血清IL-6及外周血Th17細(xì)胞在合并RA的AMI患者中的臨床意義

黃 暉，李 禮，叢廣志，何 琳，燕 茹，郝 鈺，馬玉蘭，張 亮，張紅巖，賈紹斌

·論 著·

血清IL-6及外周血Th17細(xì)胞在合并RA的AMI患者中的臨床意義

黃 暉，李 禮，叢廣志，何 琳，燕 茹，郝 鈺，馬玉蘭，張 亮，張紅巖，賈紹斌

目的探討急性心肌梗死(AMI)合并類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)與不合并類風(fēng)濕關(guān)節(jié)(RA)患者的臨床指標(biāo)及血清白介素-6(IL-6)水平和外周血輔助性T細(xì)胞17(Th17)的差異。方法選擇合并RA的AMI患者28例，不合并RA的AMI患者28例，收集這些患者的基線資料，并測(cè)定患者血清IL-6水平和外周血淋巴細(xì)胞Th17細(xì)胞亞群，比較2組差異。結(jié)果合并RA的AMI患者血清IL-6水平高于不合并RA的AMI患者(P<0.05)，身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)低于不合并RA的AMI患者(P<0.05)；Th17細(xì)胞在AMI患者外周血CD 4 T細(xì)胞中比例顯著升高，但在合并及不合并RA的AMI患者中無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；合并RA的AMI患者的血清IL-6水平顯著高于不合并RA的AMI患者，且在不合并RA的AMI患者中，血清IL-6水平與AMI患者冠脈病變程度呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論血清IL-6可能是不合并RA的AMI患者冠脈病變進(jìn)展的重要炎癥因子，而Th17細(xì)胞可能是RA患者發(fā)生AMI的一個(gè)潛在致病因素。

急性心肌梗死；類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；自身免疫；輔助性T細(xì)胞17；血清白介素-6

冠心病(CHD)是一種與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)有相同炎癥通路的心臟疾病[1-2]。近年來研究提示，早期粥樣硬化斑塊的主要成分為各種免疫細(xì)胞，而這些免疫細(xì)胞釋放的各種效應(yīng)分子加速了斑塊的進(jìn)展；急性冠脈綜合征(ACS)就是斑塊內(nèi)炎癥激活的表現(xiàn)[3]。RA是以關(guān)節(jié)病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的自身免疫性疾病。有研究指出，從20世紀(jì)50年代起，CHD便成為RA患者的主要死亡原因。國(guó)外一項(xiàng)研究表明，RA患者和糖尿病患者急性心肌梗死(AMI)的風(fēng)險(xiǎn)相當(dāng)[4]，RA患者的心血管死亡率是普通人群的1.5倍[5]。但是RA患者易合并AMI的發(fā)病機(jī)制并不明確。此研究旨在對(duì)比合并和不合并RA的AMI患者的異同，探討合并RA的AMI患者的潛在發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料：寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院心臟中心2015年3月-2016年5月收治的AMI合并RA并行冠脈介入治療(PCI)的患者共28例，按1∶1比例選取年齡、性別匹配的同期住院接受PCI不合并RA的AMI患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合2012年歐洲心臟病學(xué)會(huì)制定的急性心肌梗死診治指南；符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并除RA外的其他結(jié)締組織??；伴有嚴(yán)重臟器功能衰竭。

1.2 研究方法：詳細(xì)記錄患者的性別、年齡、RA病程、吸煙史、BMI、入院臨床檢驗(yàn)、冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果、Syntax評(píng)分，采用DAS28評(píng)估患者RA疾病活動(dòng)度。收集患者血清檢測(cè)血清白介素-6(IL-6)，每組隨機(jī)選取8例患者外周血分離PBMC,檢測(cè)患者輔助性T細(xì)胞17(Th17)占CD4 T細(xì)胞的比例，并采集年齡、性別匹配的健康人8例進(jìn)行流式染色。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 ELISA法檢測(cè)血清IL-6含量：采集納入患者外周血4 mL，采血后30 min內(nèi)將血清分離并分裝，置于-80 ℃冰箱凍存，采用未凍融的血清進(jìn)行檢測(cè)。選用RD公司提供的ELISA測(cè)量IL-6試劑盒(Quantikine;R&D Systems，Minneapolis，MN，USA)，操作步驟按說明書進(jìn)行。反應(yīng)終止后立即上酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 流式法檢測(cè)Th17細(xì)胞占CD 4 T細(xì)胞的比例：分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，用1 640無血清培養(yǎng)基，添加離子霉素(1 μl/mL)、PMA(0.5 μl/mL)、BFA(2.5 μl/mL)置于孵箱內(nèi)(37℃，5%CO2)刺激4 h；收集細(xì)胞進(jìn)行表面染色：用PECF594標(biāo)記的抗人CD4抗體2 μl、AF700標(biāo)記的抗人CD3抗體2 μl避光染色30 min；重懸細(xì)胞，加入BD固定/破胞膜液 300 μl，4℃避光孵育20 min；用APC標(biāo)記的IL-17抗體2 μl進(jìn)行胞內(nèi)染色，并采用同型抗體對(duì)照，4℃避光孵育30 min，洗滌后上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 2組患者臨床資料比較：2組患者的年齡、高/低密度脂蛋白、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)及冠脈SYNTAX積分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。不合并RA的AMI患者高血壓病史的比例明顯高于合并RA的AMI患者，見表1。

