負(fù)性調(diào)控因子IRAKM在系統(tǒng)性紅斑狼瘡免疫調(diào)節(jié)異常中的作用①

武延格 邱勁軍 劉宏霞 張 波 龔宇鋒

(深圳市坪山區(qū)人民醫(yī)院病理科，深圳 518000)

負(fù)性調(diào)控因子IRAKM在系統(tǒng)性紅斑狼瘡免疫調(diào)節(jié)異常中的作用①

武延格 邱勁軍②劉宏霞 張 波 龔宇鋒

(深圳市坪山區(qū)人民醫(yī)院病理科，深圳 518000)

目的研究白介素-1受體相關(guān)激酶-M(IRAKM)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)中的表達(dá)及其與免疫調(diào)節(jié)的關(guān)系。方法將103例SLE患者根據(jù)其疾病活動(dòng)度評(píng)分(SLEDAI)分為活動(dòng)期組(55例)和穩(wěn)定期組(48例)，另選40名體檢健康者作為對(duì)照組；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測(cè)3組外周血單核細(xì)胞中IRAKM mRNA的表達(dá)量，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中抗ds-DNA抗體、抗Sm抗體水平，免疫散射比濁法測(cè)定血清補(bǔ)體C3、C4水平；應(yīng)用單因素方差分析法分析3組各觀察指標(biāo)的差異，Pearson或Spearman分析IRAKM與SLE自身抗體及補(bǔ)體的相關(guān)性。結(jié)果活動(dòng)期組和穩(wěn)定期組SLE患者的IRAKM mRNA表達(dá)量均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，且活動(dòng)期組比穩(wěn)定期組更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與對(duì)照組比，活動(dòng)期組和穩(wěn)定期組血清抗ds-DNA抗體和抗Sm抗體水平均明顯升高(P<0.05)，補(bǔ)體C3、C4的水平均明顯降低(P<0.05)，且活動(dòng)期組血清自身抗體和補(bǔ)體水平變化較穩(wěn)定期組更顯著(P<0.05)；SLE患者的IRAKM mRNA表達(dá)量與抗ds-DNA抗體和抗Sm抗體水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與補(bǔ)體C3、C4水平呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論IRAKM負(fù)性調(diào)控參與SLE的免疫調(diào)節(jié)過(guò)程，其表達(dá)水平與SLE病情活動(dòng)程度密切相關(guān)。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；白介素-1受體相關(guān)激酶-M；免疫調(diào)節(jié)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)是一種多發(fā)于青年女性的自身免疫性炎癥性結(jié)締組織疾病，病變累及多系統(tǒng)、多臟器。迄今為止，SLE的病因及確切的發(fā)病機(jī)制仍尚未完全清楚。研究多認(rèn)為該病的發(fā)生主要與遺傳、環(huán)境、激素水平、病毒感染及免疫失調(diào)等因素有關(guān)，其中免疫系統(tǒng)功能異常被認(rèn)為是SLE發(fā)病的重要因素[1，2]。白介素-1受體相關(guān)激酶-M(Interleukin-1 receptor associated kinase-M，IRAKM)是Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中一個(gè)重要的負(fù)性調(diào)控因子，參與TLRs信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控機(jī)制，對(duì)維持機(jī)體免疫平衡具有重要作用[3，4]。本研究通過(guò)對(duì)SLE患者外周血單核細(xì)胞中的IRAKM mRNA表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，并分析其與SLE自身抗體及補(bǔ)體的相關(guān)性，探討IRAKM在SLE免疫調(diào)節(jié)異常中的作用。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1一般資料 收集2015年6月至2017年3月我院收治的SLE患者103例，均為初發(fā)患者，診斷符合1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)，全部患者入組前均未使用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑治療。將103例患者根據(jù)治療前SLE疾病活動(dòng)度評(píng)分(SLEDAI)(≥10分為活動(dòng)期，<10分為穩(wěn)定期)分為活動(dòng)期組(55例)和穩(wěn)定期組(48例)?；顒?dòng)期組中男8例，女47例；年齡16～64歲，平均年齡(37.5±12.6)歲；穩(wěn)定期組中男5例，女43例；年齡15～61歲，平均年齡(36.6±12.1)歲。另選同期在本院體檢健康者40例作為對(duì)照組，其中男5例，女35例；年齡18～65歲，平均年齡(37.7±11.9)歲。各組性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.1.2儀器與試劑 PCR儀(美國(guó)ABI公司)；全自動(dòng)生化分析儀(瑞士羅氏公司)；Ficoll paque plus單核細(xì)胞分離液(美國(guó)GE公司)；RNA提取試劑盒(美國(guó)Omega公司)；抗ds-DNA抗體、抗Sm抗體檢測(cè)試劑盒(ELISA法)均為德國(guó)歐蒙公司產(chǎn)品；補(bǔ)體C3、C4檢測(cè)試劑盒(免疫比濁法)均購(gòu)自上海信裕生物科技有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 采用肝素抗凝采血管和普通采血管分別采集每名受試對(duì)象的空腹靜脈血，將肝素抗凝管中的全血采用Ficoll分層液法分離外周血單核細(xì)胞(PBMC)并進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，離心收集細(xì)胞冰凍存于-80℃冰箱，備用。普通采血管中的血室溫下放置2 h，采用低溫高速離心機(jī)3 000 r/min離心10 min，分離上層血清。Trizol法提取三組PBMC總RNA，采用RT-PCR法檢測(cè)PBMC中IRAKM mRNA表達(dá)量；ELISA檢測(cè)三組血清中抗ds-DNA抗體和抗Sm抗體水平；免疫散射比濁法測(cè)定血清補(bǔ)體C3、C4水平。

