第三、第四代抗-HCV檢測(cè)試劑對(duì)122份可疑標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果分析

朱榮華 朱碧姝 黃蘇金

678000保山市中心血站

第三、第四代抗-HCV檢測(cè)試劑對(duì)122份可疑標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果分析

朱榮華 朱碧姝 黃蘇金

678000保山市中心血站

目的：探討第三代、第四代抗-HCV檢測(cè)試劑對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者篩檢的應(yīng)用價(jià)值。方法：用國(guó)產(chǎn)第三代、第四代抗-HCV檢測(cè)試劑對(duì)2011-2013年無(wú)償獻(xiàn)血者篩檢的抗-HCV初檢、復(fù)檢不合格的122份標(biāo)本在同等條件下進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：第三代與第四代試劑檢測(cè)可疑結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論：第三代與第四代抗-HCV檢測(cè)試劑間的靈敏度、特異性存在一定的差異。

雙抗原夾心；抗-HCV；試劑

丙肝是一種“沉默”的疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球約有2億人感染HCV[1]，在中國(guó)HCV感染者大約4 000萬(wàn)人，感染率3.2%[2]。目前，有多種HCV抗體檢測(cè)試劑可供臨床選擇，血站都要求用不同廠家的試劑對(duì)抗-HCV進(jìn)行初檢和復(fù)檢，初檢和復(fù)檢均合格，此份標(biāo)本才算合格。為評(píng)估萬(wàn)泰第三代、第四代抗-HCV試劑的檢測(cè)性能，對(duì)122份可疑標(biāo)本進(jìn)行同步檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

資料與方法

材料來(lái)源：保山市中心血站2011-2013年對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者抗-HCV初檢(北京萬(wàn)泰)或(和)復(fù)檢(廈門新創(chuàng))不合格標(biāo)本122份，常溫下復(fù)融待檢；陽(yáng)性對(duì)照為康徹思坦廠家生產(chǎn)質(zhì)控血清；陰性對(duì)照為試劑盒陰性對(duì)照血清。

試劑：國(guó)產(chǎn)第三代丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒；第四代丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒。以上試劑均通過(guò)中國(guó)藥品生物制品批批檢驗(yàn)合格，均在有效期內(nèi)使用，實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書操作。

結(jié)果判定：S/CO≥1判定為陽(yáng)性，0.5≤S/CO＜1判定為可疑，S/CO＜0.5判定為陰性。

儀器：全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)一體機(jī)(Uranus AE150)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)P＜0.05。

結(jié) 果

兩試劑檢測(cè)結(jié)果：在檢測(cè)的122份標(biāo)本中，國(guó)產(chǎn)第三代間接法抗-HCV檢測(cè)試劑檢測(cè)陽(yáng)性28份，可疑15份，陰性79份；國(guó)產(chǎn)第四代雙抗原夾心法抗-HCV檢測(cè)試劑檢測(cè)陽(yáng)性17份，可疑0份，陰性105份。第三代與第四代試劑檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)經(jīng)χ2檢驗(yàn)(Pearson)，兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；但第三代與第四代試劑檢測(cè)可疑結(jié)果數(shù)經(jīng)χ2檢驗(yàn)，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.98，P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 國(guó)產(chǎn)第三代、第四代抗-HCV檢測(cè)結(jié)果分析

兩試劑精密性比較：通過(guò)20孔陽(yáng)性對(duì)照檢測(cè)，第三代試劑陽(yáng)性對(duì)照S/CO值均值3.026，標(biāo)準(zhǔn)差0.497，變異系數(shù)16.24%；第四代試劑陽(yáng)性對(duì)照S/CO值均值24.051，標(biāo)準(zhǔn)差0.874，變異系數(shù)3.63%。第四代的試劑S/CO在第三代的基礎(chǔ)上放大大約8倍，第三代試劑變異系數(shù)是第四代試劑的4.5倍。

