熱應(yīng)激初期肉兔血象指標(biāo)及與耐熱時間的相關(guān)性研究

李叢艷，李 娟，鄺良德，梅秀麗，郭志強，雷 岷，謝曉紅*

（1.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川成都 610066；2.動物遺傳育種四川省重點實驗室，四川成都 610066；3.成都市農(nóng)林科學(xué)院畜牧研究所，四川成都 611130）

熱應(yīng)激初期肉兔血象指標(biāo)及與耐熱時間的相關(guān)性研究

李叢艷1,2，李 娟3，鄺良德1,2，梅秀麗1,2，郭志強1,2，雷 岷1,2，謝曉紅1,2*

（1.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川成都 610066；2.動物遺傳育種四川省重點實驗室，四川成都 610066；3.成都市農(nóng)林科學(xué)院畜牧研究所，四川成都 611130）

試驗旨在研究熱應(yīng)激初期肉兔血象指標(biāo)與耐熱時間的關(guān)系，為篩選肉兔耐熱性候選評價指標(biāo)提供參考。選取同期出生、體重相近的健康4月齡新西蘭兔55只，隨機分配在（21±1）℃適溫和（38±1）℃高溫環(huán)境中，記錄每只兔的耐熱時間，并在熱應(yīng)激起始（HS0）和8 h（HS8）時采集血液，測定血象指標(biāo)及其變化（△HS）情況。結(jié)果表明：熱應(yīng)激極顯著影響HS8的中性粒細胞百分比（NEUT%）、中性粒細胞/淋巴細胞（N/L）、淋巴細胞百分比（LYMPH%）（P<0.01），顯著影響白細胞計數(shù)（WBC）、LYMPH%、N/L及平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）的△HS（P<0.05），極顯著影響血小板（PLT）、NEUT%、淋巴細胞計數(shù)（LYMPH#）以及單核細胞計數(shù)（MONO#）的△HS（P<0.01）；HS0時的嗜酸性粒細胞百分比（EO%）、嗜酸性粒細胞計數(shù)（EO#）及單核細胞百分比（MONO%）的△HS與耐熱時間呈極顯著正相關(guān)（P<0.01），MONO#的△HS與耐熱時間呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。推測EO%、EO#以及MONO#可能是重要的耐熱性評價候選指標(biāo)。

熱應(yīng)激；血象指標(biāo)；耐熱時間；肉兔

肉兔全身被毛且?guī)缀鯖]有功能性汗腺，當(dāng)夏季環(huán)境溫度較高時難以消除體內(nèi)多余的熱量，非常容易出現(xiàn)熱應(yīng)激，導(dǎo)致代謝功能紊亂，采食量下降，飼料利用率降低，生長速度和機體抵抗力下降，公、母兔繁殖性能降低等[1]，是炎熱季節(jié)和地區(qū)肉兔生產(chǎn)的主要限制因素。前人研究表明，家兔對炎熱的耐受力受遺傳因素制約，可能是一個數(shù)量性狀，使得通過培育耐熱肉兔品系以提高兔自身耐熱力、從根本上消除兔的熱應(yīng)激成為可能[2-3]。血液是機體運輸營養(yǎng)物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的載體，是反映機體狀況的重要指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，血液紅細胞鉀、皮質(zhì)酮、三碘甲狀腺原氨酸、異嗜性粒細胞與淋巴細胞比值、T淋巴細胞亞群、球蛋白、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶等指標(biāo)與牛[4]、羊[5-6]、雞[7-10]、兔[11]等的耐熱性有關(guān)。然而，尚未發(fā)現(xiàn)血象指標(biāo)與畜禽耐熱性關(guān)系的研究。本試驗旨在研究熱應(yīng)激初期肉兔血象指標(biāo)的變化及與耐熱性的關(guān)系，為建立肉兔耐熱性評價指標(biāo)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計 選擇同期出生、體重為（2 313±273）g的健康4月齡新西蘭兔55只，隨機分配在2個人工溫控室內(nèi)，并采用智能溫濕度記錄儀（APRESYS，179-TH）測定實時溫濕度。其中適溫組（N=25，公兔11只，母兔14只）采用空調(diào)降溫，人工加濕，環(huán)境溫度為（21±1）℃；熱應(yīng)激組（N=30，公母各半）采用暖風(fēng)加熱，自動控溫，人工加濕，環(huán)境溫度為（38±1）℃。預(yù)試期5 d，所有兔只均處于適溫環(huán)境中，試驗一直持續(xù)到熱應(yīng)激組所有兔只死亡。試驗于2015年7月在四川省畜牧科學(xué)研究院種兔場溫控室內(nèi)進行，兔自由飲水和采食，飼養(yǎng)管理條件一致（日糧主要營養(yǎng)水平為粗蛋白16.0%，粗纖維14.0%，消化能10.50 MJ/kg）。