2 結(jié)果

2.1各組IRAKM mRNA表達(dá)量比較 活動(dòng)期組和穩(wěn)定期組SLE患者的IRAKM mRNA表達(dá)量均明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，且活動(dòng)期組比穩(wěn)定期組更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2各組血清中SLE自身抗體水平比較 與對(duì)照組比，活動(dòng)期組和穩(wěn)定期組血清抗ds-DNA抗體和抗Sm抗體水平均顯著升高(P<0.05)，且活動(dòng)期組血清抗ds-DNA抗體、抗Sm抗體水平較穩(wěn)定期組更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

GroupsnIRAKMmRNAActivestagegroup552.77±0.541)2)Stablestagegroup483.04±0.401)Controlgroup403.52±0.37F31.576P<0.001

Note：Compared with the control group,1)P<0.05;compared with the stable stage group,2)P<0.05.

GroupsnAntids-DNAantibodyAntiSmantibodyActivestagegroup55 328.08±110.191)2)155.99±71.58Stablestagegroup48217.65±80.251)103.29±45.07Controlgroup4013.27±4.63 8.83±3.52F168.63794.734P<0.001<0.001

Note：Compared with the control group,1)P<0.05;compared with the stable stage group,2)P<0.05.

GroupsnC3C4Activestagegroup550.59±0.281)2)0.15±0.041)2)Stablestagegroup480.90±0.311)0.28±0.071)Controlgroup401.27±0.140.33±0.05F96.242164.549P<0.001<0.001

Note：Compared with the control group,1)P<0.05;compared with the stable stage group,2)P<0.05.

表4IRAKM與抗ds-DNA抗體、抗Sm抗體及補(bǔ)體C3、C4的相關(guān)性

Tab.4Correlationofantids-DNAantibody,antiSmantibody,C3andC4withIRAKM

IndexesrPAntids-DNAantibody-0.638<0.001AntiSmantibody-0.606<0.001C30.614<0.001C40.825<0.001

2.3各組血清中補(bǔ)體水平比較 與對(duì)照組比，活動(dòng)期組和穩(wěn)定期組血清補(bǔ)體C3、C4的水平均顯著降低(P<0.05)，且活動(dòng)期組血清補(bǔ)體水平較穩(wěn)定期組更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

