• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    脊尾白蝦不同發(fā)育期線粒體基因組甲基化特征分析

    2017-12-18 08:45:07李志輝賴曉芳閻斌倫
    水產(chǎn)科學(xué) 2017年5期
    關(guān)鍵詞:脊尾白蝦發(fā)育期

    薛 蓓,張 培,李志輝,趙 蓮,賴曉芳,閻斌倫,高 煥

    ( 1.淮海工學(xué)院 海洋生命與水產(chǎn)學(xué)院,江蘇省海洋生物技術(shù)重點實驗室,江蘇 連云港 222005;2.江蘇省海洋生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇 連云港 222001;3.江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺,江蘇 南京 210014 )

    脊尾白蝦不同發(fā)育期線粒體基因組甲基化特征分析

    薛 蓓1,2,3,張 培1,2,3,李志輝1,2,3,趙 蓮1,2,3,賴曉芳1,2,3,閻斌倫1,2,3,高 煥1,2,3

    ( 1.淮海工學(xué)院 海洋生命與水產(chǎn)學(xué)院,江蘇省海洋生物技術(shù)重點實驗室,江蘇 連云港 222005;2.江蘇省海洋生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇 連云港 222001;3.江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺,江蘇 南京 210014 )

    為研究不同發(fā)育階段脊尾白蝦線粒體基因組表觀遺傳學(xué)特征,本研究在篩選硫化測序引物的基礎(chǔ)上,對不同發(fā)育期的脊尾白蝦線粒體基因組甲基化特征進(jìn)行了分析。經(jīng)引物篩選驗證,選取了4對引物在脊尾白蝦的受精卵、幼體期、仔蝦期和成蝦期共4個發(fā)育期進(jìn)行甲基化特征的分析,結(jié)果表明,除ND5基因3′端序列(21#引物擴增區(qū))無甲基化現(xiàn)象外,COX3基因的起始區(qū)序列(13#引物擴增區(qū))、COX3基因的3′端序列(16#引物擴增區(qū))和ND5基因5′端序列(19#引物擴增區(qū))均存在不同程度的甲基化現(xiàn)象。其中,COX3基因的起始區(qū)序列僅在受精卵孵化期和幼體期存在甲基化現(xiàn)象,COX3基因3′端序列在除受精卵外的其他3個時期均存在甲基化現(xiàn)象,且以上甲基化率隨個體發(fā)育階段的提高呈下降趨勢;ND5基因5′端序列在4個不同發(fā)育期均存在甲基化現(xiàn)象,但甲基化率無顯著差異。甲基化主要發(fā)生在COX3基因和ND5基因位點上,推測脊尾白蝦在生長發(fā)育過程中通過調(diào)節(jié)線粒體基因組甲基化來調(diào)節(jié)機體能量代謝過程。本研究首次從整個發(fā)育周期角度探討了線粒體基因組甲基化特征,以期為進(jìn)一步揭示甲殼類生長發(fā)育相關(guān)遺傳機制提供幫助。

    脊尾白蝦;線粒體基因組;不同發(fā)育期;甲基化

    在組蛋白修飾、DNA甲基化和染色質(zhì)重塑等表觀遺傳學(xué)現(xiàn)象中,DNA甲基化是最為常見并且研究最為深入的[1]。在真核生物的細(xì)胞中,除核基因組DNA(nDNA)外,其線粒體細(xì)胞器中也含有DNA(mtDNA);mtDNA雖僅占細(xì)胞內(nèi)總DNA的不到1%,但其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物對于發(fā)揮細(xì)胞正常功能是必不可少的[2-3]。以前針對DNA甲基化的研究多集中在nDNA上[4-5],而近年來關(guān)于mtDNA甲基化的研究也逐漸增多;但這些研究多集中在衰老[6]、神經(jīng)退行性疾病[7]及腫瘤[8]等疾病方面,有關(guān)不同發(fā)育期下mtDNA甲基化的研究鮮見報道,在甲殼動物中更未見報道。

    脊尾白蝦(Exopalaemoncarinicauda)是我國特有的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)種類,廣泛分布于我國沿海區(qū)域,尤以黃海、渤海區(qū)域最為豐富[9],產(chǎn)量可占我國東部沿海地區(qū)池塘混養(yǎng)模式產(chǎn)量的三分之一,且養(yǎng)殖規(guī)模有進(jìn)一步擴大的趨勢[10]。因此,近年來為加強其生長發(fā)育及免疫等生理生化機制方面的了解,以其為對象的研究也逐漸增多[11-13]。在前期的研究中,已獲得脊尾白蝦線粒體基因組的全序列[14],并發(fā)現(xiàn)該蝦在應(yīng)答饑餓時線粒體基因組會產(chǎn)生甲基化現(xiàn)象[15],但是,在其他情況下線粒體基因組的甲基化特征還不清楚,尤其在不同發(fā)育階段下,而這對于了解線粒體基因組在脊尾白蝦等甲殼類生物生長發(fā)育過程中的作用及其表達(dá)調(diào)控機制非常重要。因此,筆者希望通過對脊尾白蝦不同發(fā)育階段線粒體基因組甲基化特征的研究,為加深對甲殼類生長發(fā)育相關(guān)遺傳機制的認(rèn)識提供幫助。