1.2 測定指標(biāo)和方法

1.2.1 血樣收集與處理 在熱應(yīng)激起始（HS0）和熱應(yīng)激8 h（HS8）時所有兔只均采集全血2 mL/只，EDTA抗凝，-20℃保存待測。

1.2.2 血象指標(biāo)測定 血液樣品在成都中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗科使用SYSMEX（西森美康）XS-500i全自動血球分析儀及其配套試劑進行測定，測定的血象指標(biāo)：白細胞計數(shù)（WBC）、紅細胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白濃度（HGB）、血小板計數(shù)（PLT）、紅細胞壓積（HCT）、中性粒細胞百分比（NEUT%）、淋巴細胞百分比（LYMPH%）、中性粒細胞/淋巴細胞（N/L）、單核細胞百分比（MONO%）、嗜酸性粒細胞百分比（EO%）、嗜堿性粒細胞百分比（BASO%）、平均紅細胞體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白含量（MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細胞體積分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差（RDW-SD）、紅細胞體積分布寬度變異系數(shù)（RDW-CV）、血小板壓積（PCT）、血小板體積分布寬度（PDW）、平均血小板體積（MPV）、大血小板比率（P-LCR）、中性粒細胞計數(shù)（NEUT#）、淋巴細胞計數(shù)（LYMPH#）、單核細胞計數(shù)（MONO#）、嗜酸性粒細胞計數(shù)（EO#）、嗜堿性粒細胞計數(shù)（BASO#）等血象指標(biāo)。

1.2.3 耐熱時間測定 通過人工觀察，準(zhǔn)確記錄熱應(yīng)激組中每只兔的死亡時間，以正式試驗開始為起點計算出每只兔在高溫環(huán)境下的存活時間，即兔的耐熱時間。

1.3 統(tǒng)計分析 利用SPSS17.0軟件中的一般線性模型（GLM）程序進行方差分析，模型中包括性別效應(yīng)，結(jié)果用最小二乘均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。同時利用軟件中簡單相關(guān)分析模型（CORR）程序進行血象指標(biāo)與耐熱時間的相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 熱應(yīng)激初期肉兔血象指標(biāo)的變化 由于HS8時熱應(yīng)激組已經(jīng)有2只兔死亡，因此HS8時統(tǒng)計數(shù)據(jù)為28只。由表1可見，熱應(yīng)激8 h時大多數(shù)血象指標(biāo)無顯著變化（P<0.05）。與適溫組相比，WBC、PLT、MCHC以 及 MONO#在 HS0和 HS8的組間差異均不顯著，而其在熱應(yīng)激0～8 h的變化值（△HS）在組間的差異均達到顯著（P<0.05）或極顯著水平（P<0.01），表明熱應(yīng)激顯著或極顯著影響WBC、MCHC及MONO#的△HS；熱應(yīng)激組HS8的NEUT%及N/L極顯著高于HS0時以及適溫組在HS0和HS8時的值（P<0.01），其△HS的組間差異也達到顯著（P<0.05）或極顯著水平（P<0.01），表明熱應(yīng)激顯著升高HS8的NEUT%及N/L；熱應(yīng)激組HS8時的LYMPH%及LYMPH#極顯著低于HS0（P<0.01），且極顯著低于HS0和HS8時適溫組的值（P<0.01），其△HS的組間差異達到顯著水平（P<0.05），表明熱應(yīng)激顯著影響LYMPH%及LYMPH#。盡管RBC和RDW-CV的組間差異顯著，但可以看出，HS0的熱應(yīng)激組和適溫組間差異不顯著（P>0.05），HS8時的熱應(yīng)激組和適溫組間差異不顯著（P>0.05），熱應(yīng)激組與適溫組在HS0和HS8之間的差異均不顯著（P>0.05），且其△HS無顯著組間差異，表明熱應(yīng)激對RBC和RDW-CV無顯著影響。

