3種因素對(duì)蘭州百合不定芽誘導(dǎo)的影響

段四喜，徐春蓮，湯王外，畢海林，和桂青，和壽星

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 高山經(jīng)濟(jì)植物研究所，云南 麗江 674100)

3種因素對(duì)蘭州百合不定芽誘導(dǎo)的影響

段四喜，徐春蓮，湯王外，畢海林，和桂青，和壽星*

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 高山經(jīng)濟(jì)植物研究所，云南 麗江 674100)

為建立蘭州百合試管苗規(guī)范化生產(chǎn)技術(shù)體系，以蘭州百合鱗片為外植體，MS為基本培養(yǎng)基，對(duì)外植體消毒時(shí)間、鱗片放置方式，以及初代、繼一代和繼二代激素α-萘乙酸(NAA)和6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)濃度等影響不定芽產(chǎn)生的3個(gè)主要因素進(jìn)行研究。結(jié)果表明:0.1%的氯化汞最佳滅菌時(shí)間12 min，與鱗片內(nèi)側(cè)相比，鱗片外側(cè)小突起、不定芽、小突起+不定芽個(gè)數(shù)也均以12 min消毒處理效果最佳；與鱗片外側(cè)和近軸面向上放置相比，鱗片內(nèi)側(cè)和近軸面向下放置更有利于芽的誘導(dǎo)；最佳誘導(dǎo)和繼一代培養(yǎng)基均為MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，誘導(dǎo)培養(yǎng)30 d左右后不定芽數(shù)達(dá)7.00個(gè)，轉(zhuǎn)綠率和發(fā)芽率分別為80.83%和55.00%；繼一代發(fā)芽率和生葉率最高時(shí)可達(dá)45.02%和78.00%；蘭州百合繼二代培養(yǎng)時(shí)適當(dāng)降低6-BA濃度，不僅不影響組培苗正常的生長(zhǎng)發(fā)育，反而使葉片數(shù)和不定芽數(shù)達(dá)到23.67片和5.67個(gè)，以MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L為適宜培養(yǎng)基。

蘭州百合；不定芽；繼代；NAA；6-BA

蘭州百合(Liliumdavidiivar.unicolor)是百合科(Liliaceae)百合屬(Lilium)多年生球根作物，屬單子葉草本植物，其鱗莖瓣厚、豐潤(rùn)、口感甜美、藥食同源，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1]。目前借助組織培養(yǎng)技術(shù)，采用試管內(nèi)形成鱗莖，在獲得大量幼苗的同時(shí)，還有利于保持親本的優(yōu)良性狀，降低苗木抗病毒的幾率，已成為許多研究者所探索的快速繁殖的方法[2-5]。在蘭州百合組培過(guò)程中外植體滅菌時(shí)間[6-7]、鱗片放置方式[8-9]、激素種類和濃度(尤其是NAA、6-BA)[10-11]等3個(gè)因素是影響蘭州百合組培的關(guān)鍵因素。

截至目前，滅菌時(shí)間對(duì)蘭州百合鱗片影響的研究多傾向于與外植體成活率或污染率有關(guān)[6-7]，鮮有提及與鱗芽誘導(dǎo)的多少有關(guān)；鱗片放置方式對(duì)不定芽多少的影響幾乎沒(méi)有選用任何數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法，局限性較多且缺乏客觀性；在組培過(guò)程中往往將蘭州百合組培分為初代、繼代和生根3個(gè)階段，并對(duì)3個(gè)階段的NAA和6-BA激素濃度進(jìn)行了大量的研究[12-13]。而事實(shí)上，繼代培養(yǎng)通常需要連續(xù)多代的培養(yǎng)，在整個(gè)組培過(guò)程中占據(jù)的比例大、周期長(zhǎng)[14-16]，隨著植物繼代次數(shù)的延長(zhǎng)，植物體內(nèi)源激素、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生化物質(zhì)、染色體等會(huì)發(fā)生變化[16-18]，在這個(gè)動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程中添加在培養(yǎng)基中的激素濃度是否有必要適時(shí)調(diào)整呢？基于此，本試驗(yàn)的目的一是探討初代鱗片滅菌時(shí)間與鱗芽誘導(dǎo)的關(guān)系；二是采用更加科學(xué)合理的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法篩選適宜的鱗片放置方式；三是對(duì)蘭州百合初代和不同繼代次數(shù)間的NAA和6-BA濃度是否需要調(diào)整進(jìn)行研究。旨在找到獲得高質(zhì)量蘭州百合試管苗的培養(yǎng)條件，從而提高蘭州百合再生植株的效率，為蘭州百合組織培養(yǎng)和種質(zhì)資源的保存奠定技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)