    1材料與方法

    1.1 試驗材料

    自養(yǎng)殖池塘中選取性腺發(fā)育成熟的脊尾白蝦個體,保持溫度(27±1) ℃、鹽度29±1、pH 8.0±0.5的恒定養(yǎng)殖條件,在實驗室中進(jìn)行養(yǎng)殖并取材。選取受精卵[16]、幼體期[17]、仔蝦期和成蝦期4個不同發(fā)育階段,每個發(fā)育期選取6個樣本。

    1.2 線粒體基因組DNA提取及處理

    利用基因組DNA提取試劑盒(MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit, TaKaRa)分別提取各發(fā)育期的總DNA(其中含有線粒體基因組DNA),受精卵、幼體期和仔蝦期樣本采用整體液氮研磨后提取,成蝦期樣本則取其腹部肌肉進(jìn)行研磨后提取DNA。利用甲基化檢測試劑盒(EpiMarkTM, New England Biolabs Inc.)對提取的基因組進(jìn)行重亞硫酸鹽處理以獲得處理后的線粒體基因組DNA,并以處理后的基因組DNA為PCR模板進(jìn)行BSP引物的驗證和后續(xù)各不同發(fā)育期脊尾白蝦的甲基化特征分析。

    1.3 硫化測序(BSP)引物的篩選及驗證

    根據(jù)實驗室前期設(shè)計的引物[14],選取10對(引物3、8、11、12、13、16、19、21、33和48)擴增穩(wěn)定的硫化測序引物(表1),用于對處理后基因組DNA的擴增,篩選擴增穩(wěn)定的引物對脊尾白蝦線粒體基因組DNA的甲基化情況進(jìn)行分析。引物名稱中的數(shù)字為線粒體基因組全序列中對應(yīng)的序列區(qū)間。

    采用如下PCR體系進(jìn)行擴增:總體積25 μL,含10×PCR buffer 2.5 μL,Mg2+(25 mmol/L) 1.5 μL,dNTP (10 mmol/L) 0.5 μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL) 0.5 μL, Forward Primer (10 mmol/L) 1 μL,Reverse Primer (10 mmol/L) 1 μL,ddH2O 15 μL 及處理后的基因組DNA 3 μL。利用Touchdown PCR程序進(jìn)行擴增:95 ℃ 30 s; 95 ℃ 15 s,55 ℃ 30 s,68 ℃ 45 s(其中退火溫度每個循環(huán)降低1 ℃,進(jìn)行10個循環(huán)后再以45 ℃固定退火溫度進(jìn)行30個循環(huán));68 ℃ 5 min;4 ℃保存。

    PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳驗證后,對有擴增條帶的片段進(jìn)行切膠回收,利用pEASY-T3載體進(jìn)行克隆轉(zhuǎn)化后,送上海生工生物工程有限公司測序,并通過對比測序序列與原序列確認(rèn)是否為線粒體基因組的擴增產(chǎn)物。

    表1 脊尾白蝦線粒體基因組BSP引物

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    將測序獲得的處理后線粒體基因組DNA序列與原序列通過在線軟件QUMA(http://quma.cdb.riken.jp/)進(jìn)行比對分析以確認(rèn)甲基化的有無及其相應(yīng)特征,并計算相應(yīng)的甲基化率,其中:

    總甲基化率/%=(甲基化胞嘧啶位點個數(shù)/總胞嘧啶位點個數(shù))×100%

    CpG位點甲基化率/%=(甲基化CpG位點個數(shù)/總CpG位點個數(shù))×100%

    CpHs位點甲基化率/%=(甲基化CpHs位點個數(shù)/總CpHs位點個數(shù))×100%

    2 結(jié) 果

    2.1 硫化測序引物的篩選結(jié)果

    以各發(fā)育期混合DNA為模板的甲基化驗證后發(fā)現(xiàn),10對硫化測序引物中,13、16、19和21共4對引物擴增穩(wěn)定,這4對引物的具體遺傳信息特征如下:

    引物13(13#)擴增區(qū)域位于COX3(細(xì)胞色素氧化酶亞基3)基因的起始區(qū)序列,序列全長207 bp,其中包含CpG位點4個,CpHs(CpA/CpT/CpC)位點46個;引物16(16#)擴增區(qū)域位于COX3基因的3′端序列和ND3基因的起始區(qū)序列,序列全長218 bp,其中包含CpG位點5個,CpHs位點46個;引物19(19#)擴增區(qū)域位于ND5(還原型輔酶Ⅰ脫氫酶亞基5)基因的5′端序列,序列全長241 bp,其中包含CpG位點5個,CpHs位點60個;引物21(21#)擴增區(qū)域位于ND5基因的3′端序列,序列全長114 bp,其中包含CpG位點4個,CpHs位點22個。

    通過對不同發(fā)育期脊尾白蝦基因組DNA的硫化測序結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),在COX3基因的起始區(qū)序列和3′端序列以及ND5基因的5′端序列存在甲基化現(xiàn)象,而在ND5基因的3′端不存在甲基化現(xiàn)象。

