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    三七提取物對(duì)貯藏期梨黑斑病的防治研究

    2017-11-29 08:21:52高小寬梁魁景馬燁煒
    河北果樹 2017年6期
    關(guān)鍵詞:貯藏期黑斑病毒力

    高小寬,梁魁景,馬燁煒,李 露

    三七提取物對(duì)貯藏期梨黑斑病的防治研究

    高小寬,梁魁景,馬燁煒,李 露

    (衡水學(xué)院生命科學(xué)系 河北衡水 053000)

    以貯藏梨為試驗(yàn)材料,研究三七提取物對(duì)梨果實(shí)體內(nèi)損傷接種的影響,從而篩選出三七提取物最佳抑制濃度。結(jié)果表明:體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)結(jié)果看出,各濃度的三七提取物明顯抑制了損傷接種梨黑斑病菌果實(shí)病斑面積的擴(kuò)展,降低損傷接種果實(shí)的發(fā)病率,其中濃度為4000mg/L的抑菌效果最好,抑制率達(dá)到53.63%,毒力最強(qiáng),EC50為 1918.079mg/L。

    三七提取物;貯藏期梨;黑斑病

    本試驗(yàn)選用不同濃度的中藥三七提取物的有效成分,體內(nèi)試驗(yàn)篩選出提取物對(duì)梨黑斑病抑制的最佳濃度,以期為中藥三七提取物防治梨黑斑病提供依據(jù),為新型生物防腐劑的開發(fā)提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料 三七提取物由西安匯森生物科技有限公司提供(表1)。其提取物生產(chǎn)工藝為原料植物經(jīng)粉碎后用70%乙醇提取3遍,液體合并過濾,經(jīng)濃縮、噴粉、干燥、粉碎過篩,成品包裝。

    表1 三七提取物成分和性狀

    供試植物病原菌為梨貯藏期黑斑病,采自衡水舊城村梨園帶病梨果,經(jīng)貯藏15d后取病組織分離得到梨黑斑病菌。

    1.2 方法

    1.2.1 病原菌分離、純化和鑒定 參照方中達(dá)方法[5]。用70%酒精擦拭病果表面,無菌水沖洗干凈后,切取一小塊染病組織,在超凈工作臺(tái)中移到PDA培養(yǎng)基上,于25℃保溫培養(yǎng),待長(zhǎng)出分生孢子后進(jìn)行單孢分離,純化后在PDA培養(yǎng)基上保存待用。各菌株在PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)至菌落直徑接近 2/3培養(yǎng)皿直徑時(shí),用打孔器在菌落邊緣打取直徑5mm的菌餅。

    1.2.2 PDA培養(yǎng)基制備 參照方中達(dá)方法[5]進(jìn)行。首先用天平稱量去皮的馬鈴薯200g,將其切成小方形塊,放入鍋中,加無菌水1000mL,煮沸30min。用紗布濾去馬鈴薯殘?jiān)?,將馬鈴薯濾液放回鍋中,加入瓊脂15~20g,加熱熔化加入葡萄糖20g。待葡萄糖溶解后,加入適量的水以補(bǔ)充加熱過程中損失的水分,定容至1000mL。分裝后,在0.103Mpa,121℃下,高壓蒸氣滅菌20min。

    1.2.3 孢子懸浮液制備 取出預(yù)先培養(yǎng)好的備用病原菌,在無菌條件下,往培養(yǎng)好的菌種培養(yǎng)基上加入含有0.01%Tween80的無菌水10mL,用已消毒的毛筆將互隔交鏈孢孢子從培養(yǎng)皿上輕輕刮下,制成濃度為1x106CFU/mL的孢子懸浮液,懸浮液孢子計(jì)數(shù)采用在10×10倍顯微鏡下每視野30~35個(gè)分生孢子。

