復(fù)方胡黃連對D-半乳糖致急性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制

王曉源，韓翠翠，肖洪彬*

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) ，哈爾濱 150040 ； 2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院 ， 黑龍江 齊齊哈爾 161000）

復(fù)方胡黃連對D-半乳糖致急性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制

王曉源1，韓翠翠2，肖洪彬1*

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) ，哈爾濱 150040 ； 2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院 ， 黑龍江 齊齊哈爾 161000）

目的 探討復(fù)方胡黃連對D-半乳糖致急性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。方法 昆明種小鼠60只，隨機(jī)分為空白對照組， 模型對照組，陽性對照藥肝加欣組（545 mg/kg），復(fù)方胡黃連高（34 mg/kg）、中（17 mg/kg）、低（8.5 mg/kg）劑量組,每組 10只，連續(xù)灌胃7 d，于第7天早6:00灌胃給藥，2 h后造模，除空白對照組外，其余各組腹腔注射0.1%D-半乳糖，體積為0.3 mL/10 g，24 h后摘眼球取血，用全自動生化分析儀測定ALT、AST，取出肝臟組織，根據(jù)試劑盒的要求測定SOD、MDA的含量。結(jié)果 復(fù)方胡黃連對D-半乳糖致小鼠急性肝損傷的治療，模型組與空白組比較，其血清ALT和AST均明顯升高（p＜0.01），肝組織中SOD顯著降低，MDA含量顯著升高。復(fù)方胡黃連各給藥組與模型組比較，均能顯著降低血清ALT和AST含量（p＜0.01），升高肝組織中SOD活性，降低MDA含量（p＜0.01），改善其損傷的病理結(jié)構(gòu)。結(jié)論 復(fù)方胡黃連對D-半乳糖致小鼠急性肝損傷的治療，能顯著降低血清ALT、AST活性，升高肝組織中SOD含量，降低MDA含量。

復(fù)方胡黃連 ；急性肝損傷； 保護(hù)作用

肝損傷并不是一個獨立的病名，而是一種病理改變，是各種肝病在疾病發(fā)展過程中的一個共同的病理環(huán)節(jié)。隨著化學(xué)藥物的應(yīng)用和科學(xué)的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識到藥物對肝臟的損害[1]， 中醫(yī)古籍中雖無“肝損傷”的病名，但以現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對肝損傷的臨床表現(xiàn)（黃疸、發(fā)熱、納差、乏力、右脅部疼痛等），似可歸屬于中醫(yī)“黃疸”“脅痛”之范疇。

1 材料與方法

1.1 材料 昆明種小鼠，18～24 g，雌雄各半。合格證為SCKK（黑）2008004，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。復(fù)方胡黃連，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)教研室提供，為棕色粉末，1 g藥粉含10 g生藥。肝加欣片，中國吉林通化方大藥業(yè)有限公司提供，吉衛(wèi)藥準(zhǔn)字（1996）第431628號，批號：0l0513X03541。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒（上海長征公司生產(chǎn) 091141.200904），草氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒 （上海長征公司生產(chǎn) 090581.200907），SOD試劑盒（南京建成生物制品有限公司生產(chǎn) 20080924），MDA試劑盒 （南京建成生物制品有限公司生產(chǎn)20090916），考馬斯亮藍(lán) （南京建成生物制品有限公司生產(chǎn) 20090826），D-半乳糖 （sigma），0.9%氯化鈉（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司 080228A）。全自動生化分析儀法國生產(chǎn) （Glamour 2000），2135型輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（德國萊卡公司生產(chǎn)），722型分光光度計（山東高密儀器廠生產(chǎn)），透射電子顯微鏡（荷蘭飛利浦公司生產(chǎn)），光學(xué)顯微鏡（Nikon），離心機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠），水浴鍋（上海醫(yī)用分析儀器廠），電子勻漿機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠）。

1.2 方法 取60只昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半。分為6組：空白對照組、模型對照組、陽性對照藥肝加欣組（545 mg/kg）、復(fù)方胡黃連高劑量組（34 mg/kg）、復(fù)方胡黃連中劑量組（17 mg/kg）、復(fù)方胡黃連低劑量組（8.5 mg/kg）。灌胃給藥1次/d，正常對照組、模型對照組給予同體積蒸餾水，連續(xù)給藥7 g，于第6天晚間11:00禁食，不禁水，于第7天早6:00灌胃給藥2 g后造模。 除空白對照組外，其余各組腹腔注射0.1% D-半乳糖，體積為0.3 mL/10 g。