討 論

HCV所致的丙型肝炎是一種危害嚴(yán)重的傳染病。由于目前沒(méi)有HCV疫苗和特效的抗病毒藥物，對(duì)相關(guān)人群進(jìn)行篩查和早期診斷成為控制丙型肝炎發(fā)生和傳播的重要手段，第三代抗-HCV抗體的檢測(cè)主要是用間接ELISA方法檢測(cè)血清或血漿樣品中丙肝病毒(HCV)抗體，在微孔條上預(yù)包被基因重組HCV結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原，可與樣品中抗HCV抗體反應(yīng)，再加入HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體與之結(jié)合，然后用TMB底物作用顯色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度(OD值)判斷樣品中HCV抗體的存在與否，主要檢測(cè)的是血清或血漿中的抗HCV IgG抗體。由于IgG抗體出現(xiàn)時(shí)間較晚，感染早期采集的標(biāo)本容易被漏檢；另外，血清中非特異性IgG的吸附以及類風(fēng)濕因子的干擾，易產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)[3]。第四代HCV抗體檢測(cè)試劑主要是雙抗原夾心法，是利用酶標(biāo)記抗原代替間接法中的酶標(biāo)記二抗，檢測(cè)的抗體主要包括IgG、IgM等在內(nèi)的總抗體[3]。從122份的檢測(cè)結(jié)果看，第三代與第四代試劑檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)經(jīng)卡方檢驗(yàn)(Pearson)，兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但第三代與第四代試劑檢測(cè)可疑結(jié)果經(jīng)卡方檢驗(yàn)，兩者之間的差異存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.98，P＜0.05)。這可能與相關(guān)文獻(xiàn)所報(bào)告[3]的第三代檢測(cè)試劑易產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)有關(guān)。第三代抗-HCV間接法試劑盒窗口期長(zhǎng)(約70 d)，漏檢率高[4]，在無(wú)償獻(xiàn)血者血液篩檢中可造成血液浪費(fèi)，增加了獻(xiàn)血者及受血者的心理負(fù)擔(dān)，同時(shí)也無(wú)形中加大了無(wú)償獻(xiàn)血者的流失，進(jìn)一步加重血源緊張。

從兩試劑精密性比較看，第三代、第四代試劑陽(yáng)性對(duì)照S/CO值均值分別為3.026和24.051，第四代的試劑S/CO在第三代的基礎(chǔ)上放大大約8倍，這主要是因?yàn)榈谒拇噭┎捎蒙锼?親和素級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng)提高了靈敏度，同時(shí)檢測(cè)IgM和IgG，縮短了窗口期(約30 d)[4]。第三代試劑變異系數(shù)16.24%，第四代試劑變異系數(shù)3.63%，第三代試劑變異系數(shù)是第四代試劑的4.5倍，說(shuō)明第四代試劑的加樣量由第三代試劑盒的10μL變?yōu)榈谒拇?0μL，加樣量增大，少了加樣誤差。

檢測(cè)結(jié)果顯示第三代試劑抗-HCV檢測(cè)淘汰率35.25%，第四代試劑抗-HCV檢測(cè)淘汰率13.93%，其中第三代、第四代兩種試劑均為陽(yáng)性符合率13.93%，說(shuō)明兩代抗-HCV檢測(cè)試劑陽(yáng)性檢出率仍有較大差別。122份標(biāo)本均為初檢或(和)復(fù)檢不合格標(biāo)本，第三代的檢測(cè)淘汰率35.25%，由于目前制造丙肝試劑的抗原主要用基因工程表達(dá)和多肽合成方法得到，用什么區(qū)段的丙肝病毒抗原蛋白，如何選擇各種抗原合適的比例，各試劑廠家有所不同，導(dǎo)致試劑間的靈敏度、特異性存在一定的差異[5]。

[1]Bostan N,Mahmood T.An overview about hepatitis C:a devastating virus[J].Crit Rev Microbiol,2010,36(2):91-133.

[2]Lau GKK,Zhuang H.Top hepatology issue in china[J].JGastroentHepatol,2003,17(l):9.

[3]韓振格,孟繼鴻.雙抗原夾心ELISA法檢測(cè)抗HCV總抗體[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2008,26(4):246-248.

[4]白廣紅,張玲玲.第四代抗-HCV試劑盒對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者篩檢價(jià)值評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,27(6):116-117.

[5]徐樹良,談維,孫啟俊,等.抗-HCV分片段試劑對(duì)抗-HCV陽(yáng)性標(biāo)本的確認(rèn)價(jià)值探討[J].中國(guó)輸血雜志,2004,17(2):94-95.

122 suspicious samples results were analyzed by using third and fourth generation anti-HCV reagents

Zhu Ronghua,Zhu Bishu,Huang Sujin
Central Blood Station of Baoshan City 678000

Objective:To investigate the application value of third generation and fourth generation anti-HCV test reagents in voluntary blood donors screening.Methods:We used the third generation and fourth generation anti-HCV test reagents to test the 122 samples of anti-HCV and 2011-2013 unqualified samples which were screened by the unpaid blood donors for the past two years under the same conditions.Results:The difference between the third and fourth generations of reagents was statistically significant(P＜0.05).Conclusion:There were some differences in sensitivity and specificity between the third generation and the fourth generation of anti-HCV detection agents.

Double antigen sandwich;Anti-HCV;Reagent

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.33.69