宮頸癌組織PCNA 、Ki-67的表達(dá)及其與HPV感染的相關(guān)性研究

趙建芳 石 芳

宮頸癌組織PCNA 、Ki-67的表達(dá)及其與HPV感染的相關(guān)性研究

趙建芳 石 芳

目的探討宮頸癌增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、Ki-67表達(dá)及其與人乳頭瘤病毒(HPV)感染的相關(guān)性。方法

隨機(jī)選取72例宮頸病變患者作為觀察組，并以同期40例慢性宮頸炎患者作為對(duì)照組，分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法和聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)患者宮頸組織HPV感染情況。結(jié)果CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組中PCNA和Ki-67陽(yáng)性率、強(qiáng)陽(yáng)性或過(guò)表達(dá)檢出率均高于對(duì)照組(P<0.05)，且CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組PCNA和Ki-67陽(yáng)性率、強(qiáng)陽(yáng)性或過(guò)表達(dá)檢出率均高于CINⅠ組(P<0.05)。PCNA表達(dá)強(qiáng)度與Ki-67表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.713，P<0.05)，且PCNA表達(dá)強(qiáng)度和Ki-67表達(dá)強(qiáng)度與HPV感染均呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.701,0.684，P<0.05)。結(jié)論P(yáng)CNA、Ki-67和HPV感染在不同宮頸病變中的表達(dá)均存在較大差異，臨床聯(lián)合檢測(cè)這3個(gè)指標(biāo)，可以提高宮頸病變的診斷率，值得進(jìn)一步推廣和應(yīng)用。

宮頸癌；增殖細(xì)胞核抗原；Ki-67；人乳頭瘤病毒

宮頸癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于乳腺癌，且逐漸趨于年輕化，嚴(yán)重危害女性的身體健康及生命安全。研究表明，人乳頭瘤病毒(HPV)感染是誘發(fā)宮頸病變的主要病因[1]。增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、Ki-67是與細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，是近年來(lái)廣泛應(yīng)用的細(xì)胞增生標(biāo)記物[2]。其中，PCNA是真核細(xì)胞DNA合成所必需的1種酸性核蛋白，在細(xì)胞增殖過(guò)程中可以直接參與DNA的復(fù)制，因此對(duì)PCNA進(jìn)行檢測(cè)主要可了解DNA合成情況，可作為腫瘤細(xì)胞增殖活性的客觀指標(biāo)[3]；Ki-67為增殖細(xì)胞核相關(guān)抗原，易通過(guò)免疫組化方法進(jìn)行檢測(cè)，是反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的理想標(biāo)記物[4]。本次選取近年來(lái)我院收治的72例行手術(shù)治療的宮頸癌患者作為研究對(duì)象，并與同期40例慢性宮頸炎患者的PCNA、Ki-67表達(dá)及其與HPV的感染情況進(jìn)行對(duì)比分析，以期為宮頸癌的臨床診斷提供可靠參考。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象與分組

隨機(jī)選取我院72例宮頸病變患者作為觀察組，收治時(shí)間為2010年8月至2016年8月，均行子宮切除術(shù)或?qū)m頸錐切術(shù)，年齡26～75歲，其中宮頸癌40例，均為高分化鱗癌，Ⅰ期18例，Ⅱa期22例；宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)32例，CIN Ⅰ期16例，CIN Ⅱ期7例，CIN Ⅲ期9例。對(duì)照組為同期40例慢性宮頸炎患者。宮頸癌、CIN及慢性宮頸炎患者的納入標(biāo)準(zhǔn)[5-6]：①知情并接受本次研究；②經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診，宮頸癌、CIN患者術(shù)前活檢確診為CIN及以上病變，慢性宮頸炎患者經(jīng)術(shù)前組織活檢排除宮頸癌前病變；③適合行子宮切除或?qū)m頸錐切術(shù)；④術(shù)前未進(jìn)行放療、化療；⑤未合并急性婦科炎癥等其他合并癥。

1.2 方法

檢測(cè)病變組織的PCNA、Ki-67抗原表達(dá)均采用免疫組織化學(xué)S-P法，應(yīng)用HPV通用引物MY09/11行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)病變組織中的HPV感染情況。試劑材料主要有：小鼠抗人單克隆PCNA抗體、兔抗人單克隆Ki-67抗體、S-P 通用型試劑盒(均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司)，DAB顯色試劑盒(北京中山生物技術(shù)有限公司)，PCR反應(yīng)試劑盒(上海生工生物工程公司)。組織標(biāo)本以10% 福爾馬林溶液固定，并用石蠟包埋切片，陽(yáng)性對(duì)照為已知陽(yáng)性鱗癌組織切片，陰性對(duì)照由PBS代替一抗。

1.3 結(jié)果判斷

閱片均采用盲法，由2～3名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生獨(dú)立進(jìn)行，相差范圍若>10%則重新判斷。PCNA、Ki-67陽(yáng)性為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。結(jié)果判斷采用半定量法，分為4個(gè)級(jí)別：陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞比例<10%為“-”，10%～25%為“+”，26%～50%為“++”，>50%為“+++”；++～+++為強(qiáng)陽(yáng)性或過(guò)表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以(n，%)表示，顯著性檢驗(yàn)經(jīng)卡方分析或Fisher 確切概率法，等級(jí)相關(guān)性分析用Spearman相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取0.05。

