寧神靈對卒中后抑郁血漿IL-1β、IL-2、IL－6和TNF－α影響的研究

蔡蕭君 王 磊 吳超全 王旭玲 胡春梅

（黑龍江省中醫(yī)藥科學院·哈爾濱市 150036）

·學術(shù)探討·

寧神靈對卒中后抑郁血漿IL-1β、IL-2、IL－6和TNF－α影響的研究

蔡蕭君 王 磊 吳超全*王旭玲**胡春梅

（黑龍江省中醫(yī)藥科學院·哈爾濱市 150036）

目的：探討寧神靈對腦卒中后抑郁（PSD）患者血清細胞因子水平的影響及療效觀察。方法：選取確診120例PSD患者隨機分為寧神靈組90例和對照組患者30例，兩組均予以腦血管病常規(guī)治療和康復訓練。寧神靈組加用寧神靈治療，對照組加用安慰劑治療，療程均為8周。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測白介素-1β（IL-1β)、白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）濃度,觀察IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α與卒中后抑郁的相關(guān)性。結(jié)果：治療8周后，治療組患者血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平較前均有明顯下降（P＜0.05或P＜0.01），且寧神靈組下降值較對照組更明顯（P＜0.05）；IL-2水平明顯上升（P＜0.05），寧神靈組臨床總有效率（91.0%）明顯高于對照組（77.5%）（X2=5.16，P＜0.05）。結(jié)論：寧神靈治療PSD具有較好的療效，作用機制與其降低血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平，升高血清IL-2水平，而調(diào)節(jié)血清細胞因子水平，糾正細胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡狀態(tài)可能成為臨床治療PSD的新途徑。

寧神靈 IL-1β IL-2 IL-6 TNF-α 卒中后抑郁

腦卒中后抑郁（post-strokedepression，PSD）是腦卒中常見的并發(fā)癥之一，臨床主要表現(xiàn)為患者情感、性格的改變[1],文獻報道發(fā)生率約35%～55%[2]。

PSD不僅有不良的情緒體驗和軀體功能障礙，還嚴重影響患者的生活質(zhì)量［3］，影響患者肢體功能的康復［4-5］，有研究證明伴有PSD患者的死亡率高于不伴有PSD患者［6］，腦卒中后抑郁的發(fā)病機制尚不清楚，細胞因子與精神活動有著密切的關(guān)系，抑郁發(fā)生過程伴有炎癥細胞因子IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α的改變，參與或介導了抑郁狀態(tài)的形成。

近年來研究發(fā)現(xiàn)PSD的發(fā)病過程與炎癥細胞因子水平異常密切相關(guān)。寧神靈是一種新型抗抑郁中成藥，在治療PSD較好的療效但其具體作用機制尚不完全透徹。本實驗采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測寧神靈對卒中后抑郁IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α濃度，觀察寧神靈對PSD患者血清細胞因子水平的影響，并進行臨床療效觀察，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從2012年1月～2016年10月在黑龍江省第三醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院患者中選取患者PSD30例（男15例，女15例）作為對照組；選取符合PSD診斷標準的患者90例，輕、中度抑郁患者各30例（男15例，女15例）。年齡39～76歲，平均年齡56±7.03歲，各組患者的一般資料比較無顯著差異，具有可比性。

1.2 納入標準

（1）診斷依據(jù)第四屆全國腦血管病學術(shù)會議制定的各類腦血管病診斷標準（1996）［7］；（2）所有患者均經(jīng)頭顱CT或MRI證實。（3）均為首次急性發(fā)病。（4）病程在1周內(nèi)。（5）卒中后抑郁的診斷標準腦卒中患者病程在1個月以內(nèi)，抑郁患者均符合中國精神疾病分類第三版（CCMD-3）［8］、國際疾病分類第10版（ICD-10）［9］、和美國精神障礙診斷統(tǒng)計手冊第4版（DSM-IV）［10］的抑郁癥診斷標準，應(yīng)用漢密爾頓抑郁量表（HAMD-17）［11］進行測評，HAMD評分8～16分為輕度抑郁，17～23分為中度抑郁，≥24分為重度抑郁。且抑郁病程至少持續(xù)2周或以上者。（6）由精神科醫(yī)師詳細詢問研究對象的病史后進行一般體檢、神經(jīng)系統(tǒng)體格檢查。（7）由2名精神科醫(yī)師分別進行評定，依據(jù)漢密爾頓抑郁量表，選取卒中后輕度抑郁組、中度抑郁組、重度抑郁組患者各40例。

