痤瘡合劑的制備及其黃芩苷含量測定

張正貴

（湖北省襄陽市第二人民醫(yī)院，湖北 襄陽 441001）

痤瘡合劑的制備及其黃芩苷含量測定

張正貴

（湖北省襄陽市第二人民醫(yī)院，湖北 襄陽 441001）

目的制備痤瘡合劑并測定方中黃芩苷的含量。方法 采用煎煮法制備痤瘡合劑，采用三波長紫外分光光度法測定合劑中黃芩苷的含量。結(jié)果黃芩苷質(zhì)量濃度在3．872～48．530 g／m L范圍內(nèi)與吸光度值線性關系良好，r＝0．9946(n＝7)，平均加樣回收率為97．40%，RSD＝1．76%（n＝5）。結(jié)論痤瘡合劑的制備方法簡便易行，質(zhì)量可控。

痤瘡合劑；三波長紫外分光光度法；黃芩苷；質(zhì)量控制

痤瘡合劑由黃芩、枇杷葉、桑白皮、地骨皮、山楂等中藥組方，具有清熱利濕、解毒瀉火及活血涼血的功效，主治痤瘡、粉刺、丘疹、膿皰、結(jié)節(jié)囊腫及皮脂腺炎等癥，是我院皮膚科臨床驗方，應用近6年，臨床療效滿意，辨證防治有效率為 92．66%[1]。本研究中制備了痤瘡合劑，并以主藥黃芩所含成分黃芩苷作為含量測定指標，采用三波長紫外分光光度法測定含量，為建立該合劑的質(zhì)量控制標準提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

UV－2401PC型紫外－可見分光光度計（日本島津公司）；53WBⅡ型紫外可見分光光度計（上海光學儀器廠）；ES－E120型電子分析天平（上海信衡電子科技有限公司）；恒溫箱（武漢電器儀器廠）。

1．2 試藥

黃芩苷對照品（湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，批號為 110765－201614）；痤瘡合劑（湖北省襄陽市第二人民醫(yī)院制劑室自制，批號分別為20160208，20160609，20161015）；其他試劑均為分析純；試驗所用中藥材均購自襄陽九州通醫(yī)藥有限公司，由湖北省襄陽市食品藥品檢驗所張勤主任藥師鑒定均為正品，符合《中國藥典》標準。

2 方法與結(jié)果

2．1 處方

黃芩 7．2 kg，枇杷葉 7．2 kg，桑白皮 7．2 kg，地骨皮7．2 kg，山楂 7．2 kg，茵陳 7．2 kg，梔子 4．8 kg，大黃 1．4 kg，石膏14 kg，白花蛇舌草14 kg。

2．2 樣品制備

按處方比例稱取2．1項下10味藥材，置傾斜式夾層煎煮鍋中，加水浸泡約1 h，煎煮2次，煎煮時間分別為2 h和1．5 h，合并2次煎煮濾液，置濃縮鍋中常壓濃縮，于60～70℃測定濃縮液的相對密度，超過1．04即合格，再將合格的濃縮液靜置、過濾、分裝、消毒，貼標簽，即得樣品[2]。

2．3 黃芩苷含量測定（三波長紫外分光光度法）

2．3．1溶液制備

對照品溶液：稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的黃芩苷對照品25．1mg，精密稱定，置50m L容量瓶中，用40%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為0．502 g／L的溶液，即得。

供試品溶液：準確吸取2．2項下方法制備的痤瘡合劑上清液7mL，置分液漏斗中，并連續(xù)用乙酸乙酯萃取6次，每次10mL，合并萃取液，置蒸發(fā)皿中水浴濃縮至無溶劑[3]，再用40%乙醇溶解，轉(zhuǎn)入100m L容量瓶中，冷卻至室溫，用40%乙醇定容至刻度，搖勻，即得。

陰性對照品溶液：稱取除外黃芩、與痤瘡合劑處方同比例的中藥材，按2．2項下方法制備 1000 m L陰性樣品合劑。取陰性樣品合劑，按供試品溶液制備方法制成相當于生藥含量為48．08 g／L的溶液，即得。

混合對照品溶液：分別用移液管精密吸取上述對照品溶液2m L和陰性對照品溶液10m L，置100m L容量瓶中，用40%乙醇定容至刻度，搖勻，制成含黃芩苷對照品 10．04μg／m L 和生藥 4808μg／m L的溶液，即得。

2．3．2測定波長選擇

吸收曲線：取2．3．1項下對照品溶液和陰性對照品溶液，分別以40%乙醇稀釋50倍和10倍，制成質(zhì)量濃度為 10．04，4808μg／m L的稀釋溶液。取 2種稀釋溶液及2．3．1項下混合對照品溶液，分別以UV－2401PC型紫外－可見分光光度計在200～350 nm波長范圍內(nèi)掃描。以40%乙醇為空白，繪制各溶液的紫外吸收曲線，詳見圖1。

圖1 黃芩苷紫外吸收光譜圖

測定波長：根據(jù)圖1，按作圖法及計算法[4－6]任選陰性對照品溶液（干擾組分）的最大吸收波長258．0 nm為λ1，黃芩苷對照品溶液的最大吸收波長 278．3 nm為λ2，求得大概波長 λ3為 302．0 nm，按 ΔA＝ A2－[（λ3－λ2） A1＋ （λ2－λ1） A3] ／[（λ3－λ2） ＋ （λ2－λ1）]，求得使干擾組分 ΔA值為 0的 A3對應的波長 λ3。取 2．3．1項下對照品溶液和陰性對照品溶液，分別以40%乙醇稀釋 50倍和 10倍，制成質(zhì)量濃度分別為 10．04，4808μg／m L的稀釋溶液，以 UV－2401PC型紫外－可見分光光度計在200～350 nm波長范圍內(nèi)掃描，測定吸光度，結(jié)果見表 1，可知，λ3確定為 303．0 nm。