于2015年5月開(kāi)始在云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院高山經(jīng)濟(jì)植物研究所組培室進(jìn)行鱗片組織培養(yǎng)。

1.2試驗(yàn)材料

1.2.1 材料 材料為蘭州百合鱗莖，采集于麗江市龍山鎮(zhèn)百合基地。選擇鱗片保持完好、抱合緊密、健壯、無(wú)病斑、色澤光亮、無(wú)機(jī)械損傷、鱗莖盤(pán)無(wú)損壞的蘭州百合作為供試材料。

1.2.2 培養(yǎng)條件 先在4 ℃冰箱中保存30 d，之后采用固體MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中蔗糖30 g/L，瓊脂7 g/L，將pH值調(diào)節(jié)為5.8，根據(jù)試驗(yàn)要求添加不同濃度的NAA和6-BA，121 ℃高壓滅菌25 min,接種后放到培養(yǎng)室中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為(25±2) ℃，日光燈光源，光照強(qiáng)度2000 lx，光照時(shí)間16 h/d。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1 最佳滅菌時(shí)間的篩選 除去內(nèi)外層鱗片，將中層健康的鱗片置于小燒杯中，自來(lái)水流水沖洗干凈后放入超凈工作臺(tái)，用75%的酒精浸泡30 s，無(wú)菌水沖洗4次，再分別用濃度為0.1%的氯化汞溶液滅菌6、9和12 min(前期試驗(yàn)表明，0.1%的氯化汞消毒時(shí)間在6 min以下時(shí)外植體污染率較多高，在12 min以上時(shí)外植體死亡率較多，所以試驗(yàn)采用6、9和12 min處理觀察鱗片滅菌效果)，無(wú)菌水沖洗5～6次，在滅菌濾紙上吸干表面水分，之后用鑷子切成1 cm×1 cm大小，接種于MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.1 mg/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。每瓶接種1個(gè)外植體，每處理均接種30個(gè)外植體，重復(fù)3次。通過(guò)接種后30 d左右統(tǒng)計(jì)不定芽、小突起、不定芽+小突起個(gè)數(shù)確定最佳滅菌時(shí)間。

1.3.2 最佳鱗片放置方式的篩選 在篩選出氯化汞最佳消毒時(shí)間的基礎(chǔ)上，將鱗片分為近軸面向上和近軸面向下2個(gè)處理接種于MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.1 mg/L的培養(yǎng)基。每瓶接種1個(gè)外植體，每處理接種30個(gè)外植體，重復(fù)3次。通過(guò)每隔一段時(shí)間觀察記錄外植體的成活率、轉(zhuǎn)綠率和發(fā)芽率，接種后30 d左右統(tǒng)計(jì)不定芽、小突起、不定芽+小突起個(gè)數(shù)確定最佳的鱗片放置方式。