2.2 血清IL-6水平與AMI患者冠脈SYNTAX積分相關(guān)性分析：血清IL-6水平與SYNTAX積分呈正相關(guān)，且這種相關(guān)性僅存在于不合并RA的AMI患者，合并RA的AMI患者，其血清IL-6水平雖顯著高于不合并RA的AMI患者(表1)，但與SYNTAX積分無相關(guān)性，見圖1-圖2(目錄后)。

2.3 外周血Th17細(xì)胞在各組間表達(dá)的差異：合并及不合并RA的AMI患者外周血Th17細(xì)胞在CD 4T細(xì)胞中的比例顯著高于健康對(duì)照組，在AMI亞組中，雖未出現(xiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但合并RA的AMI患者的Th17細(xì)胞比例較未合并RA的AMI患者有升高趨勢(shì)，見圖3-圖4(目錄后)。

表1 合并與不合并RA的AMI患者的臨床及免疫學(xué)資料分析

3 討論

近年來，國(guó)外許多研究提示RA患者心血管事件的發(fā)生率增高，但對(duì)于RA發(fā)生CHD的危險(xiǎn)因素的研究結(jié)果尚不統(tǒng)一。有結(jié)果提示，在RA患者中，低BMI的RA患者心血管死亡率增加3倍以上，這可能是因?yàn)榧膊』顒?dòng)造成患者體重下降，低BMI的RA患者往往有更高的疾病活動(dòng)度，系統(tǒng)免疫活動(dòng)異常導(dǎo)致CHD的發(fā)生和發(fā)展。國(guó)內(nèi)一項(xiàng)大型RA合并CHD的流行病調(diào)查顯示，傳統(tǒng)心血管危險(xiǎn)因素并不是導(dǎo)致RA患者發(fā)生冠脈病變的直接因素，單純控制傳統(tǒng)心血管危險(xiǎn)因素并不能完全阻止RA患者冠脈病變的進(jìn)展[6]。本研究結(jié)果提示，合并RA與不合并RA的AMI患者的冠脈病變情況及心功能均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而2組患者在BMI、CRP、IL-6水平上明顯不同，在傳統(tǒng)心血管危險(xiǎn)因素的比較上，合并RA的AMI患者高血壓的發(fā)生率低于不合并RA的AMI患者，與既往研究結(jié)果相符。

IL-6是一種促進(jìn)Th17分化的細(xì)胞因子，IL-6在細(xì)胞膜表面的IL-6受體水解后可形成sIL-6R，其可以和IL-6結(jié)合形成復(fù)合體，介導(dǎo)遠(yuǎn)距離信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，從而影響包括內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞[7]。國(guó)外多項(xiàng)研究表明，IL-6水平與冠狀動(dòng)脈累及冠脈的支數(shù)呈正相關(guān)[8]，同時(shí)IL-6的基因多態(tài)性和冠脈病變支數(shù)也存在相關(guān)性[9]。

冠脈SYNTAX評(píng)分是一種對(duì)冠狀動(dòng)脈病變程度進(jìn)行評(píng)估的半定量工具，該評(píng)分結(jié)合了Leaman評(píng)分、ACC/AHA病變分級(jí)系統(tǒng)、完全閉塞分型系統(tǒng)以及Duke和ICPS分支病變分型系統(tǒng)，可更為翔實(shí)地對(duì)冠狀動(dòng)脈病變的解剖學(xué)特征進(jìn)行評(píng)價(jià)。而冠脈SYNTAX評(píng)分對(duì)50%～99%的非梗死病變給予相同的分?jǐn)?shù)，故而其更多地反映病變累及范圍的大小。Harada等利用64排冠脈CT評(píng)估病人冠脈斑塊的數(shù)目，發(fā)現(xiàn)其與IL-6有關(guān)[8]，比計(jì)算冠脈累及支數(shù)更為精確。因此，IL-6在AMI患者特別是未合并RA的AMI患者中與SYNTAX積分的相關(guān)性表明，IL-6水平與冠脈內(nèi)粥樣硬化累及的范圍明確相關(guān)，提示IL-6可能在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生發(fā)展方面發(fā)揮了重要的作用。本研究結(jié)果提示，合并RA的AMI患者的血清IL-6水平顯著高于不合并RA的AMI患者，且只有在不合并RA的AMI患者中，血清IL-6水平與AMI患者冠脈病變程度(SYNTAX積分)有顯著的正相關(guān)性，提示IL-6是AMI患者冠脈斑塊進(jìn)展的因素之一，但合并RA的AMI患者動(dòng)脈粥樣硬化及梗死的發(fā)生可能存在其他的致病因子。

