2017年上半年我國(guó)部分地區(qū)飼料及飼料原料中霉菌毒素的污染狀況分析

劉鳳芝，李 鋒，王永麗

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院//山東省高校食品加工技術(shù)與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 泰安 271018)

2017年上半年我國(guó)部分地區(qū)飼料及飼料原料中霉菌毒素的污染狀況分析

劉鳳芝，李 鋒，王永麗

(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院//山東省高校食品加工技術(shù)與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 泰安 271018)

應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法結(jié)合高效液相色譜對(duì)我國(guó)部分地區(qū)飼料及原料中黃曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)3種霉菌毒素的含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明：356份樣品中AFB1、ZEN和DON檢出率分別是87.8%、95.0%和98.3%，平均含量分別為11.2、689.0和1 855.2 μg/kg，說明我國(guó)部分地區(qū)飼料及飼料原料霉菌毒素污染比較普遍。玉米、玉米副產(chǎn)物、配合飼料和粕類中ZEN和DON污染較嚴(yán)重，AFB1污染主要存在于粕類中，青貯料及發(fā)酵料中3種霉菌毒素的污染程度相對(duì)較輕，但污染范圍較廣，建議飼料生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)飼料和飼料原料的品控管理。

黃曲霉毒素B1；玉米赤霉烯酮；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇；飼料；霉菌毒素

霉菌毒素是霉菌的次生代謝產(chǎn)物，霉菌在適宜的條件下可污染各種飼料及糧食，并產(chǎn)生多種霉菌毒素沉積于糧食與飼料中[1]。目前已有400多種霉菌的次生代謝產(chǎn)物被確認(rèn)其對(duì)人體健康有害，其中黃曲霉毒素B1(AFB1)、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)被認(rèn)為是對(duì)人體健康影響最大的幾種霉菌毒素[2]。霉菌毒素可通過飼料進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體，引起肝腎和腸胃損傷，甚至對(duì)細(xì)胞造成DNA損傷和氧化損傷[3]。黃曲霉毒素B1的毒性最強(qiáng)，可引起胃腸、肝腎損傷，致突變、致癌和免疫抑制等。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇是在黃曲霉毒素之后污染最嚴(yán)重的霉菌毒素。Swamy等[4]研究發(fā)現(xiàn)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇能引起豬食欲減退，破壞肝臟、腎臟等解毒器官，抑制畜禽生長(zhǎng)，降低機(jī)體抵抗力。玉米赤霉烯酮可對(duì)動(dòng)物造成免疫毒性，誘導(dǎo)免疫細(xì)胞的凋亡，抑制免疫機(jī)能[5]。

本研究收集了2017年上半年我國(guó)主要畜牧生產(chǎn)省份飼料和養(yǎng)殖企業(yè)的飼料及飼料原料樣品356份，使用酶聯(lián)免疫法(ELISA)分析了樣品中黃曲霉毒素B1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的含量。研究結(jié)果為了解我國(guó)部分地區(qū)霉菌毒素在飼料及飼料原料中的污染狀況提供依據(jù)，同時(shí)為飼料及糧食生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行自管自控提供參考。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜，裝配ZORBAX Eclipse Plus C18柱(4.6 mm×100 mm×5 μm)，美國(guó)Agilent公司；毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液含ZEN(25 μg/ml)、AFB1(25 μg/ml)和DON(100 μg/ml)，購于美國(guó)Sigma公司；甲醇、乙腈(色譜純)，購于德國(guó)Merck公司；SpectraMax M2酶標(biāo)儀，美國(guó)Molecular Devices公司。

1.2樣品采集

2017-01-06，檢測(cè)分析中心共采集山東、江蘇、遼寧、內(nèi)蒙古、江西、河南、安徽、四川、河北等地區(qū)的樣品356份，見表1，其中玉米60份、玉米副產(chǎn)物65份、小麥及其副產(chǎn)物17份、配合飼料99份、餅粕類飼料24份、青貯料及其發(fā)酵料42份和其他飼料原料49份。采樣方法嚴(yán)格按照GB/T 14699.1-2005標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，每份樣品量不少于1 kg，樣品研磨后采用四分法進(jìn)行次分樣、毒素提取。