1.3.3 最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選 在最佳氯化汞消毒時(shí)間和鱗片放置方式的基礎(chǔ)上，放到MS附加不同濃度的NAA和6-BA的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，即放到MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L、MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L、MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.1 mg/L 3個(gè)處理進(jìn)行培養(yǎng)，并分別記為A、B、C等3個(gè)處理，每瓶接種1個(gè)外植體，每處理接種30個(gè)外植體，重復(fù)3次。通過(guò)每隔一段時(shí)間觀察3個(gè)處理，并記錄轉(zhuǎn)綠率和發(fā)芽率，接種后30 d左右統(tǒng)計(jì)不定芽和小突起個(gè)數(shù)，選出最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

1.3.4 最佳繼一代培養(yǎng)基的篩選 從初代培養(yǎng)生長(zhǎng)健壯的蘭州百合試管苗中篩選長(zhǎng)勢(shì)基本一致的幼苗，將其進(jìn)行切割，每瓶接種4個(gè)點(diǎn)，放到MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L、MS+NAA 0.5 mg/L+MS+6-BA 0.5 mg/L和MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.1 mg/L 3個(gè)處理進(jìn)行培養(yǎng)，并分別記為A、B、C，每處理接種30瓶，重復(fù)3次。通過(guò)每隔一段時(shí)間觀察3個(gè)處理，并記錄發(fā)芽率和生葉率篩選出最佳繼一代培養(yǎng)基。

1.3.5 最佳繼二代培養(yǎng)基的篩選 從繼一代培養(yǎng)生長(zhǎng)健壯的蘭州百合試管苗中篩選長(zhǎng)勢(shì)基本一致的幼苗，將其進(jìn)行切割，每瓶接種4個(gè)點(diǎn)，接種到MS培養(yǎng)基中，3個(gè)處理的NAA濃度均為0.1 mg/L，6-BA濃度分別為0.50、0.75和1.00 mg/L，每處理接種30瓶，重復(fù)3次。通過(guò)每隔一段時(shí)間觀察并記錄發(fā)芽率、生葉率、葉片數(shù)和不定芽數(shù)篩選出最適宜的繼二代培養(yǎng)基。

1.3.6 相關(guān)計(jì)算公式 外植體轉(zhuǎn)綠率/%=(轉(zhuǎn)綠個(gè)數(shù)/未污染的外植體總數(shù))×100%

外植體發(fā)芽率/%=(發(fā)芽的個(gè)數(shù)/未污染的外植體總數(shù))×100%

外植體生葉率/%=(長(zhǎng)葉個(gè)數(shù)/未污染的外植體總數(shù))×100%

1.4統(tǒng)計(jì)分析

采用Microsoft Excel 2003和SPSS軟件統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1不同滅菌時(shí)間對(duì)蘭州百合鱗片滅菌效果的影響

由表1可知，在不同消毒時(shí)間內(nèi)，鱗片內(nèi)側(cè)小突起、不定芽和小突起+不定芽個(gè)數(shù)均明顯高于鱗片外側(cè)，說(shuō)明鱗片內(nèi)側(cè)更有利于蘭州百合外植體的誘導(dǎo)。小突起和不定芽比較而言，無(wú)論內(nèi)側(cè)、外側(cè)或整個(gè)外植體，小突起個(gè)數(shù)均明顯高于不定芽。盡管消毒時(shí)間存在差異，但是不定芽個(gè)數(shù)除鱗片內(nèi)側(cè)12 min消毒處理低于6、9 min消毒處理外，小突起以及小突起+不定芽個(gè)數(shù)在鱗片內(nèi)側(cè)和整個(gè)外植體間均無(wú)顯著差異。在鱗片外側(cè)，小突起、不定芽、小突起+不定芽個(gè)數(shù)均以12 min消毒處理效果最佳，與6、9 min消毒處理相比差異顯著，而6、9 min處理間則無(wú)顯著差異。綜合來(lái)看，12 min消毒處理最有利于芽的誘導(dǎo)形成。

表1 消毒時(shí)間對(duì)芽誘導(dǎo)形成的影響 個(gè)

