子宮內(nèi)膜異位癥患者異位及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的表達及其意義

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(浙江省樂清市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，浙江 樂清 325600)

子宮內(nèi)膜異位癥患者異位及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的表達及其意義

何海美，潘曄

(浙江省樂清市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，浙江樂清325600)

目的觀察子宮內(nèi)膜異位癥(EMS)患者異位和在位內(nèi)膜組織中抗雌激素藥物耐藥性基因1(BCAR1)表達，并分析其臨床意義。方法選取2016年2月至2016年12月在浙江省樂清市人民醫(yī)院接受治療的100例EMS患者為研究對象(EMS組)，同時選取同期在浙江省樂清市人民醫(yī)院接受體檢篩查的100例健康成年人作為對照組。觀察兩組內(nèi)膜組織中BCAR1的表達和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、癌抗原125(CA125)水平，比較EMS患者異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的差異，分析子宮內(nèi)膜異位癥患者BCAR1表達與VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相關性。結果EMS組患者組織中的BCAR1陽性表達率為85.00%，明顯高于對照組(χ2=106.676，Plt;0.001)；EMS組患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平分別為228.72±12.35ng/L、46.33±5.96pg/mL、165.82±13.02ng/L、332.46±12.13U/mL，明顯高于對照組(t值分別為-39.764、-41.339、-24.083、-97.792，均Plt;0.001)；EMS患者異位內(nèi)膜中BCAR1陽性表達率為95.0%，明顯高于在位內(nèi)膜中BCAR1陽性表達率(χ2=15.686，Plt;0.001)；子宮內(nèi)膜異位癥患者BCAR1陽性表達率與血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平明顯正相關(r值分別為0.587、0.612、0.542、0.598，均Plt;0.05)。結論EMS患者的異位內(nèi)膜組織中BCAR1陽性表達率較高，且與患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平正相關，可作為臨床監(jiān)測的重要指標。

子宮內(nèi)膜異位癥；雌激素；血管生長因子；炎癥因子；抗雌激素藥物耐藥性基因1

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMS)的病情進展可以導致患者痛經(jīng)癥狀的加劇，并可以促進異位癥病灶對于正常卵巢功能的破壞，導致繼發(fā)性臟器功能的損害。流行病學研究顯示，EMS的發(fā)病率可達(455～566)/10萬人，且在具有盆腔慢性疾病的人群中，其發(fā)病率更高[1-2]。在探討EMS的發(fā)病機制的過程中發(fā)現(xiàn)，細胞生物學相關因子的改變，可以通過影響到EMS患者的異位癥病灶組織中腺體細胞的侵襲、轉移或者分化等生理功能，進而促進患者腺體細胞對于正常組織的浸潤，加劇異位癥病灶的持續(xù)性進展。抗雌激素藥物耐藥性基因1(breast cancer anti-estrogen resistance 1，BCAR1)的高表達，可以通過影響腺體細胞或者間質(zhì)細胞的侵襲能力，進而促進其對于卵巢上皮或者輸卵管上皮組織的浸潤，加劇病情的進展[3-4]。為了進一步揭示BCAR1在EMS患者病情發(fā)生發(fā)展過程中的作用，本次研究選取2016年2月至2016年12月在浙江省樂清市人民醫(yī)院接受治療的EMS患者為研究對象，探討了BCAR1的異常表達及其與患者其他血清學生物因子的表達關系，報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年2月至12月在浙江省樂清市人民醫(yī)院接受治療的EMS患者為研究對象。納入標準：①年齡≥18周歲；②符合子宮內(nèi)膜異位癥的診斷標準；③無其他系統(tǒng)嚴重疾病者。排除標準：①臨床資料不全者；②合并免疫功能障礙者。根據(jù)納入排除標準共選擇EMS患者100例為EMS組，年齡33～65歲，平均48.15±3.21歲。對照組納入標準：年齡≥18周歲，無其他系統(tǒng)嚴重疾病，共100例，年齡34～64歲，平均48.17±3.25歲。兩組的年齡等一般資料比較無差別(Pgt;0.05)，具有可比性。本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審通過，且所有患者均知情同意。

1.2方法

1.2.1檢測方法

所有患者均于入院24h內(nèi)采集空腹靜脈血約5mL并分作兩份，一份自然抗凝后以3 000r/min離心10min，取上清液采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)水平，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司，具體檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作；另一份置于枸櫞酸鈉抗凝管內(nèi)，加入白介素-1β(interleukin-1 beta，IL-1β)、癌抗原125(cancer antigen 125，CA125)檢測試劑盒后，利用膠體金法檢測IL-1β、CA125水平，試劑盒購自上海奧普生物醫(yī)藥有限公司，具體檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進行反復洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5min，加入BCAR1抗體(鼠來源，ABCUM公司)， 37℃ 孵育 2h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標記的二抗抗體(購自abcum公司)，37℃ 孵育 30min，加入磷酸鹽緩沖液進行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產(chǎn)的顯色劑進行顯色，封片，鏡下觀察。