2.2 肉兔血象指標(biāo)及其變化值與耐熱時間的相關(guān)分析 由表2可知，HS0的EO%以及EO#與肉兔的耐熱時間呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）；MONO%在熱應(yīng)激0～8 h的△HS與耐熱時間呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）；MONO#在熱應(yīng)激0～8 h的△HS與耐熱時間呈顯著正相關(guān)（P<0.05）；其余血象指標(biāo)與肉兔耐時間無顯著相關(guān)（P>0.05）。

3 討 論

血象是指血液的一般檢驗（以往稱為血常規(guī)檢查）的結(jié)果，是對外周血中血液細胞數(shù)量和質(zhì)量的化驗檢查，是用以評判機體狀態(tài)、診斷病情的常用輔助檢查手段之一。

紅細胞、血紅蛋白是血液運送氧氣的最主要的媒介。本研究中，外周血RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、RDW-SD、RDW-CV在熱應(yīng)激前后均無顯著變化，僅MCHC在0～8 h的△HS顯著高于適溫組，但總體呈下降趨勢，這與Khalil等[12]發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激1 h對新西蘭公兔及布拉迪紅公兔的RBC、Hb、HCT均無顯著影響的結(jié)果一致，這可能是由于炎熱條件下，機體的代謝產(chǎn)熱降低，導(dǎo)致需氧量降低引起，而需氧量的降低在維持體熱平衡中具有重要作用。但由于測定時間較短，血象指標(biāo)尚未出現(xiàn)顯著變化。Seley于1960年發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激會降低促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）水平，進而降低RBC、Hb以及PCV。本研究結(jié)果與Okab等[13]發(fā)現(xiàn)的夏季熱應(yīng)激引起成年新西蘭公兔RBC、Hb、HCT、MCHC顯著或極顯著降低的結(jié)論不一致，但總體趨勢相同。此外，Ondruska等[14]研究發(fā)現(xiàn)，持續(xù)1個月、每天12 h的（36±3）℃的熱應(yīng)激處理條件下新西蘭成年公母兔在熱應(yīng)激后RBC與HCT均顯著降低，生長公、母兔RBC與HCT在熱應(yīng)激前后無顯著變化，但仍有下降趨勢，與本試驗結(jié)果相同或趨勢一致。進一步的相關(guān)分析表明，RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、RDW-SD、RDW-CV與肉兔的耐熱時間均無顯著相關(guān)，表明它們與肉兔的耐熱性關(guān)系不大，不適宜作為肉兔耐熱性評價指標(biāo)。

表1 熱應(yīng)激初期肉兔血象的變化

血小板是最小的血細胞，可以通過多種應(yīng)激被激活從而發(fā)揮作用，MPV、PDW和P-LCR等參數(shù)可簡單快捷地反映血小板的形態(tài)變化，顯示其活化程度。本研究中熱應(yīng)激對PCT、PDW、MPV以及P-LCR均無顯著影響，表明熱應(yīng)激不能顯著激活血小板。熱應(yīng)激8 h的PLT與0 h以及適溫組相比均無顯著差異，但其0～8 h的△HS極顯著低于適溫組，這可能是由于熱應(yīng)激引起血小板凝集，從而降低外周血中血小板數(shù)量。Denise等[15]對人的研究結(jié)果表明，熱應(yīng)激（運動或被動加熱引起）使得血小板數(shù)量上升，這一結(jié)果與本研究結(jié)果不同，可能是由于物種的差異引起。本試驗中，相關(guān)分析表明PLT、PCT、PDW、MPV以及P-LCR與肉兔耐熱時間均無顯著相關(guān)，表明它們不能反映肉兔的耐熱性能，不宜用作耐熱性評價指標(biāo)。

