陰道炎性疾病代謝產(chǎn)物差異性比較

慕建寧，馬小紅，白芳利，嚴(yán)維娜，陳廣福，盧占斌，安瑞芳

(1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬西安高新醫(yī)院婦科，陜西 西安 710075；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710061)

陰道炎性疾病代謝產(chǎn)物差異性比較

慕建寧1，馬小紅1，白芳利1，嚴(yán)維娜1，陳廣福1，盧占斌1，安瑞芳2

(1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬西安高新醫(yī)院婦科，陜西 西安 710075；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710061)

目的探討細(xì)菌性陰道病(BV)、外陰陰道假絲酵母菌病(VVC)和細(xì)胞溶解性陰道病(CV)之間陰道代謝物的差異性。方法納入2014年3至10月在西安高新醫(yī)院門診就診的186例女性，其中BV女性50例，VVC女性41例，CV女性30例和健康女性65例；測定陰道分泌物中D-乳酸和L-乳酸、細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(EMMPRIN)和基質(zhì)金屬蛋白酶-8(MMP-8)濃度，并分析其與三種陰道疾病的關(guān)系。結(jié)果四組陰道分泌物L(fēng)-乳酸、D-乳酸、EMMPRIN、MMP-8濃度均有顯著性差異(F值分別為917.059、727.342、133.657、262.906，均Plt;0.05)，BV組陰道分泌物D-乳酸和L-乳酸濃度與對照組和VVC組相比顯著性減少(t值分別為15.624、80.106；26.299、87.663，均Plt;0.05)，VVC組陰道分泌物中L-乳酸濃度與對照組相似(t=1.423，Pgt;0.05)。對照組、BV組和CV組女性陰道分泌物中EMMPRIN濃度相似，對照組和BV組女性陰道分泌物中MMP-8濃度相似(t=1.296，Pgt;0.05)。對照組、BV組、VVC組和CV組陰道分泌物中EMMPRIN和L-乳酸濃度高度相關(guān)(r值分別為0.501、0.629、0.374、0.671，均Plt;0.05)。BV組陰道分泌物中EMMPRIN和D-乳酸濃度呈高度相關(guān)(r=0.311，Plt;0.05)，而對照組、VVC組和CV組陰道分泌物中EMMPRIN和D-乳酸濃度則弱相關(guān)。對照組和VVC組陰道分泌物中EMMPRIN和MMP-8濃度高度相關(guān)(r值分別為0.462、0.519，均Plt;0.001)。結(jié)論BV女性陰道分泌物D-乳酸和L-乳酸分泌不足，而VVC女性的EMMPRIN和MMP-8水平提升，女性在L-乳酸水平提升；這些偏差可能為預(yù)防和治療BV、VVC和CV提供新的手段。

細(xì)菌性陰道??；外陰陰道假絲酵母菌病；細(xì)胞溶解性陰道??；代謝物

細(xì)菌性陰道病(bacterial vaginosis，BV)和外陰陰道假絲酵母菌病(vulvovaginal candidiasis，VVC)是育齡女性常見的外陰陰道障礙疾病[1-2]。BV的特征表現(xiàn)是陰道細(xì)菌微生物群的改變，導(dǎo)致微生態(tài)平衡失調(diào)，引起陰道分泌物異常；VVC是由假絲酵母菌增殖而導(dǎo)致的外陰陰道炎癥，其典型特點是陰道微生物群落不變及陰道pH值保持不變[2]；細(xì)胞溶解性陰道病(cytolytic vaginosis，CV)是由陰道乳酸桿菌過度增殖而導(dǎo)致陰道鱗狀上皮細(xì)胞溶解破裂所引起的陰道疾病。最近關(guān)于陰道微生態(tài)和陰道表皮細(xì)胞相互作用的研究提示可以通過提高陰道內(nèi)代謝產(chǎn)物組成而維持陰道健康[3]。L-乳酸維持陰道正常的酸性環(huán)境以及參與免疫活性反應(yīng)抑制BV相關(guān)性菌體的增殖[4]。L-乳酸和D-乳酸可能參與調(diào)節(jié)陰道表皮細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(extracellular matrix metallo￣proteinase inducer，EMMPRIN)的生成[5]。EMMPRIN間接性參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)乳酸水平和預(yù)防細(xì)胞死亡。EMMPRIN也是基質(zhì)金屬蛋白酶-8(metalloproteinase-8，MMP-8)有效誘導(dǎo)子，而MMP-8可以使細(xì)菌更易進(jìn)入上生殖道。本研究主要通過分析BV、VVC和CV女性陰道D-乳酸、L-乳酸、EMMPRIN和MMP-8濃度特征，并與健康女性相比較，有利于上述疾病新治療方案的制定，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料和方法