1.2.2評價指標

觀察兩組內(nèi)膜組織中BCAR1的表達和VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平，比較EMS患者異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的差異，分析EMS患者BCAR1表達與VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相關性。BCAR1陽性判斷標準：細胞顆粒著色為微黃色，陽性細胞率分為4級。-：陰性，無陽性著色或著色顆粒細微淺黃，陽性細胞數(shù)lt;10%；+：弱陽性，淺黃色細顆粒，陽性細胞數(shù)10%～30%；++：中度陽性，黃色顆粒較粗，陽性細胞數(shù)31%～60%；+++：強陽性，棕黃色粗大顆粒，陽性細胞數(shù)gt;60%。陽性=弱陽+中度陽性+強陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 11.5軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)和計量資料分別采用例和均數(shù)±標準差表示。VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的比較采用t檢驗進行分析，EMS患者異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的比較采用卡方檢驗進行分析，采用Pearson相關分析法分析EMS患者BCAR1表達與VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相關性，Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組內(nèi)膜組織中BCAR1的表達差異

EMS組患者內(nèi)膜組織中的BCAR1陽性表達率為85.00%，明顯高于對照組(Plt;0.001)，見表1。

2.2兩組VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的比較

EMS組患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平明顯高于對照組(均Plt;0.001)，見表2。

表1 兩組內(nèi)膜組織中BCAR1的表達[n(%)]

表2 兩組VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的比較

2.3 EMS患者異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的比較

EMS患者異位內(nèi)膜組織中BCAR1陽性表達率為95.0%，明顯高于在位內(nèi)膜組織中BCAR1陽性表達率(Plt;0.001)，見表3。

2.4 EMS患者BCAR1表達與VEGF、TNF-α、IL-1β和CA125水平的相關性

EMS患者BCAR1陽性表達率與血清VEGF、TNF-α、IL-1β和CA125水平明顯正相關(均Plt;0.05)，見表4。

2.5兩組患者內(nèi)膜組織染色的比較

如圖1所示，左圖為陰性染色結果，無明顯陽性著色；右圖為陽性染色結果，棕黃色粗大顆粒，陽性細胞數(shù)gt;60%。

表3 EMS患者異位及在位內(nèi)膜組織中BCAR1的比較[n(%)]

表4 EMS患者BCAR1表達與VEGF、TNF-α、IL-1β和CA125水平的相關分析

圖 1 BCAR1在子宮內(nèi)膜中的表達(左：陰性表達；右：陽性表達)

3討論

3.1 EMS的治療預后背景研究

EMS的發(fā)生發(fā)展，可以導致患者多種不良臨床結局的發(fā)生，特別是在具有盆腔慢性疾病病史或者合并有其他卵巢良性或者交界性增生性疾病的患者中，EMS的臨床預后更差。長期的臨床隨訪研究顯示，現(xiàn)階段臨床上EMS的總體治療效果較差，治療后的疾病的病情進展率較高。而通過對于EMS發(fā)病過程中相關生物學機制的研究，一方面可以為EMS的疾病預后評估提供新的實驗室參考指標，同時也可以為揭示臨床上EMS患者的發(fā)病機制提供理論基礎。

3.2 BCAR1能影響多種生理病理機制促進EMS的進展

BCAR1等細胞生物學因子可以通過影響子宮內(nèi)膜腺體或者間質(zhì)細胞的增生或者異常凋亡的過程，加劇細胞的侵襲能力或者轉移風險的增加，促進增殖期細胞對于卵巢或者輸卵管等上皮組織的浸潤，促進疾病的進展[5]；BCAR1是促進微血管形成的重要因素，BCAR1的異常表達的上升，可以在促進新生血管形成或者提高局部異位癥病灶組織細胞的血流供應的同時，加劇異位癥病灶細胞的持續(xù)性進展，導致病變細胞的增殖速率的增加[6]。近年來相關基礎領域的研究也顯示，BCAR1的高表達不僅可以影響雌激素抗體的敏感性或者耐藥性，同時可以通過對于EMS病情組織中的雌激素受體的上調(diào)，進而加劇病灶組織細胞的增殖活性的增強，促進病情的進展[7-9]。已有的相關研究揭示BCAR1的異常表達情況，但缺乏對于BCAR1在異位癥病灶組織或者子宮內(nèi)膜組織中的表達差異性的對比研究。