1.3 指標(biāo)測定 24 h后摘眼球取血，取離心血清用全自動生化分析儀測定ALT、AST，同時將動物處死，取出肝臟組織，稱0.5 g肝臟組織用生理鹽水配制成10%的組織勻漿，根據(jù)試劑盒的要求測定SOD、MDA的含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各組間數(shù)據(jù)比較均采用Excel和 SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析，作圖采用Excel作圖工具。

2 結(jié)果

2.1 對D-半乳糖致小鼠急性肝損傷血清ALT、AST的影響 見表1。

表1 對D-半乳糖致小鼠急性肝損傷血清ALT、AST的影響（x± s） U/L

2.2 對D-半乳糖致小鼠急性肝損傷肝組織中SOD、MDA的影響 見表2。

表2 復(fù)方胡黃連對D-半乳糖致小鼠急性肝損傷肝組織中SOD、MDA的影響（x±s）

3 討論

ALT、AST作為肝細(xì)胞內(nèi)酶，在氨基酸的合成與分解代謝中起重要作用。當(dāng)肝組織受到急性損傷或細(xì)胞膜通透性增加時，2種酶大量釋放到血液中，使血清中酶的活性顯著增高。除了肝外臟器病變的情況導(dǎo)致（如急性心肌梗死、心肌炎等）血清內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶升高外，發(fā)生急性肝損傷時，血清ALT、AST升高幅度能反映肝細(xì)胞壞死程度[2]。在輕、中度肝損傷時，以ALT升高較為明顯，ALT升高遠(yuǎn)大于AST升高；當(dāng)嚴(yán)重肝細(xì)胞損傷時，線粒體受損，可導(dǎo)致線粒體內(nèi)的酶被釋放入血，此時以AST升高更明顯，血清中AST/ALT比值升高。本實驗中D-gal從染毒后，血清ALT和AST活性明顯升高，ALT由（30.40±12.91）U/L升高至（61.19±15.62）U/L，AST由（99.56±23.92）U/L升高至（201.45±26.25）U/L，提示造模成功，肝臟發(fā)生了急性損傷，且AST比ALT升高更為顯著，說明模型肝損傷較為嚴(yán)重，這一結(jié)果與王鴻利[3]在《實驗診斷學(xué)》中的描述相一致。模型組與空白組比較，其血清ALT和AST均明顯升高（p＜0.01），說明D-半乳糖引起肝內(nèi)生成二磷酸尿苷半乳糖，使尿苷酸的生成減少，繼而引起核酸、糖蛋白和糖脂等物質(zhì)減少，限制了細(xì)胞器的再生及酶的生成和補充，細(xì)胞器受損，肝細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能均出現(xiàn)異常，致使血清ALT、AST水平顯著升高。

肝損傷是多因素參與的復(fù)雜過程，自由基和脂質(zhì)過氧化在肝損傷中起著十分重要的作用[4]。自由基是機(jī)體正常化過程的中間產(chǎn)物，在機(jī)體正常及病理過程中都存在。脂質(zhì)過氧化（LP）是自由基（FR）引起的一系列的反應(yīng)，機(jī)體內(nèi)存在著大量多聚不飽和脂肪酸（PUFA），極易受到氧化作用的損傷，產(chǎn)生有細(xì)胞毒性的脂質(zhì)過氧化物，如丙二醛（MDA）等。同時，機(jī)體在進(jìn)化過程中獲得了滅活氧自由基的一些酶，如超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）等，SOD和NO的變化可以間接地反應(yīng)疾病情況下自由基的變化，MDA的含量能反映肝細(xì)胞膜脂氧化的強弱和細(xì)胞受自由基攻擊的程度和肝臟的損傷程度[3-4]。