1.3霉菌毒素的檢測(cè)

樣品研磨后采用四分法進(jìn)行次分樣，稱取樣品5 g，置于100 ml離心管中，加入提取液(乙腈∶水=85∶15)50 ml，劇烈震蕩2 min后置于搖床2 h。吸取上層提取液過定量濾紙過濾，濾液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，待測(cè)。首先使用羅馬公司(ROMER)的酶聯(lián)免疫分析試劑盒對(duì)樣品中的霉菌毒素含量進(jìn)行初篩，各霉菌毒素的檢測(cè)限分別為黃曲霉毒素B12 μg/kg，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇200 μg/kg，玉米赤霉烯酮20 μg/kg。初篩結(jié)果超過國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)80%以上的樣品用高效液相色譜法進(jìn)一步檢測(cè)。

表1 檢測(cè)樣品的種類及數(shù)量分布

液相色譜檢測(cè)條件為：流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為1%蟻酸醋酸銨溶液；柱溫30℃，流速1 ml/min，進(jìn)樣量20 μl；梯度洗脫程序：A相起始為20%，保持1.5 min，然后在8 min內(nèi)升至80%，保持1.5 min，在0.1 min內(nèi)降至20%，保持2 min。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行處理，統(tǒng)計(jì)樣品的陽性檢出數(shù)，計(jì)算陽性樣品的檢出率和霉菌毒素濃度的平均值，參考飼料霉菌毒素的最高限量標(biāo)準(zhǔn)(GB 13078-2001，GB 13078.3-2007，GB 13078.2-2006)計(jì)算霉菌毒素的超標(biāo)率。

1.5限量標(biāo)準(zhǔn)及檢測(cè)方法

霉菌毒素的最高限量標(biāo)準(zhǔn)、檢測(cè)方法及檢出限,見表2。

表2 飼料中各種霉菌毒素的檢出限和檢測(cè)方法

注：部分飼料原料沒有霉菌毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的，參照上述標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

2 結(jié)果與分析

2.1樣品總體霉菌毒素污染情況

飼料及飼料原料中的霉菌毒素污染非常普遍，且存在多種霉菌毒素共存的現(xiàn)象。樣品霉菌毒素的總體檢測(cè)情況，見表3。黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇檢出率分別是87.8%、95.0%和98.3%，表明這3種霉菌毒素在當(dāng)前飼料及原料中的污染很普遍。黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇樣品平均值分別為11.2、689.0和1 855.2 μg/kg，參照國(guó)家規(guī)定的飼料衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)，玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇平均值都高于國(guó)家規(guī)定的飼料衛(wèi)生限量標(biāo)準(zhǔn)，但脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染最嚴(yán)重。由此可見，2017年樣品中玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇總體來說呈現(xiàn)一個(gè)污染面廣、污染程度高的狀態(tài)；黃曲霉毒素B1超標(biāo)率僅為2.4%，控制情況良好。

表3 樣品總體霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

2.2玉米樣品霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

從表4可以看出，玉米樣品中黃曲霉毒素B1污染較輕，超標(biāo)率為0，平均值為3.0 μg/kg，未超過飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)；脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染最嚴(yán)重，超標(biāo)率達(dá)70.6%，在所有樣品中超標(biāo)率僅次于玉米副產(chǎn)物，平均值為1 696.5 μg/kg，超過飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(1 000 μg/kg)；玉米赤霉烯酮檢出率為100%，平均值535.9 μg/kg，陽性平均值超過國(guó)家飼料衛(wèi)生相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)(500 μg/kg)，污染范圍廣，水平高。

表4 玉米樣品霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

2.3玉米副產(chǎn)物樣品霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

由表5可以看出，玉米副產(chǎn)物中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇在所有樣品中超標(biāo)率最高，達(dá)81.3%，最高值為26 401.8 μg/kg，為飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的26.4倍，平均值為3 046.5 μg/kg，為飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的3倍；玉米赤霉烯酮超標(biāo)率高達(dá)43.1%，僅次于配合飼料，最高值為5 239.4 μg/kg，是飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的10倍，平均值為1 395.6 μg/kg，為飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的2倍；黃曲霉毒素污染較輕，超標(biāo)率為4.8%，平均值為13.0 μg/kg，沒有超過飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量值。三種霉菌毒素檢出率都超過95%，污染面廣。

