刺五加配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

譚 沛 ，鄭曉英 ，黃俊忠 ，張 輝

（1．華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司，廣東 深圳 518110； 2．廣東省食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510180）

刺五加配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

譚 沛1，鄭曉英1，黃俊忠2，張 輝1

（1．華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司，廣東 深圳 518110； 2．廣東省食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510180）

目的建立刺五加配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜（TLC）法，以刺五加對(duì)照藥材和異嗪皮啶對(duì)照品作為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)刺五加配方顆粒進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定刺五加配方顆粒中紫丁香苷成分含量，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果定性鑒別中，刺五加配方顆粒斑點(diǎn)分離清晰；含量測(cè)定中，紫丁香苷進(jìn)樣量在0～5．668 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r＝0．9995），平均回收率為98．62%，RSD＝1．16%（n＝6）。結(jié)論所建立的定性及定量方法簡(jiǎn)單可行，精密度及重復(fù)性良好，可用于刺五加配方顆粒的質(zhì)量控制。

刺五加；配方顆粒；紫丁香苷；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量控制

刺五加收載于2015年版《中國(guó)藥典（一部）》，為五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus（Rupr．et Maxim．）Harms的干燥根和根莖或莖，有益氣健脾、補(bǔ)腎安神功效，主要用于治療脾肺氣虛、體虛乏力、食欲不振、肺腎兩虛、久咳虛喘、腎虛腰膝酸痛、心脾不足、失眠多夢(mèng)[1]。其藥用部位主要有根、根莖及莖，主要成分有刺五加苷、甾體苷、酚苷、香豆精苷、木脂素苷等，含量也不盡相同，其中刺五加苷以紫丁香苷含量最高[2－4]，且紫丁香苷為主要的活性指標(biāo)成分，同時(shí)也是現(xiàn)行2015年版《中國(guó)藥典(一部)》刺五加藥材項(xiàng)下的含量測(cè)定指標(biāo)成分。刺五加配方顆粒是由刺五加飲片經(jīng)現(xiàn)代水提取、濃縮、干燥、制粒技術(shù)制成的模擬傳統(tǒng)水煎液的顆粒，相對(duì)于傳統(tǒng)水煎液具有攜帶、保持方便，質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)勢(shì)。目前關(guān)于刺五加藥材及相關(guān)復(fù)方制劑的研究報(bào)道較多，其質(zhì)量控制方法也較多，但刺五加配方顆粒研究基礎(chǔ)較薄弱，有關(guān)研究報(bào)道僅1篇，尚無(wú)關(guān)于其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。為此，本研究中參考現(xiàn)行版《中國(guó)藥典（一部）》刺五加項(xiàng)下有關(guān)內(nèi)容的規(guī)定，采用薄層色譜（TLC）法對(duì)刺五加配方顆粒中異嗪皮啶及刺五加對(duì)照藥材進(jìn)行專屬性鑒別，并參考相關(guān)文獻(xiàn)[5－15]建立了測(cè)定刺五加配方顆粒中紫丁香苷含量的高效液相色譜（HPLC）法，旨在為刺五加配方顆粒的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)，以期探討刺五加飲片經(jīng)現(xiàn)代技術(shù)生產(chǎn)制成刺五加配方顆粒的質(zhì)量成分變化，以達(dá)到從整體上控制刺五加配方顆粒質(zhì)量的目的?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Agilent1100型高效液相色譜儀，包括Agilent化學(xué)工作站，G1314A型紫外檢測(cè)器，G1313A型自動(dòng)進(jìn)樣器(安捷倫科技＜中國(guó)＞有限公司)；色譜柱：InertSustain C18柱 （250mm ×4．6mm，5 μm）；CPA224S 型萬(wàn)分之一電子分析天平，CP225D型十萬(wàn)分之一電子分析天平（德國(guó) Sartorius公司）；KQ－300DE型超聲提取器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1．2 試藥

刺五加配方顆粒（共15批，批號(hào)代號(hào)分別為 A1，A2，A3，…，A15，由 6 家配方顆粒生產(chǎn)企業(yè)提供）；刺五加對(duì)照藥材（批號(hào)為 120991－200807）、異嗪皮啶對(duì)照品（批號(hào)為 110837－200304，規(guī)格 20mg，純度 99．5% ，供含量測(cè)定用）、紫丁香苷對(duì)照品（批號(hào)111754－200603，規(guī)格20mg，純度100%，供含量測(cè)定用，經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12 h以上后使用），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。甲醇（Merck公司，批號(hào)為3CH0025）為色譜純，水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 TLC 鑒別