1.3 排除標準

（1）伴有其他腦器質(zhì)疾病者。（2）失語、失用、認知功能障礙、意識障礙者。（3）有精神障礙個人史或家族史陽性者。（4）有嚴重的軀體疾病，如心功能衰竭、肺功能衰竭、腫瘤；心肌梗死及其他心臟疾??；嚴重肝、腎疾??；代謝性疾病者。（5）患血液及自身免疫性疾病或服用過免疫抑制劑者。（6）1個月內(nèi)服用過激素類藥物、神經(jīng)阻滯劑、免疫調(diào)節(jié)劑。

1.4 治療方法

兩組患者均予以腦血管病常規(guī)治療和康復訓練。寧神靈組患者在此基礎(chǔ)上加用寧神靈(黑龍江省中醫(yī)研究院制劑廠生產(chǎn),外觀為深棕色顆粒,每袋15g,相當于生藥45g),每次2袋,每日3次。對照組患者給予安慰劑治療。兩組的療程均為8周。觀察并比較兩組患者治療前后血清細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6水平的變化，并進行臨床療效觀察。

1.5 血清細胞因子檢測

1.5.1 標本采集 所有患者禁食水12小時，于次日晨6～8時取肘靜脈血5ml。將抽取的血液置于含10%EDTA-Na2抗凝的塑料真空采血管中，輕輕搖勻后，室溫下靜置20min后，4℃下離心，3000r/離心5min，取上層血清裝于1.5mlEp-pendorf管中，置于－80℃低溫冰箱保存待測。

1.5.2 檢測指標 血清中IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α的濃度水平測定。

1.5.3 檢測方法 IL-1β、IL-2、IL-6及TNF-α放射免疫試劑盒購自上海卓康生物科技有限公司（進口分裝）。由檢驗科專職工作人員成批測定其水平。各細胞因子濃度由酶聯(lián)免疫吸附法（ELSIA）、全自動酶標儀檢測，操作步驟嚴格按照試劑盒所附說明書進行。

1.5.4 抗抑郁療效標準[12]采用HAMD量表的減分率進行抗抑郁療效評定，其中治愈：治療后HAMD評分減分率＞75%；有效：HAMD評分減分率25%～75%；無效：HAMD評分減分率＜25%。定義臨床總有效率為治愈率和有效率之和。

1.6 統(tǒng)計學處理

實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示,應(yīng)用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析,計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，組內(nèi)治療前后比較采用配對t檢驗，組間比較采用成組設(shè)計的t檢驗；計數(shù)數(shù)據(jù)結(jié)果用率表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-6水平的變化（見表1）

兩組患者治療前血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。治療8周后，寧神靈組患者（輕、中、重組）血清TNF-α、IL-1β、和IL-6水平較治療后均有明顯下降，組間比較均存在顯著性差異（P＜0.05），與安慰劑組比較有顯著性差異（P＜0.05），安慰劑組無變化（P＞0.05）；寧神靈組血清IL-2濃度升高，與安慰劑組比較顯著性差異（P＜0.05），組間比較顯著性差異（P＜0.05），安慰劑組無明顯變化（P＞0.05）。

表1 卒中后不同程度抑郁癥患者細胞因子水平比較（x±s，ng/l）

2.2 兩組患者治療后臨床療效比較治療8周后，寧神靈組患者的臨床總有效率（82.22%）明顯高于安慰劑組0%）。見表2。

表2 兩組患者治療后臨床療效比較（x±s，ng/l）

3 討論

PSD是腦卒中常見的并發(fā)癥，以情緒障礙為主要表現(xiàn)形式。PSD不僅給患者帶來巨大心理痛苦和軀體功能障礙，影響患者的生存質(zhì)量，而且延緩患者神經(jīng)和運動功能恢復的時間，增加患者的致殘率與死亡率，引起腦卒中的復發(fā)，需積極干預(yù)治療[13]。有關(guān)PSD的發(fā)生機制迄今國內(nèi)外尚未完全明了，近年來國內(nèi)外學者對其進行了深入廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)其發(fā)病機制與炎癥細胞因子表達失衡密切相關(guān)，PSD發(fā)病的炎癥細胞因子假說備受臨床的關(guān)注，該學說認為PSD患者體內(nèi)可能存在促炎癥細胞因子與抗炎癥細胞因子的比例失調(diào)，即PSD患者體內(nèi)可存在炎癥細胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡，其中TNF-α、IL-6和IL-1β、IL-2是與PSD關(guān)系較密切的促炎癥細胞因子[14，15]。