    2.2 不同發(fā)育期脊尾白蝦的甲基化特征

    對4個不同發(fā)育期(受精卵、幼體期、仔蝦期和成蝦期)脊尾白蝦的甲基化特征分析發(fā)現(xiàn),3對硫化測序引物的擴增序列的甲基化不僅發(fā)生在CpG位點,也發(fā)生在CpHs位點。但3個序列區(qū)間在具體的甲基化率等方面存在不同,具體如下:

    COX3基因起始區(qū)序列(引物13#)僅在受精卵和幼體期各有1個個體存在甲基化,而其他發(fā)育期均未發(fā)現(xiàn)甲基化現(xiàn)象,受精卵的甲基化率高于幼體期(表2)。

    表2 不同發(fā)育期脊尾白蝦線粒體基因組甲基化特征

    COX3基因的3′端序列(引物16#)在受精卵中未發(fā)現(xiàn)甲基化現(xiàn)象,在幼體期、仔蝦期和成蝦期分別有3個、1個和1個個體存在甲基化現(xiàn)象,且隨著脊尾白蝦的發(fā)育,甲基化率呈現(xiàn)下降的趨勢(表2);ND3基因的起始序列(引物16#)中未發(fā)現(xiàn)甲基化現(xiàn)象。

    ND5基因5′端(引物19#)在4個不同發(fā)育期脊尾白蝦中均存在甲基化現(xiàn)象,只是在受精卵和幼體期取樣的6個個體均存在甲基化現(xiàn)象,而在仔蝦期和成蝦期各有2個個體存在甲基化現(xiàn)象。然而,19#引物的擴增序列在不同發(fā)育期的甲基化率不存在明顯的差異,單就甲基化位點來看并無明顯規(guī)律(表2)。

    3 討 論

    3.1 不同發(fā)育期脊尾白蝦線粒體基因組的甲基化水平

    在生物體的生長發(fā)育過程中,DNA甲基化可以通過直接或間接的方式參與到基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用中,對基因表達(dá)具有重要的協(xié)同作用[18-19]。生物體內(nèi)某些核基因在不同發(fā)育期的表達(dá)量存在差異[20-21],而這種差異與其甲基化水平存在一定的相關(guān)性[20]。那么,mtDNA在不同發(fā)育期中的甲基化水平是否存在差異?已有的研究表明,疾病[22]、衰老[7,23]、環(huán)境因子脅迫[24]和饑餓[15]等因素均可能影響mtDNA甲基化。本研究中通過對脊尾白蝦線粒體基因組甲基化水平的研究,發(fā)現(xiàn)其在不同發(fā)育期的甲基化水平存在差異,且隨著個體的發(fā)育,在甲基化個體數(shù)或總甲基化率水平上呈現(xiàn)降低的趨勢,這可能是由于隨著生物體的生長發(fā)育,其生命活動所需能量增多,而線粒體作為生物體的能量中心,其基因組甲基化水平的降低有利于相關(guān)基因的表達(dá)。

    3.2 不同發(fā)育期脊尾白蝦COX3基因的甲基化情況

    COX3基因的起始區(qū)序列(引物13#)及COX3基因的3′端序列(引物16#),在不同發(fā)育期的脊尾白蝦mtDNA的甲基化情況均表現(xiàn)為隨生物體發(fā)育甲基化程度降低的整體趨勢。細(xì)胞色素氧化酶是線粒體內(nèi)膜呼吸鏈的重要組成[25],因此這也說明在脊尾白蝦的發(fā)育過程中,生物體通過調(diào)節(jié)自身mtDNA甲基化程度來調(diào)節(jié)能量代謝。但是,這兩個序列區(qū)間的甲基化情況還略有差異,COX3基因的起始序列在受精卵表現(xiàn)為較高的甲基化率,而COX3基因的3′端序列在該時期則并無甲基化現(xiàn)象;相反COX3基因的3′端序列在仔蝦期及成蝦期均存在甲基化現(xiàn)象,而COX3基因的起始序列則并無甲基化現(xiàn)象。說明同一基因的不同區(qū)間在同一發(fā)育階段的甲基化現(xiàn)象也存在不同,線粒體基因組甲基化的具體機理仍需進(jìn)一步研究。

    3.3 不同發(fā)育期脊尾白蝦ND5基因的甲基化情況

    還原型輔酶Ⅰ脫氫酶是電子進(jìn)入電子傳遞鏈的主要位點,為線粒體內(nèi)三磷酸腺苷的形成提供約40%的質(zhì)子,在氧化磷酸化系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用[26-27]。但脊尾白蝦在4個不同發(fā)育期中ND5基因的5′端序列(引物19#)均表現(xiàn)為較高的甲基化率,且各發(fā)育期之間不存在顯著差異;而ND5基因的3′端序列(引物21#)在4個發(fā)育階段則均無甲基化現(xiàn)象。這進(jìn)一步說明同一基因的不同區(qū)間在同一發(fā)育階段的甲基化現(xiàn)象存在不同。另外,已有的研究結(jié)果顯示[15],不同的饑餓期下ND5基因的5′端序列無甲基化現(xiàn)象,而ND5基因的3′端序列存在甲基化現(xiàn)象,這說明ND5基因可能在不同發(fā)育階段甲基化較為穩(wěn)定,而饑餓脅迫應(yīng)激后為甲基化現(xiàn)象的高發(fā)區(qū)。