注：同列數(shù)據(jù)中不同小字母表示同一項(xiàng)目差異達(dá)到顯著水平(Plt;0.05)，相同則不顯著(Pgt;0.05)。下同。

2.2鱗片放置方式對(duì)蘭州百合初代鱗片誘導(dǎo)的影響

由表2可知，不同鱗片放置方式的外植體成活率在接種后17、34 d時(shí)差異顯著，在接種后13、27 d時(shí)差異不顯著。各個(gè)階段外植體的成活率除接種后34 d為近軸面向下略高于近軸面向上外，其余均為近軸面向下略低于向上。無(wú)論近軸面向上或者向下放置轉(zhuǎn)綠率和發(fā)芽率無(wú)顯著差異，均以近軸面向上略高于向下。

由表3可知，接種后30 d左右，小突起、不定芽、小突起+不定芽3個(gè)指標(biāo)除鱗片外側(cè)小突起、小突起+不定芽個(gè)數(shù)間有顯著差異為近軸面向上高于向下外，其余指標(biāo)間均無(wú)顯著差異。但是無(wú)論是鱗片內(nèi)側(cè)還是整個(gè)外植體，小突起、不定芽、小突起+不定芽個(gè)數(shù)均以近軸面向上略高于向下，近軸面向上更有利于蘭州百合芽誘導(dǎo)。鱗片內(nèi)側(cè)與外側(cè)比較而言，鱗片外側(cè)僅在近軸面向上有少量小突起，因此鱗片內(nèi)側(cè)更有利于蘭州百合芽誘導(dǎo)。培養(yǎng)30 d左右不定芽數(shù)量明顯增加，不定芽增殖方式為近軸面向上遠(yuǎn)高于向下(圖1)。

表2 放置方式對(duì)誘導(dǎo)芽發(fā)生幾率的影響 %

注：/表示無(wú)相應(yīng)情況發(fā)生。下同。

表3 放置方式對(duì)芽誘導(dǎo)形成的影響 個(gè)

2.3不同激素濃度對(duì)蘭州百合初代鱗片分化的影響

由圖2可知，從接種后6 d開(kāi)始，外植體便開(kāi)始陸續(xù)轉(zhuǎn)綠。在接種后6～16 d的轉(zhuǎn)綠率大小表現(xiàn)為Cgt;Agt;B，16～33 d則表現(xiàn)為Bgt;Cgt;A。接種后9 d時(shí)開(kāi)始芽誘導(dǎo)便陸續(xù)發(fā)生，在接種后6～26 d不定芽誘導(dǎo)率以B處理的最高，在接種30 d后則表現(xiàn)為Cgt;Agt;B。小突起、不定芽、小突起+不定芽個(gè)數(shù)均以A處理的效果最好，分別比B、C處理增加1.85、15.67，4.19、4.67，2.39、8.06倍(表4)。由此可知，蘭州百合初代鱗片分化以MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L為適宜培養(yǎng)基。

1和2分別為近軸面向上和向下誘導(dǎo)30 d左右蘭州百合鱗片的生長(zhǎng)情況。

圖2 激素濃度對(duì)初代苗轉(zhuǎn)綠率和發(fā)芽率的影響

表4 激素濃度對(duì)初代苗芽誘導(dǎo)的影響 個(gè)

2.4不同激素濃度對(duì)蘭州百合繼一代的影響

由圖3可知，在繼代接種10 d時(shí)發(fā)芽率最高，之后便不斷下降，以接種后10～17 d的下降趨勢(shì)最快，17 d以后變化平緩。從接種后10 d開(kāi)始，3個(gè)處理的生葉率便不斷增多，以A處理的生葉率最高，繼一代接種10、17、27 d，A處理的生葉率分別比B和C處理高40.73%、54.6%，26.24%、32.54%和23.61%、13.00%。另外，在接種后20、30 d左右，3個(gè)處理的長(zhǎng)勢(shì)均以A處理最好，B處理次之，C處理較差(圖4)。因此，蘭州百合繼代培養(yǎng)基以MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L為最佳培養(yǎng)基。