2.4小麥及其副產(chǎn)物樣品霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

小麥及其副產(chǎn)物的霉菌毒素污染情況，見表6。小麥及其副產(chǎn)物黃曲霉毒素B1的超標(biāo)率為6.7%，玉米赤霉烯酮未超標(biāo)，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇超標(biāo)率為70.6%，和玉米樣品中該毒素的超標(biāo)率相同，僅次于玉米副產(chǎn)物，污染較嚴(yán)重。小麥及其副產(chǎn)物脫氧雪腐鐮刀菌烯醇最高值為8 603.4 μg/kg，為飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的8.6倍，平均值為2 469.8 μg/kg，為飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的2.4倍，黃曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的平均值和最高值均較低，遠(yuǎn)低于我國(guó)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量。

表5 玉米副產(chǎn)物樣品霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

表6 小麥及其副產(chǎn)物霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

2.5配合飼料霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

配合飼料霉菌毒素污染情況,見表7。配合飼料玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染較黃曲霉毒素B1嚴(yán)重，特別是玉米赤霉烯酮在所有樣品中超標(biāo)率最高，達(dá)到47.7%，平均值為624.0 μg/kg，超過國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(500 μg/kg)。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇超標(biāo)率為46.7%，最高值達(dá)12 100.0 μg/kg，為國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(1 000 μg/kg)的12.1倍。對(duì)于配合飼料來說，要重點(diǎn)監(jiān)控脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的污染情況。

表7 配合料霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

2.6粕類霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

粕類飼料霉菌毒素污染情況,見表8。粕類中黃曲霉毒素B1超標(biāo)率為34.8%，在所有樣品中黃曲霉毒素污染最嚴(yán)重，最高值為180.6 μg/kg，為飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的9倍，平均值為47.6 μg/kg，為飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的2.7倍。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇超標(biāo)率為21.1%，相對(duì)其他樣品脫氧雪腐鐮刀菌烯醇較低，但最高值為25 800.0 μg/kg，為飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的25.8倍，平均值為3 912.7 μg/kg，約為我國(guó)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定最高限量的4倍；玉米赤霉烯酮最高值為3 238.2 μg/kg，為飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量的6倍，平均值為652.7 μg/kg，超過飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量值。

表8 粕類霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

2.7青貯料及發(fā)酵料霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

從表9可以看出，青貯料及發(fā)酵料三種霉菌毒素污染均較輕。黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇超標(biāo)率分別為0、2.8%和7.7%，相對(duì)于其它樣品值均較低，特別是黃曲霉毒素最高值為10.4 μg/kg，未超過飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量值；黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇平均值分別為3.7、120.2和460.2 μg/kg，均未超過我國(guó)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定最高限量值。

表9 青貯料及發(fā)酵料霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

2.8其他飼料原料霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

從表10可以看出，其他飼料原料黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇超標(biāo)率分別為15.2%、30.8%和38.2%，陽性平均值分別為16.7、668.5和1 222.5 μg/kg，均超過飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定限量值；其中玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的檢出率分別為97.4%和100%，可見糖渣粉和檸檬酸渣污染范圍廣且較嚴(yán)重。