2 結(jié)果

2.1 宮頸組織中PCNA、Ki-67陽(yáng)性率比較

從表1中可以看出，CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組織中PCNA、Ki-67陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組織中PCNA、Ki-67陽(yáng)性率均高于CINⅠ組(P<0.05)。

表1 各宮頸組織中PCNA、Ki-67陽(yáng)性率比較/例

注：①表示與對(duì)照組相比較，P<0.05；②表示與CINⅠ組相比較，P<0.05。

2.2 各宮頸組織中PCNA、Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性或過(guò)表達(dá)檢出率比較

從表2中可以看出，CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組PCNA、Ki-67檢出率均高于對(duì)照組(P<0.05)，且CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組PCNA、Ki-67檢出率均高于CINⅠ組(P<0.05)。通過(guò)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，PCNA表達(dá)強(qiáng)度與Ki-67表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.713，P<0.05)。

2.3 PCNA、Ki-67各組與HPV感染相關(guān)性分析

72例宮頸病變和40例慢性宮頸炎患者PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：HPV陽(yáng)性64例，HPV陰性48例。經(jīng)過(guò)Spearman分析，PCNA、Ki-67表達(dá)強(qiáng)度與HPV感染均呈正相關(guān)關(guān)系(γ分別為0.701、0.684，P<0.05)，見(jiàn)表3。

表2 各組PCNA、Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性或過(guò)表達(dá)檢出率比較(例,%)

注：①表示與對(duì)照組相比較，P<0.05；②表示與CINⅠ組相比較，P<0.05。

表3 HPV陽(yáng)性、陰性患者PCNA、Ki-67表達(dá)情況/例

3 討論

宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是1個(gè)漸變的過(guò)程，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是宮頸癌的癌前病變，其在發(fā)病過(guò)程中的重要階段。宮頸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性腫瘤細(xì)胞時(shí)表現(xiàn)為過(guò)度增殖和異常分化，必然伴有增殖活性改變，所以評(píng)價(jià)與細(xì)胞增殖相關(guān)的標(biāo)志物的表達(dá)水平對(duì)宮頸癌和CIN的臨床診斷具有重要意義。

PCNA和Ki-67均是存在于細(xì)胞增殖期的蛋白質(zhì)，是目前最常用的腫瘤增殖標(biāo)記物。有研究表明，PCNA具有協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)換細(xì)胞周期阻滯、修復(fù)損傷DNA的功能[7]，它能夠確切反映細(xì)胞增殖的活躍程度，只在正常組織的增殖部位表達(dá)，且在細(xì)胞周期的不同階段表達(dá)有所不同。Ki-67主要表達(dá)在增殖細(xì)胞的細(xì)胞核中，在靜止期細(xì)胞不表達(dá)，因此不僅能夠用于判斷腫瘤的良、惡性及惡性程度，而且還能用于評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖的活性、細(xì)胞周期與腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為與預(yù)后的關(guān)系[8]。苗龍等[9]通過(guò)對(duì)胃癌患者腫瘤組織中PCNA和Ki-67的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)和分析，認(rèn)為二者隨著患者病情的加重強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)顯著增多，且陽(yáng)性表達(dá)的范圍逐漸增大。董永學(xué)等[10]采用免疫組織化學(xué)S-P法對(duì)宮頸病變組織標(biāo)本PCNA、Ki-67的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)和分析，認(rèn)為CIN組織的PCNA、Ki-67表達(dá)陽(yáng)性率高于正常宮頸炎組織，宮頸癌組織的PCNA、Ki-67均存在強(qiáng)陽(yáng)性或過(guò)表達(dá)。本次研究結(jié)果顯示，不同分期CIN、宮頸癌腫瘤組織的PCNA、Ki-67表達(dá)水平不同，且二者的表達(dá)陽(yáng)性率均高于慢性宮頸炎腫瘤組織，與上述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)論基本一致。此外，CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌的PCNA、Ki-67陽(yáng)性率均高于CINⅠ組，PCNA、Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性或過(guò)表達(dá)用于預(yù)測(cè)CINⅡ、CINⅢ期病變均具有較高的靈敏度，因此可將PCNA、Ki-67用于對(duì)CIN的臨床篩查與預(yù)測(cè)。