2.5不同激素濃度對(duì)蘭州百合繼二代的影響

由圖5可知，在整個(gè)繼二代增殖階段接種后13 d的發(fā)芽率最高，隨著接種后時(shí)間的延長(zhǎng)，3個(gè)處理均呈現(xiàn)發(fā)芽率由多變少，生葉率由少變多的趨勢(shì)，到接種后38 d,株苗生長(zhǎng)狀態(tài)幾乎完全變?yōu)樯~，生葉率高達(dá)100.00%，葉片數(shù)和不定芽數(shù)也隨著不斷增多(表5)。但是數(shù)目卻有一定的差別,其中尤以6-BA 0.50 mg/L處理的效果最佳，葉片數(shù)和不定芽數(shù)也均較多。尤其是在接種后30 d左右，這種現(xiàn)象更為明顯(圖6)。6-BA濃度的減少不僅不影響百合鱗片的增殖擴(kuò)繁，反而在一定程度上增加了葉片數(shù)的和不定芽數(shù)，節(jié)約了成本，增加了經(jīng)濟(jì)效益，而且更有利于蘭州百合的增殖快繁。因此，蘭州百合繼二代增殖培養(yǎng)以MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L為適宜培養(yǎng)基。

3 討論與結(jié)論

植物離體快繁體系建立的首要條件是獲得活性的無(wú)菌材料，其中消毒時(shí)間的選擇具有至關(guān)重要的作用[6-7,19]。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，0.1%氯化汞消毒處理12 min效果最佳，不定芽+小突起個(gè)數(shù)高達(dá)15.67個(gè)。有關(guān)卷丹[8]、毛百合[9]、蘭州百合[20]等的研究結(jié)果表明：鱗片近軸面向上放置更有利于百合鱗片的誘導(dǎo)，這與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。但本試驗(yàn)首次采用差異顯著性統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，更加科學(xué)合理地說(shuō)明鱗片近軸面向上放置更有利于百合鱗片的誘導(dǎo)，不定芽+小突起個(gè)數(shù)高達(dá)14.00個(gè)。

圖3 激素濃度對(duì)繼一代苗發(fā)芽率和生葉率的影響

1、2分別表示接種后20、30 d左右的長(zhǎng)勢(shì)。

圖5 激素濃度對(duì)繼二代苗發(fā)芽率和生葉率的影響

項(xiàng)目6-BA濃度/(mg/L)接種后天數(shù)/d1317233138葉片數(shù)0.5012.67±2.36a14.00±0.94a15.00±1.41a23.33±6.13a23.67±1.89a0.757.67±0.94a10.33±0.47a11.67±0.94a12.00±2.36a19.67±9.42a1.005.67±4.24a8.33±0.94a9.67±2.83a10.67±3.77a16.33±2.83a不定芽數(shù)0.504.00±0.00a3.67±0.00a3.33±0.47a5.00±0.47a5.67±0.94a0.752.67±0.00b3.00±0.47a2.67±0.47a3.00±0.47b4.00±1.41a1.002.67±0.47b2.33±0.47a2.67±0.47a3.33±0.47ab3.00±0.47a