2.4IRAKM與SLE自身抗體及補(bǔ)體的相關(guān)性 SLE患者的IRAKM mRNA表達(dá)量與抗ds-DNA抗體和抗Sm抗體水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與補(bǔ)體C3、C4水平呈正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表4。

3 討論

SLE是一種復(fù)雜的、由多種因素相互作用引起的自身免疫性疾病，免疫功能紊亂是貫穿SLE整個(gè)發(fā)病過(guò)程的重要因素，免疫系統(tǒng)中幾乎所有的關(guān)鍵成分都參與了SLE的發(fā)生和發(fā)展[5，6]。因此，SLE長(zhǎng)期以來(lái)都是免疫學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

Toll 樣受體(Toll-like receptors，TLRs)介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是誘導(dǎo)強(qiáng)烈免疫應(yīng)答、參與機(jī)體防御反應(yīng)的重要途徑，在機(jī)體抵抗病原微生物感染中具有重要作用[7]。但TLRs信號(hào)通路的過(guò)度活化可導(dǎo)致炎性因子過(guò)表達(dá)，引起內(nèi)毒素休克、自身免疫性疾病及炎癥相關(guān)性腫瘤的發(fā)生和惡化[8，9]。因此TLRs信號(hào)通路的活化需要受相應(yīng)的負(fù)調(diào)控機(jī)制的調(diào)節(jié)以維持穩(wěn)態(tài)。IRAKM是TLRs信號(hào)通路中重要的負(fù)性調(diào)控因子，能夠通過(guò)抑制IRAK4誘發(fā)IRAK1磷酸化，阻止免疫復(fù)合物的形成或分離，使TLRs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)減弱或直接中斷，從而避免強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)損傷機(jī)體[10，11]。本研究中，IRAKM mRNA在SLE患者外周血PBMC中的表達(dá)量明顯低于健康者，且活動(dòng)期SLE患者的IRAKM mRNA表達(dá)量比穩(wěn)定期更低，說(shuō)明IRAKM的表達(dá)與SLE的發(fā)生及其疾病活動(dòng)性有關(guān)。細(xì)胞中IRAKM表達(dá)過(guò)低減弱了對(duì)TLRs信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控作用，造成自身免疫過(guò)強(qiáng)，進(jìn)而引發(fā)SLE。

在自身免疫性疾病中，血清自身抗體的產(chǎn)生是導(dǎo)致患者機(jī)體免疫調(diào)節(jié)異常的重要原因[12]。SLE患者血清中可出現(xiàn)多種自身抗體，包括抗核抗體(ANA)、抗核小體抗體(AnuA)、抗ds-DNA抗體、抗Sm抗體等，其中抗ds-DNA抗體和抗Sm抗體是SLE血清學(xué)診斷的特異性標(biāo)志性抗體。本研究結(jié)果顯示，活動(dòng)期和穩(wěn)定期SLE患者的血清抗ds-DNA抗體、抗Sm抗體水平均明顯高于健康者，且SLE活動(dòng)期患者血清自身抗體的水平較穩(wěn)定期患者更高，提示自身抗體介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)異常與SLE的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究中，SLE患者外周血PBMC中的IRAKM表達(dá)水平與其血清抗ds-DNA抗體和抗Sm抗體水平呈明顯的負(fù)相關(guān)性，提示IRAKM可能與自身抗體在SLE免疫調(diào)節(jié)異常中發(fā)揮拮抗作用。

