熒光法測(cè)定蘑菇中維生素B2的含量

劉艷紅，努娜，馬曉光

（赤峰學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，內(nèi)蒙古赤峰024000）

熒光法測(cè)定蘑菇中維生素B2的含量

劉艷紅，努娜，馬曉光

（赤峰學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，內(nèi)蒙古赤峰024000）

本文采用熒光法對(duì)三種不同品種的蘑菇里的維生素B2含量進(jìn)行測(cè)定.在最大激發(fā)波長(zhǎng)為423nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為526nm條件下，采用分子熒光法分別測(cè)定了平菇、香菇、杏鮑菇3種蘑菇中的維生素B2含量.結(jié)果表明，杏鮑菇中的維生素B2含量最高，其次是香菇，平菇B2含量最低.同時(shí)研究了經(jīng)陽(yáng)光照射和陰干處理的蘑菇樣品，通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定表明，兩種環(huán)境下處理的蘑菇中的維生素B2含量變化不大.研究可以為人們?cè)谑秤媚⒐椒矫嫣峁I(yíng)養(yǎng)數(shù)據(jù).

熒光法；蘑菇；維生素B2

維生素B2又稱核黃素，在水中溶解性不大，在中性或酸性溶液中加熱是穩(wěn)定的.維生素B2是體內(nèi)黃酶類輔基的組成部分，黃酶在生物氧化還原中發(fā)揮遞氫作用.所以當(dāng)機(jī)體內(nèi)維生素B2不足時(shí)就會(huì)使機(jī)體代謝受阻.臨床癥狀多表現(xiàn)為口、眼和外生殖器部位的炎癥，如口角炎、舌炎、唇炎、眼結(jié)膜炎和陰囊炎等癥狀[1-2].人體不能直接合成維生素B2，加之其屬水溶性維生素，故在人體內(nèi)儲(chǔ)存是很有限的，因此需要每天從外界攝取.

蘑菇是含維生素B2較豐富蔬菜之一.它口感滑嫩，符合當(dāng)代綠色營(yíng)養(yǎng)健康的飲食需求.長(zhǎng)期食用蘑菇不但可以起到降糖、降脂、降膽固醇的作用，而且蘑菇在慢性肝炎、增加白細(xì)胞以及維生素B2缺乏癥等方面具有較好的食療作用.所以研究蘑菇的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值具有重要的意義.

鑒于分子熒光具有測(cè)量簡(jiǎn)便、選擇性好、受雜散光干擾小等優(yōu)點(diǎn).所以作者采用分子熒光法來(lái)測(cè)定蘑菇中維生素B2的含量，以期為人們合理食用蘑菇和進(jìn)一步研究蘑菇提供數(shù)據(jù)參考.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑和材料

原料：香菇，平菇，杏鮑菇皆是本地市場(chǎng)購(gòu)買.主要試劑：核黃素，購(gòu)自西亞試劑.鹽酸，乙酸鈉皆為市售分析純.

1.2 儀器

熒光分析儀（上海棱光技術(shù)有限公司制造F97Pro熒光分光光度計(jì)），熒光分析儀（上海棱光技術(shù)有限公司制造F96熒光分光光度計(jì)），電熱套，分析天平.

1.3 樣品處理

購(gòu)買新鮮蘑菇，除掉其中的雜質(zhì)，將選擇的樣品洗凈，分為兩份，一份為陽(yáng)光照射直接曬干，一份為避光陰干操作.

樣品處理：將曬干的樣品在研缽中研磨成粉末，再分別精確稱取香菇、平菇、杏鮑菇3種樣品2g左右，分別置于250mL的燒杯中，然后加入50mL的0.1mol/L鹽酸溶液，加熱煮沸30min，冷卻至室溫后，緩慢滴加3mL 2.5mol/L乙酸鈉溶液搖勻后，用漏斗過(guò)濾，棄去含雜質(zhì)較多的最初的5mL濾液.將上述得到的濾液轉(zhuǎn)移到100mL的容量瓶中，加水定容至刻度[3-5].

1.4 維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

配制維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0μg/mL，量取維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL分別置于50mL的容量瓶中，加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，配成五個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣，待測(cè).

2 結(jié)果與分析

2.1 激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的確定

將裝有3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.00mL定容至50mL）的石英比色皿放入熒光分光光度計(jì)中，設(shè)置λem＝525nm為發(fā)射波長(zhǎng)，在250—450nm范圍內(nèi)掃描，從得到的激發(fā)光譜中找出最大激發(fā)波長(zhǎng)，在此激發(fā)波長(zhǎng)下，在460—660nm范圍內(nèi)掃描，記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜.從熒光發(fā)射光譜上找出其最大熒光發(fā)射波長(zhǎng)λem見(jiàn)圖1.從圖1可知維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大激發(fā)波長(zhǎng)為423nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為526nm.

最大激發(fā)波長(zhǎng)和最大發(fā)射波長(zhǎng)確定后，將儀器參數(shù)固定為λex=423nm，λem=526nm.對(duì)上述標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行定量測(cè)定，得出一系列熒光強(qiáng)度.以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，溶液的熒光發(fā)射強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，在excel里擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而得出標(biāo)準(zhǔn)方程.在相同條件下測(cè)定未知溶液的熒光強(qiáng)度，并由標(biāo)準(zhǔn)方程確定未知試樣中維生素B2的濃度，從而計(jì)算出待測(cè)樣品溶液中的維生素B2的含量.

圖1 維生素B2的最大激發(fā)波長(zhǎng)（423nm）和最大發(fā)射波長(zhǎng)(526nm)

2.2 熒光光度法測(cè)定各樣品

從表1和圖2中可看出：在此濃度范圍內(nèi)維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與熒光強(qiáng)度線性關(guān)系良好，擬合常數(shù)R2=0.991，可用此法測(cè)定維生素B2的含量.由測(cè)得的蘑菇待測(cè)樣品溶液的熒光強(qiáng)度，帶入維生素B2標(biāo)準(zhǔn)方程y=54.3x+0.23中求得蘑菇待測(cè)樣品溶液的濃度見(jiàn)表3.

表1 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強(qiáng)度及濃度（ug/mL）

圖2 維生素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表3 樣品中維生素B2的含量

通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定可知（表3），香菇的維生素B2含量為1.383mg/100g，平菇中的維生素B2的含量為0.774mg/100g，杏鮑菇中的維生素B2含量為1.507mg/100g，其中杏鮑菇中維生素B2含量最高.從表3的數(shù)據(jù)還可以看出，經(jīng)陽(yáng)光照射與陰干處理后的蘑菇中維生素B2含量變化不大.

3 結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定，蘑菇中香菇的維生素B2含量為1.383mg/100g，平菇中的維生素B2的含量為0.774mg/100g，杏鮑菇中的維生素B2含量為1.507 mg/100g.從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)還可以看出，杏鮑菇中的維生素B2含量最高，而且經(jīng)陽(yáng)光照射與陰干處理后的蘑菇中維生素B2含量變化不大.

〔1〕羅信昌.蘑菇的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[J].食用菌,1980（1）：47.〔2〕陳炳卿.營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1997.47-48.

〔3〕曹忠.熒光光譜分析法用于維生素藥片中核黃素的檢測(cè)[J],食品與機(jī)械.2009,7,20(4).

〔4〕程春英.熒光法測(cè)定藥品中維生素B2含量的綜合型實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)[J].實(shí)驗(yàn)室研究與探索，2014,12,33(12).

〔5〕劉程程.熒光法測(cè)定薺菜中維生素B2的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,42(7).

O656.3

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1673-260X（2017）11-0007-02

2017-08-16