2．3．3 方法學考察

線性關系考察：精密量取0．502 g／L的黃芩苷對照品溶液 0．4，0．5，0．8，1．0，2．0，4．0，5．0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加40%乙醇稀釋至刻度，搖勻，以40% 乙醇為空白，分別于 258．0，278．3，303．0 nm 波長處測定吸光度，以ΔA值對質(zhì)量濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程 ΔA＝0．03053C－0．001574，r＝0．9946（n＝7）。結(jié)果表明，黃芩苷質(zhì)量濃度在 3．872 ～48．530μg／m L范圍內(nèi)與 ΔA線性關系良好[7]。

精密度試驗：精密吸對照品貯備液20μL，照線性關系考察方法重復測定吸光度5次，記錄ΔA值。結(jié)果的 RSD為1．15%(n＝52)，表明儀器精密度良好。

表1 計算法選擇測定波長 3結(jié)果

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，6，10，16 h時測得 ΔA值。結(jié)果的 RSD 為 1．09(n＝5)，表明供試品溶液在16 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復性試驗：取同一批樣品合劑（批號為20161015）適量，依法制備供試品溶液，平行測定吸光度5次。結(jié)果的RSD為1．05%（n＝5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗[8]：準確吸取已知黃芩苷質(zhì)量濃度的樣品7 mL，共5份，分別置分液漏斗中，分別加入一定量的黃芩苷對照品溶液，搖勻，依法制備供試品溶液。再用40%乙醇稀釋10倍，以40%乙醇為空白，測定其在258．0，278．3，303．0 nm 波長處的吸光度，計算加樣回收率。結(jié)果見表2。

2．3．4樣品含量測定

準確量取3批痤瘡合劑上清液，依法制備供試品溶液。以 40%乙醇為空白溶液，依法測定在 258．0，278．3，303．0 nm波長處的吸光度，計算ΔA，代入回歸方程，求得供試品溶液中黃芩苷的質(zhì)量濃度（μg／m L），并換算成合劑中黃芩苷的質(zhì)量濃度（g／L）。結(jié)果見表3。

表2 黃芩苷加樣回收試驗結(jié)果（n＝5）

表3 樣品中黃芩苷含量測定結(jié)果

3 討論

痤瘡合劑是我院皮膚科療效確切的中藥制劑，已應用近20年，已取得當?shù)刂苿┥a(chǎn)批號（鄂藥制字Z20081773），該制劑中黃芩具有清熱解毒、澡濕瀉火的功效，是方中君藥[9－10]，由于黃芩苷的含量檢測比較成熟，關于黃芩苷的檢測手段也比較多，但大多數(shù)報道均采用高效液相色譜法[11]，對于基層醫(yī)院，受無高效液相色譜儀的條件限制，故本研究中采用三波長分光光度法對黃芩苷進行含量檢測，所采用的紫外－可見分光光度計成本較低，在基層醫(yī)院也較普及，方法重復性也很好。

中醫(yī)認為，痤瘡病多因濕熱蘊結(jié)而起，故以清熱利濕、解毒瀉火及活血涼血功效來組方[12－14]。在測定該合劑的黃芩苷成分時，單用單一波長進行測定，由于陰性干擾，無法測定，故采用三波長方法測定，可有效消除陰性干擾。從3種組分的紫外圖譜可以看出，混合組分的最大吸收波長與標準品的最大吸收波長相同，均在278．3 nm 波長處。

痤瘡合劑所含成分較多，制劑原料及制備工藝均直接影響制劑療效[15]，方中黃芩為君藥，對本制劑的療效有一定代表性，選其作為檢測對象。由測定結(jié)果可見，痤瘡合劑中黃芩苷的含量在 0．335～0．349 g／L 內(nèi)。本法操作簡便、結(jié)果準確，可作為該合劑質(zhì)量控制中的定量方法。但本方法也存在一定不足，如對于合劑檢測前的預處理較繁雜，不符合現(xiàn)代快檢的要求，有待今后改進。

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Preparation of Acne Mixture and Content Determination of Baicalin

Zhang Zhenggui

（ The Second People′s Hospital of Xiangyang City， Xiangyang， Hubei， China 441001）

Objective To prepare Acne Mixture and determine the content of baicalin in Acne Mixture．Methods Decoction method was used for production of Acne Mixture and the content of baicalin in the Acne Mixture was determined by three－wavelength ultraviolet spectrophotometry．Results The mass concentration of baicalin had a good linear relationship with the absorbance value in the range of 3．872－48．530 μg／mL（r＝0．9946，n＝7），the average recovery was 97．40% ，and the RSD was 1．76% （n＝5）．Conclusion The preparation method of Acne Mixture is simple，and the quality is controllable．

Acne Mixture；three－wavelength ultraviolet spectrophotometry；baicalin；quality control

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2017)24－0025－03

10．3969 ／j．issn．1006－4931．2017．24．008

張正貴（1962－），男，大學本科，主管中藥師，研究方向為中藥制劑的研發(fā)，（電子信箱）1160725705＠qq．com。

2017－07－04；

2017－09－17)