1.1研究對象

2014年3至10月在西安高新醫(yī)院門診檢測生殖道感染的絕經(jīng)前性活躍女性，選擇符合條件的女性進(jìn)行分析。研究對象納入和排除標(biāo)準(zhǔn)：非妊娠期或月經(jīng)期女性；當(dāng)前未使用抗生素、抗真菌藥物，糖皮質(zhì)激素或其它任何免疫抑制性藥物及陰道產(chǎn)品等；最后一次性生活gt;24小時。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)納入186例女性：其中BV女性50例，VVC女性41例，CV女性30例和健康女性65例(對照組)。四組女性在年齡、教育年限、妊娠次數(shù)、吸煙史、避孕方式、性伴侶(最后6個月)和每月性生活次數(shù)上無顯著性差異(Pgt;0.05)，見表1。所有研究對象均完成關(guān)于藥物史和人口學(xué)特征調(diào)查問卷。所有研究對象均簽訂知情同意書，本研究同時經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過。

表1 四組女性的基本特征

1.2臨床評估和實驗室分析

無菌棉簽于陰道側(cè)壁取陰道分泌物。參照中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科分會診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。BV診斷標(biāo)準(zhǔn)為陰道分泌物呈灰白色，黏稠狀，呈魚腥味，濕涂片中可檢出線索細(xì)胞，pH值增高；VVC診斷通過檢測女性陰道排泄物中假絲酵母菌的存在，通過顯微鏡檢測和微生物培養(yǎng)結(jié)合革蘭染色分析，臨床癥狀為外陰瘙癢、灼痛，還可伴有尿痛以及性交痛等癥狀，白帶增多及外陰潮紅、水腫等；CV診斷通過顯微鏡觀察上皮細(xì)胞形態(tài)和革蘭染色檢測陰道排泄物，陰道分泌物培養(yǎng)顯示陰道菌落正?；虼罅咳樗峋L而無假絲酵母菌生長以及結(jié)合臨床瘙癢、外陰燒灼癥狀。

D-乳酸和L-乳酸手性異構(gòu)體的測定通過D-乳酸/L-乳酸測定試劑盒(德國拜發(fā)R-Biopharm公司提供)，采用酶學(xué)法測定；EMMPRIN和MMP-8濃度測定采用ELISA檢測試劑盒(美國Ramp;D Systems公司提供)進(jìn)行測定。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1不同健康狀態(tài)女性陰道分泌物中代謝物濃度

四組陰道分泌物L(fēng)-乳酸、D-乳酸、EMMPRIN、MMP-8濃度均有顯著性差異(均Plt;0.05)，BV組陰道分泌物D-乳酸和L-乳酸濃度與對照組和VVC組相比顯著性減少(t值分別為15.624、80.106；26.299、87.663，均Plt;0.05)，VVC組陰道分泌物中L-乳酸濃度與對照組相似(t=1.423，Pgt;0.05)。對照組、BV組和CV組女性陰道分泌物中EMMPRIN濃度相似，對照組和BV組女性陰道分泌物中MMP-8濃度相似(t=1.296，Pgt;0.05)，VVC組顯著性升高，CV組顯著性減少，見表2。

表2 四組女性陰道代謝物的濃度

注：◇表示與對照組和VVC組相比Plt;0.001；△表示與對照組和BV組相比Plt;0.001；□表示與對照組、BV組和VVC組相比Plt;0.001；◆表示與對照組、BV組和CV組相比Plt;0.001。