白細胞主要作用是吞噬細菌、防御疾病，一般以白細胞計數(shù)和白細胞分類計數(shù)表示。Redwine等[16]研究表明，應(yīng)激或應(yīng)激激素（兒茶酚胺類和糖皮質(zhì)激素類）會引起血液中WBC以及相對含量的顯著變化。本研究中發(fā)現(xiàn)，熱應(yīng)激極顯著降低8h時的LYMPH%及LYMPH#，極顯著升高8 h的NEUT%以及N/L，且熱應(yīng)激組WBC和LYMPH%以及LYMPH#和MONO#的△HS均顯著或極顯著低于適溫組，而NEUT%以及N/L顯著或極顯著高于適溫組。本研究結(jié)果與Dhabhar等[17]發(fā)現(xiàn)應(yīng)激引起WBC降低，LYMPH%顯著降低、NEUT%顯著升高的結(jié)果一致，與Okab等[13]發(fā)現(xiàn)的新西蘭公兔在夏季熱應(yīng)激季節(jié)的WBC值極顯著高于春季的結(jié)果相反，而與Khalil等[12]及Ondruska等[13]的研究結(jié)果呈部分一致、部分相反的結(jié)論，推測這可能是由于家兔的品種、性別、年齡以及熱應(yīng)激方式（急性和慢性）的不同引起的。本試驗中，進一步的相關(guān)分析表明，熱應(yīng)激0 h時的EO%（r=0.523）及EO#（r=0.521）與肉兔耐熱時間呈極顯著正相關(guān)，MONO%（r=0.482）及MONO#（r=0.441）在熱應(yīng)激0～8 h的△HS與肉兔耐熱時間呈極顯著或顯著正相關(guān)。熱應(yīng)激期間機體維持體內(nèi)生化指標(biāo)的穩(wěn)定是耐熱的基礎(chǔ)[18]。本研究的方差分析結(jié)果表明，熱應(yīng)激對EO%及EO#均無顯著影響，說明EO%和EO#在熱應(yīng)激條件下較為穩(wěn)定，可能是肉兔耐熱性評價候選指標(biāo)之一；熱應(yīng)激對MONO%及其△HS均無顯著影響，其△HS與耐熱時間的顯著相關(guān)無實際意義，因此MONO%在熱應(yīng)激0～8 h的△HS不適宜作為耐熱性候選指標(biāo)；而熱應(yīng)激對MONO#在0～8 h的△HS有極顯著影響，且其△HS與耐熱時間呈顯著相關(guān)，表明MONO#的△HS與耐熱時間的相關(guān)意義較大，可以作為耐熱性候選指標(biāo)之一。

表2 肉兔血象指標(biāo)與耐熱時間的相關(guān)

4 結(jié) 論

通過對（38±1）℃條件下肉兔血象指標(biāo)的變化分析結(jié)果表明，熱應(yīng)激極顯著升高HS8時的NEUT%和N/L，極顯著降低LYMPH%，顯著或極顯著影響 WBC、PLT、LYMPH%、LYMPH#、MONO#、NEUT%、N/L以及MCHC的△HS。相關(guān)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HS0的EO%、EO#以及MONO#的△HS與耐熱時間的正相關(guān)具有實際意義，推測EO%、EO#以及MONO#可能是重要的耐熱性評價候選指標(biāo)。

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10.19556/j.0258-7033.2017-12-111

2017-07-26；

2017-09-12

四川省公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費項目(SASA 2017A02)；四川省“十三五”畜禽畜種攻關(guān)項目（2016NYZ00 46）；國家兔產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-43-D-3）；四川省財政運行專項（SASA2014CZYX005）

李叢艷（1983-），女，湖南邵陽人，碩士，助理研究員，主要從事家兔遺傳育種研究，E-mail：licongyan0311@sina.com

*通訊作者：謝曉紅(1964-)，女，研究員，主要從事家兔育種與飼養(yǎng)管理研究，E-mail：xiexiaohongl@sina.com