牛羊活體采集O—P液的技術(shù)要點(diǎn)

文│杜平麗（河北省定州市農(nóng)業(yè)局）

牛羊活體采集O—P液的技術(shù)要點(diǎn)

文│杜平麗（河北省定州市農(nóng)業(yè)局）

在口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)工作中，牛、羊等反芻動(dòng)物在發(fā)病前期、恢復(fù)期、無臨床癥狀的可疑情況下，其食道—咽部位的分泌物即O—P液中口蹄疫病毒能夠繼續(xù)繁殖及存活，常被用于病原學(xué)檢測(cè)。O—P液樣品的采集、處理、保存、運(yùn)送等技術(shù)環(huán)節(jié)是否嚴(yán)格把關(guān)，直接關(guān)系到樣品質(zhì)量、檢驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論的準(zhǔn)確性和可靠性。

切實(shí)掌握O—P液的采集技術(shù)，是當(dāng)前基層獸醫(yī)工作者及實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的一項(xiàng)基本技能。

一、前期準(zhǔn)備要充分

1.器具。金屬探杯（由采集杯、拉桿和把柄環(huán)組成）、滅菌廣口瓶（或毫升大離心管）、采樣箱、記號(hào)筆、標(biāo)簽、封口膜、一次性手套、口罩、標(biāo)簽紙、簽字筆、冷藏箱、干冰/液氮、采樣單等。

2.試劑。生理鹽水、0.2%檸檬酸或2%氫氧化鈉、磷酸鹽緩沖液（0.04 摩爾/升、pH7.4）或細(xì)胞培養(yǎng)液（0.5%水解乳蛋白-Earle液）。

二、如何采集到高質(zhì)量的樣本

1.明確采樣部位。O—P液主要收集被采動(dòng)物食管開始部、咽喉壁、隱窩以及軟腭表面的上皮細(xì)胞，口蹄疫病毒能夠在這些部位存活和繁殖。

2.采樣前準(zhǔn)備工作。

（1）清洗器具。采樣探杯在使用前需經(jīng)0.2%檸檬酸或2%氫氧化鈉溶液浸泡至少5分鐘，再用與動(dòng)物體溫一致的自來水反復(fù)沖洗幾次，以減少機(jī)體應(yīng)激。為避免交叉感染，每采完一頭動(dòng)物，探杯就應(yīng)重復(fù)進(jìn)行消毒與沖洗。

（2）動(dòng)物禁食。被檢動(dòng)物在采樣前禁食(可飲水)12小時(shí)，以避免反芻胃內(nèi)容物嚴(yán)重污染O—P液。

（3）做好采樣人員的個(gè)人安全防護(hù)，提高防護(hù)意識(shí)。

3.采樣技術(shù)。被采動(dòng)物站立保定，頭微上仰。操作人員洗手消毒，左手打開動(dòng)物口腔，將開口器平伸進(jìn)口腔，下壓手柄豎立保持不動(dòng)，另一手持采樣探杯，沿開口器伸進(jìn)動(dòng)物口腔，達(dá)到咽部時(shí)輕輕抽送幾下刺激動(dòng)物吞咽，順勢(shì)動(dòng)作輕緩地將消毒過的探杯伸到食道上部約15厘米處，前后稍微用力來回拉3～5次。最后，拉出探杯，確保杯中的咽部—食道刮取物不少于8毫升。

4.樣品保存。將探杯涮洗幾次，使O—P液樣品全部放入等量的細(xì)胞培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液中，加蓋密封后充分振蕩搖勻，貼上標(biāo)簽。按體系文件中采樣登記表要求，詳細(xì)記錄樣品日期和編號(hào)等信息。

收集O—P液樣品后，最好立即進(jìn)行檢測(cè)，如果不是立即檢測(cè)，應(yīng)該立即冷凍。如果運(yùn)輸時(shí)間較長(zhǎng)，應(yīng)當(dāng)把樣品放到干冰或者液氮中。冷凍前瓶口要求密封不漏氣。特別注意，如果是干冰保存，若有二氧化碳進(jìn)入瓶?jī)?nèi)會(huì)降低pH 值，由于口蹄疫病毒在酸性環(huán)境中很脆弱，很可能使口蹄疫病毒失活。在整個(gè)運(yùn)輸途中，避免樣品解凍。

樣品的正確采集及合理保存直接影響著檢測(cè)結(jié)果和分析判定，不容忽視。

三、后期無害化處理工作

采樣結(jié)束后，采樣人員要進(jìn)行消毒更衣，對(duì)采樣中使用的器材及環(huán)境及時(shí)進(jìn)行消毒，并對(duì)廢棄物進(jìn)行無害化處理，確保環(huán)境安全。