    此外,試驗中發(fā)現(xiàn),同一發(fā)育期的6個個體在不同區(qū)間的甲基化發(fā)生情況存在較大的不同,一方面可能是因為取材時并未區(qū)分各發(fā)育期的具體Ⅰ~Ⅵ期,而同一發(fā)育期內(nèi)的甲基化也存在變化,這仍需要進(jìn)一步研究;另一方面基因組甲基化具有一定的可遺傳性[28],因而不同個體間可能存在遺傳上的差異,這需要進(jìn)一步擴大樣品量并進(jìn)行深入的研究。

    [1] Lee T, Zhai J, Meyers B C. Conservation and divergence in eukaryotic DNA methylation[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010, 107(20):9027-9028.

    [2] 劉振山, 馮云, 薛志剛, 等. 線粒體DNA與DNA甲基化[J]. 生物學(xué)雜志, 2013, 30(5):77-80.

    [3] Iacobazzi V, Castegna A, Infantino V, et al. Mitochondrial DNA methylation as a next-generation biomarker and diagnostic tool [J]. Molecular Genetics & Metabolism, 2013, 110(2):25-34.

    [4] Laird P W. The power and the promise of DNA methylation markers [J]. Nature Reviews Cancer, 2003, 3(3):253-266.

    [5] Dehan P, Kustermans G, Guenin S, et al. DNA methylation and cancer diagnosis:new methods and applications [J]. Expert Review of Molecular Diagnostics, 2009, 9(7):651-657.

    [6] Mawlood S K, Dennany L, Watson N, et al. Quantification of global mitochondrial DNA methylation levels and inverse correlation with age at two CpG sites [J]. Aging, 2016, 8(2):1-6.

    [7] Wong M, Gertz B, Chestnut B A, et al. Mitochondrial DNMT3A and DNA methylation in skeletal muscle and CNS of transgenic mouse models of ALS[J]. Front Cell Neurosci,2013(7):279.

    [8] Feng S, Xiong L, Ji Z, et al. Correlation between increased ND2 expression and demethylated displacement loop of mtDNA in colorectal cancer[J]. Mol Med Rep, 2012, 6(1):125-130.

    [9] 王緒峨. 脊尾白蝦繁殖生物學(xué)的初步觀察[J]. 動物學(xué)雜志, 1987, 22(1):7-10.

    [10] Xu W, Xie J, Shi H, et al. Hematodinium infections in cultured ridgetail white prawns,Exopalaemoncarinicauda, in eastern China [J]. Aquaculture, 2010(300):25-31.

    [11] Duan Y F, Jian L, Zhe Z, et al. Characterization of ADP ribosylation factor 1 gene fromExopalaemoncarinicauda, and its immune response to pathogens challenge and ammonia-N stress [J]. Fish & Shellfish Immunology, 2016(55):123-130.

    [12] Zhang C S, Li F H, Xiang J H. Effect of salinity on growth and first sexual maturity ofExopalaemoncarinicauda(Holthuis, 1950) [J]. Chinese Journal of Oceanology & Limnology, 2014, 32(1):65-70.

    [13] 梁俊平, 李健, 李吉濤, 等. 不同溫度對脊尾白蝦胚胎發(fā)育與幼體變態(tài)存活的影響[J]. 生態(tài)學(xué)報,2013, 33(4):1142-1152.

    [14] Shen X, Sun M, Wu Z, et al. The complete mitochondrial genome of the ridgetail white prawnExopalaemoncarinicaudaHolthuis, 1950 (Crustacean:Decapoda:Palaemonidae) revealed a novel rearrangement of tRNA genes[J]. Gene, 2009, 437(1):1-8.

    [15] 高煥, 趙蓮, 薛蓓, 等. 脊尾白蝦線粒體基因組應(yīng)答饑餓的甲基化特征分析[J].水產(chǎn)學(xué)報, 2015, 39(7):953-960.

    [16] 王緒峨.脊尾白蝦早期胚胎發(fā)育以及溫、鹽度與其孵化的關(guān)系[J]. 水產(chǎn)學(xué)報,1989,13(1):59-64.

    [17] 梁象秋, 李亞娟, 周昭曼. 脊尾白蝦的幼體發(fā)育[J]. 水產(chǎn)學(xué)報, 1988,12(2):157-168.

    [18] Grunau C, Renault E, Rosenthal A, et al. MethDB—a public database for DNA methylation data[J]. Nucleic Acids Research, 2001, 29(1):270-274.

    [19] Jones P A. Functions of DNA methylation:islands, start sites, gene bodies and beyond[J]. Nature Reviews Genetics, 2012, 13(7):484-492.