組織培養(yǎng)中內(nèi)源激素的形成速度慢，一般無(wú)法滿足植株生長(zhǎng)需求，因此，植物生長(zhǎng)物質(zhì)的使用是誘導(dǎo)植物分化芽和根的關(guān)鍵因素[21]。培養(yǎng)基中加入不同量的NAA和6-BA，對(duì)外植體不定芽的分化率及分化鱗片數(shù)具有明顯的影響[22]。在蘭州百合組培過(guò)程中，適宜誘導(dǎo)和繼一代培養(yǎng)基均為MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L，誘導(dǎo)培養(yǎng)30 d左右不定芽個(gè)數(shù)高達(dá)7.00個(gè)，龍春林等[23]的研究結(jié)果也表明：誘導(dǎo)培養(yǎng)與增殖培養(yǎng)基可均為MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 2.0 mg/L但是在與本試驗(yàn)產(chǎn)出一致的情況下(不定芽個(gè)數(shù)均為7.00個(gè))，激素濃度卻增加了一倍，反而增加了成本，降低了產(chǎn)投比。本試驗(yàn)初代誘導(dǎo)與胡友軍等[13]所采用的激素濃度相同，但不定芽數(shù)卻增多3.7～7.5倍左右，應(yīng)與胡友軍等[13]用0.1%氯化汞消毒時(shí)間15 min過(guò)多和未篩選最佳鱗片放置方式致使有些不定芽無(wú)法誘導(dǎo)形成有關(guān)。另外，張紅巖等[20]采用MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+GA30.8 mg/L培養(yǎng)基，盡管出芽較多，但激素種類偏多，所用6-BA濃度比本試驗(yàn)還高出1.5倍。本試驗(yàn)盡管在繼一代培養(yǎng)中未統(tǒng)計(jì)不定芽數(shù)，但是發(fā)芽率和生葉率最高時(shí)可達(dá)45.02%和78.00%，且從圖4長(zhǎng)勢(shì)來(lái)看不定芽數(shù)可達(dá)5左右。崔興林等[12]盡管以較低的6-BA濃度，使誘導(dǎo)倍數(shù)達(dá)4.5倍，但是由于未采用數(shù)據(jù)分析方法，研究結(jié)果局限性較多且缺乏客觀性。蘭州百合繼二代培養(yǎng)時(shí)適當(dāng)降低6-BA濃度，不僅不影響組培苗正常的生長(zhǎng)發(fā)育，反而使葉片數(shù)和不定芽數(shù)有所增加，發(fā)芽率、生葉率、葉片數(shù)和不定芽數(shù)可達(dá)44.49%、100%、23.67片和5.67個(gè)，所以蘭州百合繼二代培養(yǎng)以MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L為適宜培養(yǎng)基。因此，上述3種提高不定芽產(chǎn)生的方式甚為合理。但誘導(dǎo)與繼一代培養(yǎng)激素濃度需相同，繼二代6-BA濃度則稍有降低的原因尚需進(jìn)一步進(jìn)行研究。

[1] 王康才.百合栽培新技術(shù)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1999.

[2] Kapoor R, Kumar S, Kanwar J K. Bulblet production from node explant growsinvitroin hybrid lilies[J]. International Journal of Plant Production, 2009, 3(4): 1-6.

[3] 李筱帆,張啟翔.百合的組織培養(yǎng)及植株再生的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(4):1479-1482.

[4] 張懷林.三倍體卷丹的組織培養(yǎng)多倍體誘導(dǎo)研究[D].太谷:山西農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

[5] 殷振芳.百合(Lilium)離體植株再生及超低溫保存研究[D].楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué),2014.

[6] 周春華,尤超,陳凝華.百合組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].北方園藝,2013(14):193-195.

[7]王昱淇.植物組織培養(yǎng)中存在的問(wèn)題及其預(yù)防措施[J].南方農(nóng)業(yè),2014,8(12):134-142.

[8] 潘佑找,林強(qiáng),陳香麗,等.鱗片不同放置方式對(duì)卷丹快速繁殖的影響[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,48(10):2499-2501.

[9] 張艷波.毛百合組織培養(yǎng)與試管鱗莖膨大的研究[D].哈爾濱:東北林業(yè)大學(xué),2013.

[10] 殷振芳.百合(Lilium)離體植株再生及超低溫保存研究[D].楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué),2014.

[11] Bacchetta L, Remotti P C, Bernardini C, et al. Adventitious shoot regeneration from leaf explant and stem nodes ofLilium[J]. Plant Cell Tissue amp; Organ Culture, 2003, 74(1): 37-44.

[12] 崔興林,秦新惠,劉芬,等.蘭州百合高效再生體系的建立[J].中國(guó)蔬菜,2014(6):44-46.