2．1．1溶液制備

取本品粉末 1 g，加75%乙醇 50m L，超聲 30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0m L使溶解，用三氯甲烷振搖提取2次，每次5mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取刺五加對(duì)照藥材5 g，加75%乙醇 50 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。取異嗪皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2．1．2薄層色譜試驗(yàn)

照薄層色譜法（2015年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液和對(duì)照藥材溶液各10μL，對(duì)照品溶液1μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇（19∶1）為展開劑，展開，取出，晾干后置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜及對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色熒光斑點(diǎn)（見圖1）。本試驗(yàn)中還考察了不同試驗(yàn)溫度、濕度以及不同廠家的硅膠G板對(duì)結(jié)果的影響，結(jié)果表明，該方法所建立的定性方法具有較好的耐用性及專屬性。

圖1 刺五加配方顆粒薄層鑒別色譜圖

2．2 紫丁香苷含量測(cè)定

2．2．1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：InertSustain C18柱 （250mm ×4．6mm，5μm）；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：甲醇－水（20 ∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：265 nm；流速：1 mL ／min；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按紫丁香苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。系統(tǒng)適用性HPLC色譜圖見圖2。

2．2．2溶液制備

對(duì)照品溶液：稱取紫丁香苷對(duì)照品0．02834 g，精密稱定，置25mL容量瓶中，加水溶解，定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液Ⅰ。精密吸取對(duì)照品溶液Ⅰ2 mL，置25 mL容量瓶中，加水溶解，定容至刻度，搖勻，即得每1mL含紫丁香苷0．090688mg的溶液，作為對(duì)照品溶液Ⅱ。

供試品溶液：取本品適量，研細(xì)，取約1．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加水25mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率 300W，頻率 40 kHz）30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，離心5min（轉(zhuǎn)速為3000 r／min），取上清液，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

圖2 系統(tǒng)適用性高效液相色譜圖

2．2．3方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液Ⅱ1，3，10μL，對(duì)照品溶液Ⅰ1，3，5μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝2290．7X＋149．12，r＝0．9995(n＝6)。結(jié)果表明，紫丁香苷進(jìn)樣量在0～5．668μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液10μL，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定紫丁香苷峰面積。結(jié)果的RSD為0．1%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)代號(hào)為A3）6份，精密稱定，依法制備供試品溶液，分別按擬訂色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定紫丁香苷的含量。結(jié)果平均含量為 1．44 mg／g，RSD為1．0%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批刺五加配方顆粒（批號(hào)代號(hào)為A3），依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件，分別于0，6，12，24，36，48 h 時(shí)進(jìn)樣 10 μL，測(cè)定紫丁香苷峰面積。結(jié)果的 RSD為 1．2%（n＝6），表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的同一批樣品（批號(hào)代號(hào)為 A3，含量為 1．4382 mg ／g）6 份，每份取約 0．75 g，精密稱定，分別置預(yù)先加入用甲醇配制、質(zhì)量濃度為1．132 g／L的紫丁香苷對(duì)照溶液1m L并已揮干的錐形瓶中，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 紫丁香苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．2．4樣品含量測(cè)定

分別精密稱取15批刺五加配方顆粒，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定紫丁香苷含量。結(jié)果見表2。

表2 15批刺五加配方顆粒樣品紫丁香苷含量測(cè)定結(jié)果（n＝2）

3 討論

3．1 TLC 法

刺五加配方顆粒為單方顆粒制劑，制備過(guò)程中只加入了少量麥芽糊精作為賦形劑，研究表明，其對(duì)TLC鑒別和含量測(cè)定無(wú)干擾。本試驗(yàn)中還考察了高溫、低溫、高濕、低濕及不同廠家薄層板對(duì)方法耐用性的影響，并對(duì)15批樣品進(jìn)行定性鑒別，結(jié)果薄層色譜斑點(diǎn)分離清晰，方法重復(fù)性較好。

3．2 HPLC 法

本試驗(yàn)中建立的紫丁香苷含量測(cè)定方法，主要參考2015年版《中國(guó)藥典（一部）》刺五加【含量測(cè)定】項(xiàng)下方法制訂?？紤]到刺五加配方顆粒經(jīng)水提取工藝制成，水溶性較好，與刺五加藥材存在一定的差異。因此，本試驗(yàn)中考察了滲透性和水溶性較好的兩種不同提取溶劑（甲醇、水），結(jié)果兩者的提取效率一致，溶解效果較好。考慮到甲醇的有機(jī)毒性比水大，本試驗(yàn)中選擇了較環(huán)保的水作為提取溶劑。本試驗(yàn)中還考察了提取時(shí)間及比較了不同取樣量的提取效果，確定最佳供試品溶液提取條件。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，本研究中建立的方法穩(wěn)定性、精密度較好，線性及重復(fù)性良好，準(zhǔn)確度高，耐用性良好。