2.2不同狀態(tài)下女性陰道分泌物各代謝物之間的關(guān)系

對照組、BV組、VVC組和CV組在陰道分泌物中EMMPRIN和L-乳酸濃度高度相關(guān)(r值分別為0.501、0.629、0.374、0.671，均Plt;0.05)。BV組陰道分泌物中EMMPRIN和D-乳酸濃度呈高度相關(guān)(r=0.311，Plt;0.05)而對照組、VVC組和CV組陰道分泌物中EMMPRIN和D-乳酸濃度則弱相關(guān)。對照組和VVC組在陰道分泌物中EMMPRIN和MMP-8濃度高度相關(guān)(r值分別為0.462、0.519，均Plt;0.001)，見表3。

表3 陰道分泌物中代謝產(chǎn)物與臨床診斷的關(guān)系

3討論

3.1 BV、VVC和CV陰道分泌物中代謝物水平

本研究主要分析三種女性常見陰道疾病BV、VVC和CV陰道分泌物中代謝物的濃度，并與健康女性相比較，研究發(fā)現(xiàn)BV女性陰道中D-乳酸和L-乳酸濃度減少，而VVC女性EMMPRIN和MMP-8水平提升，CV女性L-乳酸濃度增加。健康組中陰道L-乳酸和L-乳酸/D-乳酸比與EMMPRIN和MMP-8水平高度相關(guān)。

Witkin等[5]研究無癥狀育齡女性陰道分泌物中D-乳酸、L-乳酸、EMMPRIN和MMP-8之間的關(guān)系，研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)陰道內(nèi)卷曲乳桿菌、加氏乳酸桿菌和詹森乳桿菌占主導(dǎo)時，D-乳酸水平最高，而對于以加德納氏菌或惰性乳桿菌占主導(dǎo)的菌群中D-乳酸幾乎不存在，并且陰道內(nèi)L-乳酸水平也最低；BV的特點是乳酸桿菌缺乏而以加德納氏菌占主導(dǎo)，因此本研究中BV女性陰道分泌物中D-乳酸和L-乳酸水平低于其它組BV女性陰道內(nèi)D-乳酸處于低水平，雖然不能代表所有乳酸產(chǎn)生菌缺乏，但至少說明乳酸產(chǎn)生菌生成乳酸的濃度處于較小水平。L-乳酸的免疫特性及其對BV相關(guān)細(xì)菌的抑制作用，正逐漸被認(rèn)可[5,7]，BV女性L-乳酸濃度減少可能導(dǎo)致BV相關(guān)細(xì)菌增值也包括陰道炎性免疫反應(yīng)降低。因此，額外提供外源性L-乳酸或L-/D-乳酸比，可能使BV女性在恢復(fù)正常陰道菌群和預(yù)防復(fù)發(fā)方面獲益。

3.2 BV、VVC和CV陰道分泌物中代謝物水平差異原因分析

本研究結(jié)果顯示VVC女性陰道EMMPRIN濃度升高。假絲酵母菌達(dá)到適當(dāng)濃度后促使EMMPRIN釋放。假絲酵母菌細(xì)胞表面具有單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(monocarboxylate transporter 1，MCT1)，EMMPRIN可能是必要的共調(diào)節(jié)因子參與調(diào)節(jié)L-乳酸進(jìn)出酵母菌細(xì)胞[8]。VVC女性陰道分泌物相伴MMP-8水平的升高，EMMPRIN可作為MMP-8有效的誘導(dǎo)子，MMP-8水平的升高可促使組織損傷，誘導(dǎo)促炎癥免疫反應(yīng)引起白細(xì)胞大量生成，促進(jìn)假絲酵母菌滲透陰道上皮細(xì)胞和加劇臨床癥狀。因此，進(jìn)一步研究確定陰道EMMPRIN或MMP-8濃度與假絲酵母菌酵母形態(tài)至假菌絲形態(tài)的轉(zhuǎn)變、VVC敏感性或其復(fù)發(fā)的關(guān)系，有助于VVC女性預(yù)防和治療提供新的手段。