    [20] Huang Y Z, Zhan Z Y, Sun Y J, et al. Intragenic DNA methylation status down-regulates bovine IGF2, gene expression in different developmental stages[J]. Gene, 2014, 534(2):356-361.

    [21] Wang R L, Li J, Staehelin C, et al. Expression analysis of two P450 monooxygenase genes of the tobacco cutworm moth (Spodopteralitura) at different developmental stages and in response to plant allelochemicals[J]. Journal of Chemical Ecology, 2015, 41(1):111-119.

    [22] Pirola C J, Gianotti T F, Burgueo A L, et al. Epigenetic modification of liver mitochondrial DNA is associated with histological severity of nonalcoholic fatty liver disease [J]. Gut, 2013, 62(9):1356-1363.

    [23] Dzitoyeva S, Hu C, Manev H. Effect of aging on 5-hydroxymethylcytosine in brain mitochondria [J]. Neurobiology of Aging, 2012, 33(12):2881-2891.

    [24] Byun H M, Panni T, Motta V, et al. Effects of airborne pollutants on mitochondrial DNA methylation [J]. Particle & Fibre Toxicology, 2013, 10(1):18.

    [25] Muntyan M S, Cherepanov D A, Malinen A M, et al. Cytochrome cbb3 of Thioalkalivibrio is a Na+-pumping cytochrome oxidase[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2015, 112(25):7695-7700.

    [26] Hunte C, Zickermann V, Brandt U. Functional modules and structural basis of conformational coupling in mitochondrial complex I[J]. Science, 2010, 329(5990):448-451.

    [27] Braun H P, Binder S, Brennicke A, et al. The life of plant mitochondrial complex I[J]. Mitochondrion, 2014(19):295-313.

    [28] Eichten S, Borevitz J. Epigenomics:methylation′s mark on inheritance [J]. Nature, 2013, 495(7440):181-182.

    MethylationProfileinMitochondrialGenomeofRidgetailWhitePrawnExopalaemoncarinicaudainResponsetoDifferentDevelopmentalStages

    XUE Bei1,2,3, ZHANG Pei1,2,3, LI Zhihui1,2,3, ZHAO Lian1,2,3, LAI Xiaofang1,2,3,YAN Binlun1,2,3, GAO Huan1,2,3

    ( 1.Jiangsu Key Laboratory of Marine Biotechnology, College of Marine Life and Fisheries, Huaihai Institute of Technology, Lianyungang 222005, China; 2.Co-Innovation Center of Jiangsu Marine Bio-industry Technology, Lianyungang 222001, China; 3.The Jiangsu Provincial Platform for Conservation and Utilization of Agricultural Germplasm, Nanjing 210014, China )

    BSP (Bisulfite sequencing PCR) primer pairs were screened in order to analyze the methylation profile of the mitochondria genome in response to different developmental stages in the ridgetail white prawnExopalaemoncarinicauda. Within ten synthesized BSP primer pairs, four primer pairs were selected for further studies because of their repeatable PCR amplification merits, including 13th (located in the 5′ end initiation zone of COX3), 16th (located in the 3′ sequence of COX3), 19th (located in the 5′ sequence of ND5) and 21st (located in the 3′ sequence of ND5). The methylation profile of different individuals at different developmental stages (fertilized eggs, larval, post larval and adult stages) were analyzed, using the above 4 primer pairs. The results showed that the methylation in both CpG sites and non-CpG sites were found in the 5′ and 3′ sequence of COX3 and the 5′ sequence of ND5, but not in the 3′ sequence of ND5. The 5′ sequence of COX3 was methylated at fertilized eggs and larval stage, while the 3′ sequence of COX3 was methylated at larval, post larval and adult stages. Additionally, the methylation ratio was decreased with the increasing of development stage for above two sequences of COX3. The 5′ sequence of ND5 was methylated in the all four developmental stages, and no significant differences for methylation ratio were found among different developmental stages. In view of the biology function of COX and ND genes which expression productions were responsible for maintaining the respiratory electron-transport chain in mitochondria, it is inferred that the function of methylation of mitochondrial genome in ridgetail white prawn is to regulate the energy metabolism during developmental stage.

    Exopalaemoncarinicauda; mitochondrial genome; different developmental stage; methylation

    10.16378/j.cnki.1003-1111.2017.05.015

    2016-09-13;

    2016-12-06.

    江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程項目(PAPD);江蘇省高等學(xué)校自然科學(xué)研究重大項目(17KJA240001);江蘇省“六大人才高峰”創(chuàng)新人才團(tuán)隊項目(2016-HYGC-CXTD-004);江蘇省2015年度普通高校研究生科研創(chuàng)新計劃項目(KYLX15_1486);連云港市產(chǎn)學(xué)研合作項目(CXY1517).

    薛蓓(1992-),女,碩士研究生;研究方向:海洋生物繁殖與遺傳育種學(xué).E-mail:malvsy@163.com.通訊作者:高煥(1976-),男,教授;研究方向:甲殼類種質(zhì)資源開發(fā)及利用.E-mail:huanmr@163.com.