[13] 胡友軍,賈雙雙,周玉麗.蘭州百合鱗莖不定芽誘導(dǎo)及植株再生[J].安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào),2016,30(6):26-31.

[14] Zhang J Z, Wei S L, Sun J M. Bulblet formation and development of Lanzhou lily (Liliumdavidiivar.unicolor) by tissue culture[J]. Guihaia, 2016, 36(3): 297-302.

[15] 沈琛,徐瑾,李秉玲.卷丹不同繼代試管苗超低溫保存效果及組織細(xì)胞學(xué)研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2014,30(16):139-142.

[16] 杜捷,王剛,幸亨泰,等.蘭州百合繼代培養(yǎng)過(guò)程中的染色體變異[J].西北師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2003,39(2):61-65.

[17] 岑舉人,步懷宇,王英娟,等.滇黃芩器官發(fā)生與不同繼代次數(shù)遺傳穩(wěn)定性的RAPD分析[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué),2009,28(2):289-292.

[18] 張慧君,陳勁楓.植物組織培養(yǎng)生理機(jī)制的研究進(jìn)展[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(3):33-35.

[19] 陳麗靜,殷小娟,李俊嵐,等.細(xì)葉百合鱗片誘導(dǎo)與遺傳轉(zhuǎn)化組培體系的建立[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,26(2):718-722.

[20] 張紅巖,周興,莫勇生,等.蘭州百合組織培養(yǎng)及快速繁殖技術(shù)研究[J].廣西科學(xué)院學(xué)報(bào),2015,31(1):49-53.

[21] 張彥妮,邊紅琳.6-BA和NAA對(duì)亞洲百合雜種系后代組培苗鱗片不定芽誘導(dǎo)的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(7):52-53.

[22] 李林軒,凌征柱,李翠,等.琺菲亞組織培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究[J].中草藥,2013,44(10):1334-1337.

[23] 龍春林,程治英,王俐,等.蘭州百合器官離體培養(yǎng)外植體位置效應(yīng)觀察[J].云南植物研究,2004,26(2):221-225.

(責(zé)任編輯：曾小軍)

EffectsofThreeFactorsonInducementofAdventitiousBudsinLanzhouLily(Liliumdavidiivar.unicolor)

DUAN Si-xi, XU Chun-lian, TANG Wang-wai, BI Hai-lin, HE Gui-qing, HE Shou-xing*

(Institute of Alpine Economic Plant, Yunnan Academy of Agricultural Sciences, Lijiang 674100, China)

In order to establish the standardized production technology system of Lanzhou lily (Liliumdavidiivar.unicolor) test-tube plantlets, the author took the scale of Lanzhou lily as the explant, used MS as the basic culture medium, and studied the effects of three factors (explant sterilization time, mode of placing scales, and concentration of NAA and 6-BA) on the inducement of adventitious buds. The results showed that the optimum time of explant sterilization with 0.1% HgCl2was 12 min, and the number of both small protuberances and adventitious buds in the outside of scale was the highest under this condition. Placing scale with downward adaxial side was more advantageous to the inducement of adventitious buds than placing scale with upward adaxial side. The optimum medium for both the inducement and the first subculture of adventitious buds was MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L; after inducement culture for about 30 days, the number of adventitious buds reached 7.00, and the green-turning rate and germination rate were 80.83% and 55.00%, respectively; in the first subculture, the germination rate and leaf-producing rate could reach 45.02% and 78.00%, respectively. The best medium for the second subculture of Lanzhou lily was MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L, and the number of leaves and adventitious buds reached 23.67 and 5.67 separately under this condition.

Lanzhou lily; Adventitious bud; Subculture; NAA; 6-BA

S644.1

A

1001-8581(2017)12-0047-06

2017-08-29

段四喜，女，碩士研究生，主要從事植物組織培養(yǎng)研究。*通訊作者：和壽星。