本病病機(jī)為濕熱相搏，故立清肝膽濕熱之法，濕熱得清，則諸癥自除；同時由于肝經(jīng)之熱，易耗陰血，因此，在清肝膽濕熱的同時，還要固護(hù)肝之陰血。方中胡黃連[5]為君藥，味苦性寒，主入肝、膽、胃、大腸經(jīng)， 瀉肝經(jīng)濕熱。同時胡黃連又具有利膽退黃之能，以之為君，使?jié)駸崆?、黃疸退；肝為剛臟，主疏泄，肝經(jīng)濕熱，疏泄失職，而引起脾胃運化失常，胡黃連能清肝膽之濕熱，恢復(fù)肝臟之正常疏泄，有利于恢復(fù)脾胃的正常運化升降之職，使脾運健則濕無以生；清熱除濕，兩擅其功。白芍為臣藥，酸苦微寒，歸肝脾經(jīng)，能斂陰養(yǎng)血、柔肝止痛；肝藏血，體陰而用陽，肝經(jīng)之熱必然灼爍肝陰，故用白芍，養(yǎng)肝之陰血，胡黃連苦燥易傷陰血，故用白芍既養(yǎng)己傷之陰血又防胡黃連苦燥傷陰，肝木克土可致腹痛，用白芍緩急止痛，實為臣佐之藥。清熱燥濕易傷陰血，滋陰又有助濕之弊，胡黃連與白芍合用，清熱燥濕而不傷陰血，滋陰而不礙邪，君臣相配，共奏清肝膽之濕熱，養(yǎng)血斂陰，柔肝止痛之效。

本實驗結(jié)果顯示，D-半乳糖誘發(fā)肝損傷后，模型組肝組織SOD由（171.44±39.30）U/mg降至（122.96±36.72）U/mg，MDA由（14.18±0.4）nmol/mg升至（20.97±0.72）nmol/mg，均變化明顯（p＜0.05），說明造模成功，小鼠肝臟發(fā)生了脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。其中SOD明顯降低，表明D-半乳糖引起肝損傷的機(jī)制與膜脂質(zhì)過氧化有關(guān)。SOD作為體內(nèi)重要的抗氧化酶，是超氧陽離子自由基的清除劑，可抑制自由基啟動的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，肝細(xì)胞受到自由基攻擊時SOD[6]可因其耗竭而減少[7]；MDA是其發(fā)生脂質(zhì)過氧化的主要降解產(chǎn)物，嚴(yán)重?fù)p傷肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致肝細(xì)胞腫脹、壞死，其含量反映了體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的水平，也作為損害因子對機(jī)體進(jìn)行損傷[8]。

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Protective effect and mechanism of compound Figwort fl ower Picrorhiza Rhizome on acute liver injury induced by D-galactose

WANG Xiaoyuan1, HAN Cuicui2, XIAO Hongbin1*
(1. Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, China;2. Qiqihar Medical University, Qiqihar 161000, Heilongjiang Province, China)

Objective To explore the protective effect and mechanism of compound Figwortflower Picrorhiza Rhizome on the acute liver injury induced by D-galactose. Methods Sixty Kunming rats were randomly divided into blank control group, model control group, positive control group (545 mg/kg) of liver with jiaxin tablets, compound Figwortflower Picrorhiza Rhizome high dose group (34 mg/kg), compound Figwortflower Picrorhiza Rhizome medium dose group (17 mg/kg), compound Figwortf l ower Picrorhiza Rhizome low dose group (8.5 mg/kg). There were 10 rats in each group, consecutive lavage for seven days. Give the tablets at 6 a.m. on the seventh day and mold in 2 hours. In addition to the blank group, the other groups were injected with 0.1% D-galactose, 0.3 mL/ 10g, and the blood was taken after 24 hours, with automatic biochemical analyzer determination of ALT, AST, remove the liver tissue, according to the requirement of the kit for determining the content of SOD, MDA. Results Compared with blank group, the serum levels of ALT and AST in model group were signif i cantly increased (p＜0.01), SOD in the liver tissue decreased significantly, the MDA content increased significantly. Compound Figwortflower Picrorhiza Rhizome each dosage group compared with model group, can significantly reduce serum ALT and AST levels (P＜0.01), increase SOD activity in liver tissue, reduce MDA content (P＜0.01), pathological structure to improve its damage. Conclusion The treatment of acute liver injury induced by compound Figwortf l ower Picrorhiza Rhizome to rats with D-galactose, which can signif i cantly reduce the serum ALT and AST activity, can signif i cantly increase SOD content in liver tissues and decrease MDA content.

compound Figwortf l ower Picrorhiza Rhizome; acute liver injury; protection mechanism

R285.5

A

2095-6258(2017)06-0890-03

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.06.010

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項目（12541737）。

王曉源（1977-）,女，副教授,在站博士后,主要從事中藥抗衰老的實驗研究。

*通信作者：肖洪彬,男，教授,博士研究生導(dǎo)師,電子信箱- herxiaohongbin@126.com

2016-07-06）