不同因素對其組織培養(yǎng)的影響，以期為木本錦帶的快速繁殖提供更多的有效數(shù)據(jù)?，F(xiàn)具體介紹本次試驗(yàn)過程及試驗(yàn)結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 材料

本試驗(yàn)使用的是休眠的木本錦帶枝條。室內(nèi)試驗(yàn)于2012—2013年在吉林師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 方法

1.2.1 材料準(zhǔn)備及表面消毒

將休眠枝條在實(shí)驗(yàn)室萌發(fā)，成活后剪去枝條頂部，以促進(jìn)分枝生長。當(dāng)新抽生的分枝長至6 cm左右，葉片剛轉(zhuǎn)綠平展時剪下枝條，去除葉片，用自來水沖洗15 min，用洗潔精洗滌 2次后吸干，然后在無菌室超凈臺上用 75%酒精消毒 1 min；用 1/50新潔爾滅液消毒 20 min；再用0.1%氯化汞消毒15 min，最后用無菌蒸餾水沖洗3遍后吸干[6-8]。

1.2.2 無菌培養(yǎng)系的建立與增殖

在超凈臺上剝?nèi)∏o尖，長度 0.5～1.0 mm，余下的枝條，切成1 cm長的莖段(每段帶1～3個腋芽)，淺插于培養(yǎng)基中。培養(yǎng)室溫度為 25℃，光照 12 h/d，光照強(qiáng)度為2 000 lx。增殖培養(yǎng)基為1/2 MS+KT 0.5 mg/L，接入附加不同濃度6-BA與NAA的MS培養(yǎng)基中（表1），比較激素濃度配比對芽增殖的影響。增殖階段的培養(yǎng)物每30 d增殖培養(yǎng)1次[9,10]。

表1 激素濃度配比對木本錦帶芽增殖的影響

1.2.3 試管苗的生根培養(yǎng)

基本培養(yǎng)基選用1／2 MS，然后添加不同質(zhì)量濃度IBA、NAA進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng)。從中篩選合適的培養(yǎng)基配方。不同配方分別接種100株左右，觀察生根情況，經(jīng)20～25 d統(tǒng)計(jì)生根結(jié)果[11]。

1.2.4 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)期間培養(yǎng)基pH值為5.8，瓊脂6 g／L，蔗糖30 g/L，在120 kPa壓力下滅菌20 min。接種后置于培養(yǎng)溫度(25±2)℃、光照強(qiáng)度為l 000～1 500 lx、每天光照12 h的組培室條件下進(jìn)行培養(yǎng)[12,13]。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析

以上試驗(yàn)重復(fù)3次，每次重復(fù)10瓶以上，試驗(yàn)結(jié)果為3次重復(fù)的平均值。采用統(tǒng)計(jì)軟件SAS 8.2中的GLM過程進(jìn)行差異顯著性分析。結(jié)果如為百分?jǐn)?shù)，經(jīng)反正弦轉(zhuǎn)換后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 激素濃度配比對木本錦帶芽增殖的影響

通過對表1的綜合分析可以發(fā)現(xiàn)，出芽率在NAA濃度最低為0.1 mg/L，6-BA濃度最大，即5.0 mg/L時達(dá)到最高，為92.31%。同時此時相應(yīng)的外植體數(shù)目也是最多的，達(dá)到了39這樣的程度。而相對來說，在NAA濃度最高為0.5 mg/L，6-BA濃度最小，即1.0 mg/L時出芽率為63.89%，為最低值；外植體數(shù)目為36。即隨著6-BA濃度的升高、NAA濃度的下降，木本錦帶的出芽率以及外植體數(shù)目是不斷提高的，并且培養(yǎng)皿中單個外植體出芽數(shù)也隨著6-BA的濃度變化而變化。由6-BA濃度最大，即5.0 mg/L時的7.9 a,直至濃度最低，即1.0 mg/L時的5.2 d，是隨著6-BA濃度升高而不斷變大的。因此可以分析得出，在6-BA濃度為5.0 mg/L、NAA濃度為0.1 mg/L時，是最適宜木本錦帶出芽增殖的。

2.2 試管苗的生根培養(yǎng)

由表2可見，通過IBA進(jìn)行生根誘導(dǎo)的3個處理，其生根率在IBA濃度為2.0 mg/L、1.0 mg/L時可達(dá)100%，在濃度為0.5 mg/L時生根率為最低值，是93.33%。這顯著高于相同濃度的NAA處理時得到的數(shù)據(jù)，即在 NAA濃度分別為 2.0 mg/L、1.0 mg/L、0.5 mg/L 時，生根率相應(yīng)為 90.00%、93.33%、73.33%。由此可見，NAA與IBA誘導(dǎo)木本錦帶生根的能力是有顯著差異的。并且同樣能使試管苗生根率可達(dá)100%的經(jīng)IBA處理過的培養(yǎng)基，在IBA濃度為1.0 mg/L時其生根平均根條數(shù)為24.7，平均根長度為4.7 cm。在IBA濃度為2.0 mg/L時，其生根平均根條數(shù)為23.6，平均根長度為3.4 cm。明顯在IBA濃度為1.0 mg/L時根系的生長最好。由此可以得出結(jié)論，即木本錦帶的生根誘導(dǎo)以1/2 MS＋I(xiàn)BA1.0 mg/L＋瓊脂8 g/L＋蔗糖40 g/L為宜。

表2 不同濃度的NAA與IBA對木本錦帶組培苗生根的影響

3 討論

組織培養(yǎng)是目前提高園藝植物繁殖率的重要途徑之一,但是對于部分植物來說,由于體內(nèi)含有內(nèi)生菌,因此組織培養(yǎng)還是有一定難度的。國內(nèi)對紅王子錦帶花的組織培養(yǎng)已有相關(guān)報(bào)道，但尚未見對木本錦帶花的組培快繁研究的相關(guān)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)以休眠的木本錦帶枝條為材料，研究了不同因素對其組織培養(yǎng)的影響，并且為木本錦帶的快速繁殖提供更多的有效數(shù)據(jù)。

本次試驗(yàn)過程當(dāng)中，通過使用不同激素以及不同濃度的激素培養(yǎng)，對比培養(yǎng)結(jié)果，從而了解不同激素以及激素濃度對于植株生長的影響。通過觀察可知，在培養(yǎng)基當(dāng)中 6-BA為5.0 mg/L、NAA為0.1 mg/L時，培養(yǎng)基中試管苗增殖效率最高，試管苗的生長最為健壯。而在IBA為1.0 mg/L時，木本錦帶試管苗生根可達(dá)100%，根須數(shù)量多而長，十分有利于試管苗向土壤中移栽。

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1005-2690（2017）12-0123-02

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2017-11-13）