3．3 含量差異原因分析

刺五加配方顆粒為刺五加飲片在臨床的補(bǔ)充劑型，相對(duì)而言更有質(zhì)量可控、穩(wěn)定、均一的優(yōu)勢(shì)，但實(shí)測(cè)15批刺五加配方顆粒中紫丁香苷的含量結(jié)果差異較大，低于或接近刺五加飲片含量的均有2批，與實(shí)際當(dāng)量不符。分析原因可能有以下幾個(gè)方面。

原料刺五加飲片的自身差異：不同年生植物中，以4年生和5年生含量最高；不同產(chǎn)地植物中，道地東北地區(qū)因其適宜的生產(chǎn)環(huán)境，紫丁香苷的含量稍高于其他產(chǎn)地，而在通化地區(qū)和臨江地區(qū)其苷含量會(huì)隨著季節(jié)變化而變化，表現(xiàn)為春秋季較高，夏季較低，其主要原因可能也與紫丁香苷的化學(xué)性質(zhì)及其次生代謝有關(guān)[12]；不同種群結(jié)構(gòu)，因其種植樣地的種群密度、生物量及種群中紫丁香苷的產(chǎn)量均不一致以及不同藥用部位中的紫丁香苷含量均不同[7，16]。

缺乏統(tǒng)一的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)：由于目前配方顆粒尚無(wú)統(tǒng)一的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，紫丁香苷的含量也會(huì)因生產(chǎn)工藝參數(shù)及其規(guī)模的差異而不同。

廠家包裝差異：每個(gè)生產(chǎn)廠家的實(shí)際包裝當(dāng)量不一致及大、小包裝的當(dāng)量差異引起紫丁香苷的含量差異。

樣品穩(wěn)定性：刺五加配方顆粒樣品的穩(wěn)定性也會(huì)對(duì)其含量產(chǎn)生影響。

綜上所述，本研究中建立的刺五加配方顆粒定性及定量方法簡(jiǎn)單可行，精密度及重復(fù)性良好，可為刺五加配方顆粒的質(zhì)量控制提供借鑒。同時(shí)，在對(duì)刺五加配方顆粒含量分析時(shí)，需注意其樣品代表性以及取樣的影響，全面考慮其含量差異，并進(jìn)一步對(duì)原料進(jìn)行系統(tǒng)性研究，以分析不同刺五加配方顆粒中紫丁香苷含量存在差異的原因。

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Quality Standard of Dispensing Granules of Acanthopanax Senticosus

Tan Pei1， Zheng Xiaoying1， Huang Junzhong2， Zhang Hui1
（1．China Resources Sanjiu Medical ＆ Pharmaceutical Co．， Ltd．， Shenzhen， Guangdong， China 518110； 2．Guangdong Institute for Food and Drug Control， Guangzhou， Guangdong， China 510180）

Objective To establish the quality standard of dispensing granules of Acanthopanax senticosus．Methods The TLC method was used for the qualitative identification of dispensing granules of Acanthopanax senticosus with the contrast medicinal materials of Acanthopanax senticosus and isopropyridine reference substance as the positive control．The content of syringin in the dispensing granules of Acanthopanax senticosus was determined by HPLC，and the method was verified by methodological．Results In qualitative identification，the TLC spots of dispensing granules of Acanthopanax senticosus was clear with good separation degree．The syringin had a good linear relationship in the range of 0－5．668 μg（r＝0．9995），and the average recovery rate was 98．62% ， RSD ＝1．16% （n＝6）．Conclusion The qualitative and quantitative method is simple and feasible，it has good precision and repeatability，which can be used for the quality control of dispensing granules of Acanthopanax senticosus．

Acanthopanax senticosus；dispensing granules；syringin；TLC；HPLC；quality control

R284．1；R282．71

A

1006－4931(2017)24－0011－04

10．3969 ／j．issn．1006－4931．2017．24．004

譚沛（1965－），男，漢族，碩士研究生，高級(jí)工程師，主要從事中藥及天然藥物的研發(fā)，（電話）0755－8336099（電子信箱）Tanpei＠ 999．com．cn。

張輝（1973－），男，滿族，大學(xué)本科，高級(jí)工程師，主要從事中藥及天然藥物的研發(fā)，（電子信箱）ycahui＠999．com．cn。

2017－05－09；

2017－06－13)