補(bǔ)體是體內(nèi)一組具有抗感染和免疫調(diào)節(jié)作用的血清蛋白，由補(bǔ)體激活所產(chǎn)生的級(jí)聯(lián)反應(yīng)是一種重要的先天性免疫反應(yīng)[13]。以往研究對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)涉及的自身免疫性疾病存在爭(zhēng)議，但近年來(lái)研究表明補(bǔ)體C3、C4對(duì)SLE的診斷和疾病活性監(jiān)測(cè)也具有重要價(jià)值[14，15]。本研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是活動(dòng)期還是穩(wěn)定期SLE患者，其血清C3、C4水平均明顯低于健康者，但SLE穩(wěn)定期患者血清C3、C4水平高于活動(dòng)期患者，說(shuō)明補(bǔ)體系統(tǒng)功能缺陷與SLE的發(fā)生及病情活動(dòng)度有關(guān)。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者外周血PBMC中IRAKM的表達(dá)水平與其血清補(bǔ)體C3、C4水平呈明顯的正相關(guān)性，推測(cè)IRAKM可能與補(bǔ)體系統(tǒng)協(xié)同作用參與SLE的免疫調(diào)節(jié)。

由以上研究結(jié)果可知，負(fù)性調(diào)控因子IRAKM與SLE的發(fā)生密切相關(guān)，其表達(dá)水平對(duì)SLE疾病活動(dòng)性的判斷也具有重要的參考價(jià)值。且IRAKM與自身抗體、補(bǔ)體的相關(guān)性進(jìn)一步說(shuō)明了其參與SLE免疫調(diào)節(jié)異常的病理反應(yīng)過(guò)程，但其具體的調(diào)控機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。

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RoleofnegativeregulatoryfactorIRAKMinimmunedysregulationofsystemiclupuserythematosus

WUYan-Ge,QIUJin-Jun,LIUHong-Xia,ZHANGBo,GONGYu-Feng.

DepartmentofPathology,ShenzhenPingshanPeople′sHospital,Shenzhen518000,China

Objective:To investigate the expression of interleukin-1 receptor associated kinase-M(IRAKM)in systemic lupus erythematosus(SLE) and its relationship with immunoregulation.Methods103 patients with SLE were divided into active stage group(n=55) and stable stage group(n=48) according to their disease activity score(SLEDAI),and 40 healthy persons were chosen as control group.Real-time quantitative PCR(RT-PCR) was used to detect the expression of IRAKM mRNA in peripheral blood monouclear cells of the three groups.The levels of anti ds-DNA antibody and anti Sm antibody in serum were detected by Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA).The levels of serum complement C3 and C4 were measured by immune scattering turbidimetry.Factor analysis of variance was performed to analyze the differences of all the observed indicators in the three groups.The correlation between IRAKM and autoantibodies and complements of SLE was analyzed by Pearson or Spearman.ResultsThe expression level of IRAKM mRNA of SLE patients in the active stage group and stable stage group were significantly lower than that in the control group(P<0.05).Moreover,the expression level of IRAKM mRNA in the active stage group was lower than that in the stable stage group,and the difference was statistically significant(P<0.05).Compared with the control group,the levels of anti ds-DNA antibody and anti Sm antibody in the active stage group and stable stage group were significantly increased(P<0.05),and the levels of complement C3 and C4 were obviously lower(P<0.05).The changes of serum levels of autoantibodies and complements in the active stage group were more remarkable than those in the stable stage group(P<0.05).The expression level of IRAKM mRNA in the SLE patients was negatively correlated with the levels of anti ds-DNA antibody and anti Sm antibody(P<0.05).However,it was positively correlated with the levels of complement C3 and C4(P<0.05).ConclusionIRAKM participates in the immune regulation process of SLE through negative regulation,and its expression level is closely related to the degree of SLE disease activity.

Systemic lupus erythematosus;Interleukin-1 receptor associated kinase-M;Immune regulation

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.12.021

R363

A

1000-484X(2017)12-1858-04

①本文為廣東省省級(jí)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2017A020215097)和深圳市科技創(chuàng)新委項(xiàng)目(JCYJ20150403093323885)。

②深圳市坪山區(qū)人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，深圳 518000。

武延格(1981年-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤病理學(xué)研究,E-mail：wuyange398@163.com。

及指導(dǎo)教師：邱勁軍(1974年-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事系統(tǒng)性紅斑狼瘡基因組學(xué)研究。

[收稿2017-08-03 修回2017-08-11]

(編輯 張曉舟)