IL-1是最早被認為神經(jīng)肽的細胞因子之一，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的各種細胞，包括內(nèi)皮細胞、小膠質(zhì)細胞、星形細胞和神經(jīng)元可以合成IL-1，正常時腦內(nèi)只有少量IL-1表達，主要分布于海馬、下丘腦、皮質(zhì)，腦缺血再灌注后IL-1表達明顯，增加幅度與缺血程度、持續(xù)時間相關(guān)。IL-1是具有多向性生物功能的炎癥介質(zhì)，對炎癥和免疫反應(yīng)具有調(diào)節(jié)作用，與神經(jīng)元的損害密切相關(guān)?？梢鸾M織因子樣凝固性增高。破壞凝血、抗凝機制，易于形成血栓。其次，IL-1能促進IL-2，IL-6，IL-8等細胞因子的合成，后者可協(xié)同IL-1的促炎作用。在細胞因子抑郁關(guān)系上，2001年Owen［16］等再次發(fā)現(xiàn)抑郁與IL-1產(chǎn)生增加相關(guān)，并且在理論上他認為IL-1產(chǎn)生增加與抑郁有關(guān)，無論是心因性還是軀體反應(yīng)性抑郁，外周和中樞IL-1的增加和炎癥反應(yīng)系統(tǒng)的激活，高度激活HPA軸，引起了抑郁狀態(tài)，IL-1是抑郁的一個特異性指標。

IL-6的研究較為成熟，是一種典型的具有多種生物學作用的促炎細胞因子，主要由T淋巴細胞、B淋巴細胞、單核細胞、內(nèi)皮細胞產(chǎn)生，血管內(nèi)皮細胞、血管平滑肌細胞、星形膠質(zhì)細胞、小膠質(zhì)細胞及脂肪細胞等也可以產(chǎn)生IL-6，IL-6參與了機體多種組織細胞的生長、分化和功能調(diào)節(jié)，在免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，是機體免疫－神經(jīng)－內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)的主要因子。文獻報道IL-1β、IL-2、IL-6與非器質(zhì)性抑郁癥的相關(guān)性非常顯著，提示細胞因子可能在抑郁狀態(tài)的發(fā)病機理中起重要作用。Mase等一系列報道抑郁癥患者的血清IL-1β、IL-6升高，據(jù)此又提出了單核細胞－T細胞－淋巴細胞假說：認為抑郁癥存在細胞介導的免疫激活［16-17］。血清細胞因子水平顯著增加，特別是IL-1β、IL-6明顯升高［18-19］，提示細胞因子可能在抑郁癥的發(fā)病機制中起著重要作用。

IL-2為調(diào)控IL-1β、IL-6的相關(guān)因子，在IL-1的變化中有著重要作用，有文獻報道IL-2與原發(fā)性抑郁有直接相關(guān)性。TNF-α可反映組織損傷的程度，在機體免疫調(diào)節(jié)、免疫應(yīng)答中有重要提示作用。

近年來，隨著免疫學理論和實驗技術(shù)的發(fā)展，精神癥狀與免疫系統(tǒng)關(guān)系的研究也日見增多，研究表明，神經(jīng)－內(nèi)分泌－免疫系統(tǒng)之間相互聯(lián)系和相互作用，PSD的發(fā)病機制主要有心理反應(yīng)性學說，以Singh［20］為代表，認為PSD是由于卒中導致的肢體癱瘓引發(fā)的心理反應(yīng)，這種觀點至今得到不少學者的支持。目前細胞因子導致抑郁癥的機制尚不明確。細胞因子多由星形細胞和小膠質(zhì)細胞產(chǎn)生，在特定的情況下，神經(jīng)元也能產(chǎn)生細胞因子［21］。此外，Gourin等報道，受到液壓損傷的體外培養(yǎng)的人腦微血管內(nèi)皮細胞能夠分泌大量IL-1。在神經(jīng)內(nèi)分泌研究方面，有充分的證據(jù)表明情感性疾病與神經(jīng)內(nèi)分泌功能的調(diào)節(jié)有密切關(guān)系。邊緣系統(tǒng)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)情感活動的部位，而這一部位又是調(diào)節(jié)下丘腦－垂體內(nèi)分泌功能的關(guān)鍵部位。在情感疾病中，受到較多重視的是下丘腦－垂體－腎上腺（HPA軸）。