3.3 BCAR1在EMS患者體內(nèi)的異常表達及其與患者血清學相關指標的關系

本次研究發(fā)現(xiàn)，在EMS患者的異位癥病灶組織中BCAR1陽性率明顯高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義，提示BCAR1可能參與了EMS的病情進展，BCAR1的高表達可以通過影響局部氧化應激損傷或者加劇患者的異位癥病灶組織炎癥損傷等，進而促進EMS患者的病情進展。莊夢斐等[10]、寧麗等[11]通過探討不同臨床分期或者病情嚴重程度不同的 EMS患者的發(fā)病機制，BCAR1的陽性表達率可平均上升25%～66%，且患者的異位癥病灶的侵襲程度越高，卵巢功能的破壞越嚴重，相關BCAR1的陽性表達率越高。血清學相關指標的研究可見， VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125等均呈現(xiàn)出明顯的高表達趨勢，從機制上考慮不同的血清學生物指標的高表達可以影響到下列幾個方面的因素，進而促進EMS患者病情的進展[12-13]：①VEGF、TNF-α等的表達，促進了異位癥病灶組織中新生血管的形成，促進了患者的異位癥腺體細胞對于盆腔內(nèi)臟器或者腹膜上皮細胞的浸潤能力；②IL-1β、CA125等的高表達，能夠影響患者的異位癥病灶組織的線粒體損傷，或者促進腺體細胞的黏附能力的增加，從而增加了其對于基底膜層上皮組織的突破作用。在不同病灶組織中，可以發(fā)現(xiàn)的是，EMS患者異位內(nèi)膜中BCAR1陽性表達率為95.0%，明顯高于在位子宮內(nèi)膜病灶組織中BCAR1的陽性表達率，這主要考慮與異位癥病灶組織中細胞的侵襲能力較強、病灶的浸潤程度較深等有關。最后，本次研究發(fā)現(xiàn)BCAR1陽性表達率與血清學相關生物學因子的表達具有密切的關系，提示BCAR1可能通過影響VEGF等的表達，進而促進患者的病情發(fā)展。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了異位癥病灶組織及在位子宮內(nèi)膜病灶組織中的BCAR1陽性表達差異，這有利于分析異位癥病灶組織的發(fā)病機制。綜上所述，EMS患者的異位內(nèi)膜組織中BCAR1陽性表達率較高，且與患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平正相關，可作為臨床監(jiān)測疾病進展的重要指標。

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[專業(yè)責任編輯：張冠軍]

ExpressionandsignificanceofBCAR1inectopicendometriumandeutopicendometriuminpatientswithendometriosisy

HE Hai-mei, PAN Ye

(DepartmentofObstetricsandGynecology,YueqingMunicipalPeople’sHospitalofZhejiangProvince,ZhejiangQingshi325600,China)

ObjectiveTo investigate the expression of breast cancer anti-estrogen resistance 1 (BCAR1) in ectopic endometrium and eutopic endometrium in patients with endometriosis (EMS) and to analyze its clinical significance.Methods100 EMS patients treated in Yueqing Municipal People’s Hospital of Zhejiang Province from February to December in 2016 were selected as subjects, and healthy adults who underwent physical examination in the hospital were selected as controls. Expression of BCAR1 and levels of vascular endothelial growth factor (VEGF), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β), and cancer antigen 125 (CA125) were observed in two groups. BCAR1was compared between ectopic endometrium and eutopic endometrial in EMS patients, and analysis was conducted on correlation of BCAR1 expression in patients with EMS and levels of VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125.ResultsPositive expression rate of BCAR1 in eutopic endometrium of EMS group was 85.00%, which was significantly higher than that of the control group (χ2=106.676,Plt;0.001). Levels of serum VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125 in EMS group of patients were 228.72±12.35ng/L, 46.33±5.96Pg/ml, 165.82±13.02ng/L, 332.46±12.13U/ml, respectively, which were significantly higher than those in the control group (tvalue was -39.764, -41.339, -24.083 and -97.792, respectively, allPlt;0.001). Positive expression rate of BCAR1 was 95.0% in EMS patients with ectopic endometrium, and it was significantly higher than that in eutopic endometrium (χ2=15.686,Plt;0.001). A significant positive correlation was found between positive expression rate of BCAR1 and serum levels of VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125 (rvalue was 0.587, 0.612, 0.542 and 0.598, respectively, allPlt;0.05).ConclusionPositive expression rate of BCAR1 in ectopic endometrium of EMS patients is relatively high, and it is positively corralted with the serum levels of VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125. So it can be used as an important index for clinical monitoring.

endometriosis (EMS); estrogen; vascular growth factor (VGF); inflammatory factor; breast cancer anti-estrogen resistance 1(BCAR1)

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.11.034

R711.74

A

1673-5293(2017)11-1418-04

2017-05-23

何海美(1980—)，女，主治醫(yī)師，主要從事婦產(chǎn)科臨床工作。

潘 曄，副主任醫(yī)師。