報(bào)道顯示[11]，HPV感染與宮頸癌的發(fā)生具有密切的關(guān)系，其在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達(dá)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。目前，宮頸癌的病因及發(fā)病機(jī)制尚不十分明顯，而HPV被認(rèn)為是宮頸癌的最主要的影響因素，尤其是高危型HPV在宮頸癌的篩查和預(yù)后中具有重要作用[12]。本次研究結(jié)果顯示，宮頸組織中PCNA表達(dá)強(qiáng)度與Ki-67表達(dá)強(qiáng)度呈正相關(guān)，且二者的表達(dá)強(qiáng)度與HPV感染也呈正相關(guān)性，說(shuō)明了HPV感染與PCNA、Ki-67表達(dá)均呈正相關(guān)性，因此在檢測(cè)HPV感染時(shí)，可以聯(lián)合PCNA、Ki-67等相關(guān)指標(biāo)，有助于提高檢測(cè)的特異性和靈敏度。綜上所述，PCNA、Ki-67和HPV感染在不同宮頸病變中的表達(dá)均存在較大差異，臨床中聯(lián)合檢測(cè)這三個(gè)指標(biāo)，可以提高宮頸病變的診斷率，值得進(jìn)一步推廣和應(yīng)用。

[1] 吳英娟.宮頸癌組織中 HMGB-1,PCNA 的表達(dá)變化及臨床意義〔J〕.山東醫(yī)藥,2015,55(23):21-23.

[2] 雷 蕾,葉 斌,王西川.p16,p53 和 Ki67 在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.實(shí)用醫(yī)院臨床雜志,2014,11(4):123-125.

[3] 徐韶杰,董稚明.PCNA 在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及意義〔J〕.中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志,2011,12(2):134-136.

[4] 李 幔.PCNA,Ki67 及 p27 在子宮內(nèi)膜腺癌中表達(dá)的臨床意義及相關(guān)性研究〔D〕.鄭州大學(xué),2012.

[5] 齊朝陽(yáng),陳 艷,曾 鴻,等.宮頸上皮內(nèi)腫瘤 P16,P53,Ki67,P63 的表達(dá)與 HPV 感染及其臨床意義〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2011,27(20):3638-3640.

[6] 余愛(ài)平.TRKB,BDNF 和 PCNA 在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及其臨床意義〔D〕.武漢科技大學(xué),2011.

[7] 陳廷玉,盧春鳳,苗 智,等.宮頸癌 PCNA 和 PTEN 的表達(dá)與癌細(xì)胞增殖及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.解剖學(xué)研究,2010,32 (1):17-20.

[8] 何慧儀,盧麗娜,杜 洪,等.Ki67,Survivin,P16 表達(dá)在宮頸癌和宮頸癌前病變?cè)\斷中的意義〔J〕.中國(guó)婦幼保健,2006,21(13):1825-1827.

[9] 苗 龍,黃曉俊.Ki67 和 PCNA 在胃癌中的表達(dá)及其臨床診斷價(jià)值〔J〕.臨床內(nèi)科雜志,2011,28(2):95-98.

[10] 董永學(xué).宮頸病變 PCNA,Ki-67 表達(dá)檢測(cè)及其與 HPV 感染相關(guān)性研究〔J〕.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2015,36(21):3083-3085.

[11] 魏 聰,劉遠(yuǎn)程,王友強(qiáng),等.宮頸病變中 PCNA,Ki-67 的表達(dá)及其與 HPV 感染的相關(guān)性分析〔J〕.中國(guó)婦幼保健,2015,30(22):3873-3876.

[12] 趙 義,楊義軍,涂海健.宮頸病變中 PCNA,Ki-67 的表達(dá)及其與高危型 HPV 感染的相關(guān)性分析〔J〕.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015,21(4):523-526.

ExpressionofPCNAandKi-67inCervicalCancerandtheCorrelationwithHPVInfection

ZHAOJianfang,SHIFang.

Yan’anTCMHospital,Yan’an,716000

ObjectiveTo investigate the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and Ki-67 in cervical carcinoma and the correlation with human papilloma virus (HPV) infection.Methods72 cases of cervical lesions patients were selected as the observation group.And 40 cases of chronic cervicitis in the same period as the control group.The HPV infection of cervical cancer were detected by immunohistochemistry S-P method and polymerase chain reaction.ResultsThe positive rates and the strong positive or over expression detection rate of Ki-67 and PCNA in CINⅠ group,CINⅡ group,CINⅢ group and the cervical cancer group were higher than those of the control group(P<0.05).And the positive rates and the strong positive or over expression detection rate of Ki-67 and PCNA in CINⅡ group,CINⅢ group and the cervical cancer group were higher than those of CINⅠ group (P<0.05).The expression intensity of PCNA was positively correlated with the intensity of Ki-67 expression,and the correlation coefficient was 0.713(P<0.05).The expression intensity of PCNA and Ki-67 were positively correlated with HPV infection,and the correlation coefficients respectively were 0.701,0.684(P<0.05).ConclusionThe expression of PCNA,Ki-67 and HPV in different cervical lesions are significantly different.Combined detection of these 3 indicators can improve the diagnosis rate of cervical lesions.It is worthy of further popularization and application.

Cervical cancer;Proliferating cell nuclear antigen(PCNA);Ki-67;Human papilloma virus( HPV)

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1774～1776)

716000 陜西省延安市中醫(yī)醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.010

R737.33

A

1001-5930(2017)11-1774-03

2016-10-07

2017-04-20)

(編輯：吳小紅)