神經(jīng)內(nèi)分泌尤其是HPA軸的異常在抑郁癥的發(fā)病中起著重要作用。抑郁癥患者多有HPA軸活動亢進，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRF）高分泌以及血漿皮質(zhì)醇濃度顯著增高和地塞米松抑制實驗（DST）陽性?？赡艿臋C制是垂體、白細胞介素－1和胸腺能刺激ACTH分泌，進而激活HPA軸，HPA軸活性增強可抑制免疫，如抑制淋巴細胞產(chǎn)生T細胞生長因子或白細胞介素-2，通過阻止IL受體而抑制干擾素功能，以及抑制中性白細胞的吞噬作用和降低天然殺傷細胞活性［22］。在整個過程中，慢性應(yīng)激導致抑郁癥的一個重要步驟就是HPA軸激活，最終導致糖皮質(zhì)激素的升高，高水平糖皮質(zhì)激素負反饋作用于HPA軸的下丘腦和垂體，使HPA軸的激活恢復到正常狀態(tài)，細胞因子能夠通過打亂外周循環(huán)的糖皮質(zhì)激素對HPA軸的負反饋抑制而導致HPA軸過度激活，而產(chǎn)生抑郁癥狀［23］。而且細胞因子同時可誘導下丘腦、垂體等部位皮質(zhì)激素受體功能改變，導致下丘腦、垂體對皮質(zhì)激素升高失去敏感，負反饋功能受損，造成HPA軸持久活動過度，產(chǎn)生抑郁[24]。

寧神靈顆粒是國醫(yī)大師張琪教授經(jīng)多年臨床研究，在我國漢代醫(yī)圣張仲景的“小柴胡湯”基礎(chǔ)上加減而成，該方組方合理、配伍嚴謹。寧神靈沖劑收載于《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第8分冊，標準號：WS3-B-1529-93。寧神靈沖劑功效：舒肝開郁，鎮(zhèn)驚安神。用于頭昏頭痛，心煩易怒，心悸不寧，胸悶少氣，驚厥抽搐，少寐多夢。方中柴胡疏肝解郁；黃芩、大黃苦寒,清心火,泄熱平肝,大黃為清疏肝經(jīng)郁火之要藥；龍骨、牡蠣鎮(zhèn)靜安神,潛陽平肝,收斂心氣浮越；半夏、茯苓化痰濁開竅；丹參活血行氣化瘀；人參養(yǎng)心益氣；桂枝為通補心氣心陽之妙藥。諸藥相伍,共奏清肝養(yǎng)心、鎮(zhèn)靜安神之功。

張琪教授在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)并總結(jié)出寧神靈在抑郁癥治療上，同樣能獲得令人滿意的顯著療效。病人服用后，精神舒暢，心情愉快；心煩易怒、煩擾不寧等各種精神神經(jīng)癥狀迅速消失。與西藥作用迥然不同，它針對神經(jīng)抑制和興奮過程失調(diào)而組方，通過雙向調(diào)節(jié)大腦皮層興奮和抑制神經(jīng)的過程，消除焦慮、不安、煩躁，以達到鎮(zhèn)定的良好效果，具有中藥復方的雙向調(diào)節(jié)作用。因此，為擴大寧神靈濃縮丸的用藥人群，增加藥物的治療范圍，本次項目研究的重點，將在臨床療效確切的基礎(chǔ)上，開展增加適應(yīng)癥研究，同時對其治療抑郁癥的作用機制進行深入的探討。

本研究結(jié)果表明，細胞因子與抑郁的發(fā)生直接相關(guān),且隨著抑郁程度的增加，PSD患者血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平明顯高于安慰劑組，IL-1β、IL-6、TNF-α與PSD呈正相關(guān)，寧神靈組血清IL-2水平升高，且寧神靈組患者的臨床總有效率明顯高于對照組。對血清細胞因子增高的腦卒中患者予以積極有效的抗抑郁干預(yù)，可降低患者的抑郁情緒，促進患者神經(jīng)和運動功能的恢復。因此，調(diào)節(jié)血清炎癥細胞因子的表達水平，糾正炎癥細胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡可能是PSD治療的一種新途徑[25]。

寧神靈治療PSD具有較好的臨床療效，是治療PSD較為理想的中成藥物，作用機制與其降低血清炎癥因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平，升高IL-2水平，糾正炎癥細胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡密切相關(guān)，這可能是寧神靈治療PSD的另外一種作用機制。

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* 黑龍江省衛(wèi)生廳科研課題 課題編號：2011-693

** 黑龍江省第三醫(yī)院·北安市 160090