    1.2.4 體內(nèi)損傷接種試驗(yàn) 參照曹建康方法[6]并修改。選取大小均一、無病蟲危害的梨果實(shí),自來水洗凈后,70%酒精擦拭梨表面,用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌過的紙吸取殘留在果實(shí)表面水分,再用滅菌鐵釘(直徑3mm)在每個(gè)梨中部等距離刺3mm深的小孔3個(gè),分別用0.4g/L、0.2g/L、0.1g/L、0.05g/L和 0.025g/L五個(gè)濃度梯度的三七提取液浸泡10min,拿出后晾1.5~3h。提前培養(yǎng)好梨黑斑病病菌,用滅過菌的直徑為6mm的打孔器在菌落邊緣鉆取一定量菌餅,將菌餅貼在梨的傷口上,用保鮮膜(PE薄膜)包裹后放在托盤中。在室溫下貯藏,每天在相同時(shí)間用十字交叉法測(cè)量梨果的病斑直徑。計(jì)算果實(shí)表面病斑面積并分析記錄數(shù)據(jù)。每處理10個(gè)果子,重復(fù)3次。 1.3 處理試驗(yàn)數(shù)據(jù) 將三七提取物質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)設(shè)置為橫軸,將抑制率幾率值設(shè)置為縱軸并作圖,得出毒力回歸方程及有效抑制中濃度(EC50)值。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 三七提取物對(duì)貯藏期梨黑斑病的抑制

    2.1.1 對(duì)病斑直徑擴(kuò)展的抑制 各濃度的三七提取物處理與對(duì)照相比均能顯著抑制損傷接種蘋果梨果實(shí)病斑直徑的擴(kuò)展,濃度越高抑制效果越明顯(圖1)。用4000mg/L、2000mg/L、1000mg/L、500mg/L和250mg/L五種濃度處理后果實(shí)的病斑直徑分別為對(duì)照的46.5%,49.6%,50.8%,61.3%,62.5%,且與對(duì)照間差異達(dá)顯著水平。

    圖1 三七提取物對(duì)損傷接種蘋果梨病斑直徑的影響

    2.1.2 體內(nèi)損傷接種的毒力測(cè)定 將試驗(yàn)數(shù)據(jù)輸入Excel表格計(jì)算出提取物的毒力回歸曲線及 EC50值(表2)。三七提取物的EC50為1918.079mg/L。

    表2 三七提取物對(duì)梨黑斑病菌菌絲生長(zhǎng)的毒力值

    2.1.3 體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)的抑菌率 通過每天測(cè)量梨的病斑直徑,得出五種濃度的三七提取物對(duì)體內(nèi)損傷接種果實(shí)的發(fā)病率均有一定的抑制活性,且提取物濃度越高,發(fā)病率越低(表3)。試驗(yàn)結(jié)果表明三七提取物的濃度為4000mg/L的抑制效果最好。

    表3 三七提取物對(duì)梨黑斑病病斑生長(zhǎng)的影響

    3 結(jié)論與討論

    三七提取物對(duì)梨黑斑病的菌落生長(zhǎng)、菌絲伸長(zhǎng)和在體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)中均具有不同程度的抑制效果。在體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)中,4000mg/L的抑菌效果最好,抑制率達(dá)53.63%,毒力最強(qiáng),EC50為1918.079mg/L。

    體內(nèi)損傷接種實(shí)驗(yàn)的結(jié)果不如體外抑菌實(shí)驗(yàn)的結(jié)果明顯,主要原因可能是由于浸泡時(shí)間過短導(dǎo)致三七提取物滲入果實(shí)組織的濃度不夠,也可能是由于用三七提取物浸泡后在進(jìn)行損傷接種的時(shí)間間隔過短,沒能有效激發(fā)果實(shí)的抗性。具體原因有待進(jìn)一步研究。

    [1] 藺經(jīng),楊青松,李曉剛,等.砂梨品種對(duì)黑斑病的抗性鑒定和評(píng)價(jià)[J].金陵科技學(xué)院學(xué)報(bào),2006,22(2):80~85.

    [2] 高潔,張楠楠,韓彥琪,等.三七抗增殖作用的有效成分篩選及機(jī)制研究[J].中草藥,2014,45(6):801~806.

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    S661.2

    A

    10.19440/j.cnki.1006-9402.2017.06.004

    2017-10-11

    河北省高等學(xué)??茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):QN2016329)

    郵箱:zwbh201011@163.com

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