    S917

    A

    1003-1111(2017)05-0628-06

    猜你喜歡
    脊尾白蝦發(fā)育期
    疫情當(dāng)下,上半年華東地區(qū)小棚、工廠化、土塘白蝦如何應(yīng)對?
    設(shè)施葡萄果實發(fā)育期管理技術(shù)要點
    河北果樹(2020年4期)2020-01-09 16:06:08
    脊尾白蝦“紅”起來了畝產(chǎn)可達(dá)五百斤!
    基于累積熱量單位的甜瓜幼苗發(fā)育期模擬
    六價鉻離子在脊尾白蝦和三疣梭子蟹體內(nèi)的富集動力學(xué)
    苯并[a]芘在脊尾白蝦(Exopalaemon carinicauda)體內(nèi)富集的動力學(xué)研究
    1980—2011年阿勒泰市光熱資源變化對春小麥發(fā)育期的影響
    孕期鉛暴露對生長發(fā)育期大鼠腎功能及Claudin-2的影響
    脊尾白蝦仿生態(tài)規(guī)模養(yǎng)殖試驗
    免费看十八禁软件| 90打野战视频偷拍视频| 免费在线观看完整版高清| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产亚洲欧美98| 久久久久久久久久久久大奶| 精品人妻在线不人妻| 午夜两性在线视频| 一本综合久久免费| 国产高清videossex| x7x7x7水蜜桃| 亚洲国产欧美一区二区综合| 91成年电影在线观看| 1024香蕉在线观看| av天堂在线播放| 久久久精品区二区三区| 欧美日韩精品网址| 美女福利国产在线| 欧美成人免费av一区二区三区 | 一边摸一边抽搐一进一小说 | 十分钟在线观看高清视频www| 超色免费av| 90打野战视频偷拍视频| 国产91精品成人一区二区三区| 村上凉子中文字幕在线| 悠悠久久av| 成人永久免费在线观看视频| 国产成人av激情在线播放| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| av超薄肉色丝袜交足视频| 18禁国产床啪视频网站| 国产av一区二区精品久久| videos熟女内射| 999久久久精品免费观看国产| 欧美乱色亚洲激情| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久 成人 亚洲| 校园春色视频在线观看| 精品久久久久久电影网| 欧美精品一区二区免费开放| 在线观看免费日韩欧美大片| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲久久久国产精品| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美激情 高清一区二区三区| 精品人妻在线不人妻| 成年动漫av网址| 国产深夜福利视频在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 在线观看免费视频日本深夜| 女性被躁到高潮视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲中文日韩欧美视频| xxxhd国产人妻xxx| 男女高潮啪啪啪动态图| 色尼玛亚洲综合影院| x7x7x7水蜜桃| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 成人国语在线视频| 在线av久久热| 在线观看日韩欧美| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| tocl精华| 99香蕉大伊视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 1024香蕉在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产亚洲精品第一综合不卡| 精品国产亚洲在线| av免费在线观看网站| 热99国产精品久久久久久7| 在线国产一区二区在线| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产激情久久老熟女| 久久草成人影院| 午夜老司机福利片| 后天国语完整版免费观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产成人精品在线电影| 欧美激情高清一区二区三区| 国产精品九九99| 在线永久观看黄色视频| 国产精品影院久久| 美女视频免费永久观看网站| 女性被躁到高潮视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 女人久久www免费人成看片| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久香蕉精品热| 久久久精品区二区三区| 在线观看66精品国产| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 9热在线视频观看99| av不卡在线播放| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美乱码精品一区二区三区| 韩国av一区二区三区四区| 精品国内亚洲2022精品成人 | 欧美性长视频在线观看| 色综合婷婷激情| 男男h啪啪无遮挡| 在线观看免费高清a一片| 精品国产国语对白av| 亚洲中文日韩欧美视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 人人澡人人妻人| 国精品久久久久久国模美| 免费观看精品视频网站| 亚洲在线自拍视频| 99国产精品99久久久久| 亚洲av片天天在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美最黄视频在线播放免费 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| av超薄肉色丝袜交足视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 大型av网站在线播放| 51午夜福利影视在线观看| 免费高清在线观看日韩| 欧美激情极品国产一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 人成视频在线观看免费观看| 日韩欧美免费精品| 99国产精品一区二区蜜桃av | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 色老头精品视频在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品在线美女| 成人特级黄色片久久久久久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美不卡视频在线免费观看 | 青草久久国产| 电影成人av| 欧美乱妇无乱码| 国产成人免费观看mmmm| 欧美国产精品一级二级三级| bbb黄色大片| 国产精华一区二区三区| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产av又大| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产精品久久电影中文字幕 | 香蕉久久夜色| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲精品成人av观看孕妇| 久热爱精品视频在线9| 999精品在线视频| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲国产看品久久| 精品一区二区三卡| a级片在线免费高清观看视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 天堂动漫精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 午夜福利在线免费观看网站| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产av精品麻豆| 亚洲黑人精品在线| 久久人妻熟女aⅴ| cao死你这个sao货| 免费观看a级毛片全部| 两人在一起打扑克的视频| 少妇的丰满在线观看| 久久影院123| 精品国内亚洲2022精品成人 | 成人国产一区最新在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 18禁国产床啪视频网站| 黄色视频不卡| 在线观看午夜福利视频| 男人操女人黄网站| av网站免费在线观看视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品卡一卡二卡四卡免费| 