CV疾病的特點是乳酸菌的過度增殖導(dǎo)致陰道鱗狀上皮細(xì)胞溶解破裂[9]。本研究中CV女性陰道分泌物中L-乳酸水平升高，其水平可能用于預(yù)測女性CV呈陽性；而D-乳酸水平則無明顯變化。這表明陰道內(nèi)并非產(chǎn)D-乳酸的乳酸桿菌即陰道內(nèi)卷曲乳桿菌、加氏乳酸桿菌和詹森乳桿菌呈現(xiàn)較高濃度。CV女性陰道上皮細(xì)胞溶解的合理性解釋為過度的L-乳酸的生成并未伴隨D-乳酸的增加，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)pH的降低進(jìn)而引起細(xì)胞壞死。有研究也發(fā)現(xiàn)D-乳酸同L-乳酸競爭性結(jié)合MCT1，可以降低L-乳酸與MCT1的結(jié)合，進(jìn)而減少L-乳酸進(jìn)入細(xì)胞[10]。因此，或許可通過外源性的增加D-乳酸而降低L-乳酸進(jìn)入陰道上皮細(xì)胞進(jìn)而減小或阻止酸性介導(dǎo)的細(xì)胞損傷。

綜上所述，內(nèi)源性陰道菌群生成成分D-乳酸和L-乳酸的相對水平，可能在女性生殖道功能障礙的病理生理學(xué)影響比預(yù)期臨床預(yù)防和治療中扮演著更重要的作用。因此，處理陰道內(nèi)乳酸同分異構(gòu)體的濃度或許可作為預(yù)防和治療的女性陰道疾病新型手段。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：楊筱鳳]

Differenceinvaginalmetabolitesamongwomenwithdifferentvaginitis

MU Jian-ning1, MA Xiao-hong1, BAI Fang-li1, YAN Wei-na1, CHEN Guang-fu1, LU Zhan-bin1, AN Rui-fang2

(1.DepartmentofGynecology,Xi’anHi-techHospitalAffiliatedtoMedicalSchoolofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710075,China;2.DepartmentofObstetricsandGynecology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China)

ObjectiveTo investigate the difference in vaginal metabolites among women with bacterial vaginosis (BV), vulvovaginal candidiasis (VVC) and cytolytic vaginosis (CV).MethodsA total of 186 women visiting outpatient department of Xi’an Hi-tech Hospital were enrolled in this study, including 50 women with BV, 41 women with VVC, 30 women with CV and 65 healthy women as controls. Concentrations of D-lactic acid, L-lactic acid, extracellular matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN) and matrix metalloproteinase-8 (MMP-8) in vaginal secretions were detected and their relation with three kinds of vaginal diseases was analyzed.ResultsThere were significant differences in concentrations of L-lactic acid, D-lactic acid, EMMPRIN and MMP-8 in vaginal secretions in 4 groups (Fvalue was 917.059, 727.342, 133.657 and 262.906, respectively, allPlt;0.05). Concentrations of D-lactic acid and L-lactic acid in vaginal secretions in BV group were significantly lower than those in the control group and VVC group (tvalue was 15.624, 80.106, 26.299 and 87.663, respectively, allPlt;0.05). L-lactic acid concentration in vaginal secretions in VVC group was similar to that in the control group (t=1.423,Pgt;0.05). Concentrations of EMMPRIN in vaginal secretions in the control group, BV group and CV group were similar, and concentrations of MMP-8 in vaginal secretions in the control group and BV group were similar (t=1.296,Pgt;0.05). Concentrations of EMMPRIN were highly correlated with L-lactic acid in vaginal secretions in the control group, BV group, VVC group and CV group (rvalue was 0.501, 0.629, 0.374 and 0.671, respectively, allPlt;0.05). Concentrations of EMMPRIN were also closely related with D-lactic acid in vaginal secretions in BV group (r=0.311,Plt;0.05), whereas those were weakly correlated with D-lactic acid in vaginal secretions in the control group, VVC group and CV group. Concentrations of EMMPRIN and MMP-8 in vaginal secretions in the control group and VVC group were highly correlated (rvalue was 0.462 and 0.519, respectively, bothPlt;0.001).ConclusionConcentrations of D-lactic acid and L-lactic acid in vaginal secretions of women with BV are deficient. Levels of EMMPRIN and MMP-8 in women with VVC are elevated, and L-lactic acid level in women with CV is elevated. These deviations may contribute to new methods for prevention and treatment of BV, VVC and CV.

bacterial vaginosis (BV); vulvovaginal candidiasis (VVC); cytolytic vaginosis (CV); metabolite

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.11.018

R711.31

A

1673-5293(2017)11-1371-04

2017-03-06

慕建寧(1977—)，女，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事婦科腫瘤及婦科炎癥研究。

安瑞芳，主任醫(yī)師。