Th17細(xì)胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種輔助T細(xì)胞的亞型，其發(fā)現(xiàn)解釋了許多采用原有適應(yīng)性免疫理論無法解釋的問題，與RA等多種自身免疫病相關(guān)[10]。同時(shí)，也有報(bào)道稱其分泌因子IL-17A作為一種前炎癥因子，與人類動(dòng)脈粥樣硬化中斑塊的不穩(wěn)定性密切相關(guān)[11]。多個(gè)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在Apoe-/-小鼠內(nèi)阻斷IL-17R信號(hào)通路能減小斑塊的體積，減輕粥樣斑塊的進(jìn)展[12-13]。但此結(jié)果與使用不同克隆來源的抗體的結(jié)果并不統(tǒng)一。

我國(guó)對(duì)Th17細(xì)胞與CHD的關(guān)系研究尚無統(tǒng)一結(jié)論，有學(xué)者認(rèn)為，AMI及不穩(wěn)定心絞痛(UAP)患者中Th17細(xì)胞在T細(xì)胞中的比例明顯升高，而另有學(xué)者認(rèn)為Th17細(xì)胞在AMI、UAP及對(duì)照組中無明顯差異。本研究結(jié)果提示，AMI患者Th17細(xì)胞在CD4 T細(xì)胞亞群中顯著升高，與之前部分研究相似。但在是否合并RA的組間比較中無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這可能與本研究納入例數(shù)較少有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，與不合并RA的AMI患者相比，合并RA的AMI患者Th17細(xì)胞亞群比例有升高趨勢(shì)，提示Th17細(xì)胞比例升高可能是RA患者發(fā)生AMI的潛在致病原因，但其機(jī)制還需進(jìn)一步驗(yàn)證。

Th17細(xì)胞與血清IL-6在CHD患者中水平升高，提示二者在冠脈病變中均發(fā)揮了一定的作用，且血清IL-6水平與冠狀動(dòng)脈病變程度存在相關(guān)性。但在合并RA 的AMI患者中血清IL-6水平與冠脈程度無相關(guān)性，提示RA患者發(fā)生AMI可能存在其他致病因子，而Th17細(xì)胞可能為其中一個(gè)潛在的致病因素。

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ClinicalsignificanceofIL-6andTh17cellsinacutemyocardialinfarctionpatientscombinedwithrheumatoidarthritis

HUANGHui,LILi,CONGGuangzhi,HELin,YANRu,HEYu,MAYulan,ZHANGLiang,ZHANGHongyan,JIAShaobin.

DepartmentofCardiology,GeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750004,China

JIAShaobin,Email: hui8380156@163.com

ObjectiveTo explore the difference of clinical charateristics and Th17 cell and serum IL-6 between patients in acute myocardial infarction with or without rheumatoid arthritis.Methods28 patients with AMI combined RA and another 28 AMI patients were selected,and the baseline data were collected. ELISA and Flow cytometry were used to test Th17 and IL-6.ResultsThe level of IL-6 was higher in AMI patients combined with RA while BMI was lower in these patients compared with AMI patients without RA (t=-2.535,P<0.05;t=2.428,P<0.05,respectively). The percentage of Th17 producing in CD4 T cell was higher in patients with AMI,but no significant difference was shown in subgroups with or without RA. The level of serum IL-6 was higher in AMI patients combined with RA,and positive correlated with SYNTAX score in AMI patients without RA (r=0.585,P<0.05).ConclusionSerum IL-6 probably is an inflammatory factor which could promote atherosclerosis in AMI patients without RA. Th17 cell is a potential pathogenic marker in process of atherosclerosis in AMI patients with RA.

Acutemyocardialinfarction;RheumatoidArthritis;Autoimmune;Th17;IL-6

R781

A

10.13621/j.1001-5949.2017.11.0968

寧夏科技支撐計(jì)劃資助項(xiàng)目(201526)

寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院心臟中心，寧夏 銀川 750004

黃暉(1973-)，男，碩士學(xué)位，副主任醫(yī)師，主要從事心血管內(nèi)科工作。

賈紹斌，Email:hui8380156@163.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20171109.1542.016.html

2017-06-03責(zé)任編輯李 潔