水蜜桃什么品种好| 国产精品98久久久久久宅男小说| 9191精品国产免费久久| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久香蕉国产精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产伦人伦偷精品视频| 黑丝袜美女国产一区| 91av网站免费观看| 1024视频免费在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 性少妇av在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 啦啦啦在线免费观看视频4| 啦啦啦在线免费观看视频4| 午夜日韩欧美国产| 色老头精品视频在线观看| 久久久精品区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一区二区日韩欧美中文字幕| 成人亚洲精品一区在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 99热网站在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲 国产 在线| 精品一品国产午夜福利视频| 久久香蕉国产精品| 最近最新中文字幕大全免费视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 校园春色视频在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲熟女毛片儿| 午夜精品国产一区二区电影| 日本五十路高清| 少妇被粗大的猛进出69影院| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲七黄色美女视频| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品欧美亚洲77777| 欧美+亚洲+日韩+国产| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 免费在线观看完整版高清| 国产成人精品无人区| 国产熟女午夜一区二区三区| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 丝袜美足系列| 一区二区三区激情视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 国产精品久久视频播放| 大码成人一级视频| 国产成人免费无遮挡视频| 国产亚洲av高清不卡| 十八禁高潮呻吟视频| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲人成伊人成综合网2020| 美国免费a级毛片| 丝瓜视频免费看黄片| 国产精品九九99| 69精品国产乱码久久久| 国产成人av激情在线播放| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 嫁个100分男人电影在线观看| www.精华液| 欧美激情久久久久久爽电影 | 久久热在线av| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产成人av教育| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 午夜激情av网站| 国产精品影院久久| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜日韩欧美国产| 99国产极品粉嫩在线观看| 成人免费观看视频高清| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 精品乱码久久久久久99久播| 18在线观看网站| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 成年版毛片免费区| 在线观看免费视频网站a站| 久久99一区二区三区| 777米奇影视久久| 欧美精品啪啪一区二区三区| 一级a爱片免费观看的视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 两人在一起打扑克的视频| 色播在线永久视频| 嫩草影视91久久| 视频区欧美日本亚洲| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲精品av麻豆狂野| 老司机靠b影院| 十八禁网站免费在线| 久久九九热精品免费| 91老司机精品| 麻豆乱淫一区二区| 欧美午夜高清在线| 中亚洲国语对白在线视频| 国产成人啪精品午夜网站| 老司机在亚洲福利影院| 国产不卡一卡二| 国产成人精品久久二区二区91| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日本五十路高清| 99国产综合亚洲精品| 日本wwww免费看| 色播在线永久视频| av天堂在线播放| 成在线人永久免费视频| 热99re8久久精品国产| 99国产精品99久久久久| 好男人电影高清在线观看| 日韩三级视频一区二区三区| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久青草综合色| 亚洲精品在线美女| 国产一卡二卡三卡精品| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久影院123| 婷婷成人精品国产| 亚洲男人天堂网一区| 大香蕉久久成人网| 久久人妻av系列| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 99国产精品免费福利视频| 日本一区二区免费在线视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产精品久久久av美女十八| av网站免费在线观看视频| 在线播放国产精品三级| 日本黄色视频三级网站网址 | 老司机福利观看| 久热爱精品视频在线9| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 一区在线观看完整版| 亚洲中文字幕日韩| 国产欧美日韩一区二区三| 两性夫妻黄色片| 一级毛片高清免费大全| 涩涩av久久男人的天堂| 大型av网站在线播放| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久精品国产亚洲av高清一级| 精品久久久久久久久久免费视频 | 超碰成人久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 这个男人来自地球电影免费观看| 人妻久久中文字幕网| 欧美精品亚洲一区二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 青草久久国产| 美女福利国产在线| 波多野结衣av一区二区av| 久久久久久久久久久久大奶| av天堂久久9| 自线自在国产av| 性色av乱码一区二区三区2| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久国产精品影院| 天堂√8在线中文| 亚洲人成电影免费在线| 日韩免费高清中文字幕av| 天天影视国产精品| 国产黄色免费在线视频| 正在播放国产对白刺激| 国产99白浆流出| 国产午夜精品久久久久久| 人人妻人人澡人人看| 国产在视频线精品| 亚洲片人在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 精品国内亚洲2022精品成人 | 女人久久www免费人成看片| 日本vs欧美在线观看视频| 757午夜福利合集在线观看| av视频免费观看在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 中文字幕av电影在线播放| 18禁观看日本| 日韩欧美免费精品| 一级片'在线观看视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 国产片内射在线| 超碰97精品在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲精品国产色婷婷电影| 999精品在线视频| 欧美日韩乱码在线| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久久久久久国产电影| av天堂在线播放| 国产亚洲欧美在线一区二区| 最新在线观看一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 天堂动漫精品| 中文字幕色久视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产亚洲欧美98| 激情在线观看视频在线高清 | 欧美黄色淫秽网站| 老司机在亚洲福利影院| 美女高潮到喷水免费观看| 国产高清国产精品国产三级| 久久久国产欧美日韩av| 三级毛片av免费| 午夜两性在线视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 不卡av一区二区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品亚洲av一区麻豆| 下体分泌物呈黄色| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 黄色毛片三级朝国网站| 99国产精品免费福利视频| av天堂久久9| 91成人精品电影| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲欧美一区二区三区久久| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品永久免费网站| 村上凉子中文字幕在线| 男女下面插进去视频免费观看| 成人影院久久| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 黄频高清免费视频| 国产精品永久免费网站| 久久久久久久国产电影| 精品福利永久在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 男女午夜视频在线观看| 女人被狂操c到高潮| 日日夜夜操网爽| 国产淫语在线视频| 在线观看免费午夜福利视频| a级毛片黄视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品久久蜜臀av无| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 人人澡人人妻人| 美女午夜性视频免费| 99热国产这里只有精品6| 黄色成人免费大全| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 精品第一国产精品| 亚洲国产精品sss在线观看 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 十分钟在线观看高清视频www| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 黄色毛片三级朝国网站| 久热这里只有精品99| 很黄的视频免费| 在线观看www视频免费| 在线看a的网站| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产91精品成人一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 在线观看www视频免费| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 人妻 亚洲 视频| 免费在线观看亚洲国产| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 免费观看人在逋| 看片在线看免费视频| 国产一卡二卡三卡精品| 久久久久国产一级毛片高清牌| 91字幕亚洲| 国产精品偷伦视频观看了| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产午夜精品久久久久久| 两个人看的免费小视频| 热99久久久久精品小说推荐| 国产亚洲欧美98| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产精品久久视频播放| 香蕉久久夜色| 91成年电影在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 丝袜在线中文字幕| 午夜福利在线观看吧| 成年人午夜在线观看视频| 老司机影院毛片| 脱女人内裤的视频| 热99久久久久精品小说推荐| 中出人妻视频一区二区| 好男人电影高清在线观看| 亚洲人成电影观看| 成年人午夜在线观看视频| 成在线人永久免费视频| 怎么达到女性高潮| 黄色女人牲交| 国产成人欧美在线观看 | 成年人黄色毛片网站| 黄色成人免费大全| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲国产欧美网| 亚洲精品美女久久av网站| 国产精品欧美亚洲77777| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美日韩福利视频一区二区| 一区二区三区激情视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品久久久久成人av| 成人免费观看视频高清| 黄色a级毛片大全视频| 另类亚洲欧美激情| av网站在线播放免费| 午夜影院日韩av| 99久久国产精品久久久| 身体一侧抽搐| 国产成人影院久久av| 国产乱人伦免费视频| 性色av乱码一区二区三区2| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲熟妇熟女久久| 黑人欧美特级aaaaaa片| 在线观看免费视频网站a站| 中出人妻视频一区二区| 亚洲少妇的诱惑av| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久久久久人人人人人| 欧美精品一区二区免费开放| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产成人精品久久二区二区91| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 免费在线观看日本一区| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产片内射在线| 人妻 亚洲 视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久久久国内视频| 热99国产精品久久久久久7| 黄色视频,在线免费观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲久久久国产精品| 欧美大码av| 午夜福利乱码中文字幕| 欧美成人免费av一区二区三区 | 久久香蕉国产精品| 制服人妻中文乱码| 国产不卡av网站在线观看| 国产片内射在线| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲综合色网址| 99re在线观看精品视频| 中出人妻视频一区二区| 新久久久久国产一级毛片| 精品国产一区二区久久| 欧美+亚洲+日韩+国产| 99热国产这里只有精品6| 久久久久久人人人人人| av福利片在线| 午夜精品国产一区二区电影| av福利片在线| 成人av一区二区三区在线看| 麻豆国产av国片精品| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 后天国语完整版免费观看| 动漫黄色视频在线观看| 久久精品成人免费网站| 亚洲欧美激情在线| 国产精品成人在线| 久久婷婷成人综合色麻豆| 一区在线观看完整版| 国产精品久久久久久精品古装| 国产av又大| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久99久视频精品免费| 中文字幕制服av| 人人妻人人澡人人看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 无人区码免费观看不卡| 91字幕亚洲| 性少妇av在线| 无遮挡黄片免费观看| 老司机福利观看| avwww免费| 正在播放国产对白刺激| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产欧美亚洲国产| 亚洲成人手机| 精品国产乱码久久久久久男人| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 超色免费av| 999精品在线视频| 视频区图区小说| tube8黄色片| 欧美中文综合在线视频| 欧美午夜高清在线| 91老司机精品| 国产欧美亚洲国产| 精品国产国语对白av| 日韩欧美免费精品| 成年人午夜在线观看视频| 欧美在线一区亚洲| 女同久久另类99精品国产91| 欧美精品一区二区免费开放| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 精品久久久久久电影网| 日韩成人在线观看一区二区三区| 大片电影免费在线观看免费| 在线永久观看黄色视频| 91老司机精品|