表10 其他飼料原料霉菌毒素檢測(cè)結(jié)果

3 討論

本次試驗(yàn)共檢測(cè)了來自我國(guó)9個(gè)省市地區(qū)的356份飼料及飼料原料，其中污染較為嚴(yán)重的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，超標(biāo)率為51.8%，其次是玉米赤霉烯酮，超標(biāo)率為33.2%，黃曲霉毒素B1污染較輕，這與朱風(fēng)華2014年的檢測(cè)結(jié)果基本一致[6]。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇是近年來我國(guó)飼料及飼料原料中出現(xiàn)頻率最高的霉菌毒素，應(yīng)引起飼料企業(yè)的足夠重視[7]。陽性平均值反映了霉菌毒素污染的水平和引起危害的大小。粕類黃曲霉毒素超標(biāo)最嚴(yán)重，玉米和青貯料及發(fā)酵料黃曲霉毒素污染最輕；玉米赤霉烯酮在配合飼料中污染最嚴(yán)重，玉米副產(chǎn)物次之，小麥及副產(chǎn)物污染最輕；玉米副產(chǎn)物中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染最嚴(yán)重，玉米和小麥及副產(chǎn)物污染較重，粕類和青貯料及發(fā)酵料污染最輕?？梢姡?017年上半年樣品中玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇總體來說呈現(xiàn)一個(gè)污染面廣、污染程度高的狀態(tài)；黃曲霉毒素B1超標(biāo)率僅為2.4%，控制情況良好。

玉米及玉米副產(chǎn)物在畜禽飼料中占很大比例，玉米從田間收割后經(jīng)過干燥、貯存和運(yùn)輸?shù)戎T多環(huán)節(jié)才能進(jìn)入飼料加工企業(yè)，后續(xù)儲(chǔ)藏及銷售環(huán)節(jié)也會(huì)不同程度的累積脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和黃曲霉毒素。因此，嚴(yán)控飼料原料和合理儲(chǔ)藏是防控霉菌毒素污染的重要手段。玉米及副產(chǎn)物樣品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染最嚴(yán)重，超標(biāo)率分別達(dá)70.6%和81.3%，在所有樣品中超標(biāo)率最高。這與陳甫報(bào)道的我國(guó)肉雞全價(jià)料及原料中霉菌毒素的污染情況基本一致[8]。與玉米及副產(chǎn)物飼料相比，青貯料中黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇超標(biāo)率分別為0、2.8%和7.7%，平均值分別為3.7、120.2和460.2 μg/kg，均未超過我國(guó)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定最高限量值。原因可能是玉米秸稈在青貯的過程中會(huì)產(chǎn)生有機(jī)酸，降低飼料pH值，抑制了產(chǎn)毒素霉菌的生長(zhǎng)[9]。

2017年上半年飼料及飼料原料霉菌毒素污染率仍處于較高水平，飼料中霉菌毒素均呈現(xiàn)高陽性率，玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇平均值均超過國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)，與2016年相比[10]，2017年上半年霉菌毒素整體污染水平較高。飼料是由各種原料加工混合而成，與飼料的儲(chǔ)藏方式、溫度及濕度等因素有關(guān)。與單一飼料原料相比，其在加工及運(yùn)輸中極易造成霉菌生長(zhǎng)繁殖，使得霉菌毒素污染明顯高于單一飼料原料[11]。

從2017年我國(guó)部分地區(qū)飼料普查結(jié)果來看，霉菌毒素防控重點(diǎn)是脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮，而黃曲霉毒素B1風(fēng)險(xiǎn)比較低。2017年黃曲霉毒素B1的污染程度比玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇低；玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的陽性檢出率較高，脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染最嚴(yán)重。所有樣品中，玉米副產(chǎn)物的霉菌毒素污染一直很嚴(yán)重，特別是玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇在這類原料中含量很高；玉米和小麥及小麥副產(chǎn)物脫氧雪腐鐮刀菌烯醇污染嚴(yán)重。配合飼料污染玉米赤霉烯酮和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇較嚴(yán)重，可能是因?yàn)榕浜巷暳嫌衩赘碑a(chǎn)物(如玉米蛋白粉、玉米胚粕等)很容易受到霉菌毒素的嚴(yán)重污染[12]。建議慎用玉米及玉米副產(chǎn)物原料，或者降低其在配合飼料中的比例。加強(qiáng)對(duì)飼料原料的選擇及飼料的儲(chǔ)存方式、溫度和濕度等因素良好的控制，定期對(duì)飼料及原料進(jìn)行檢測(cè)并進(jìn)行脫酶處理，通過加入復(fù)合型霉菌毒素吸附劑和防霉劑來降低霉菌毒素的危害。加強(qiáng)飼料企業(yè)品控及儲(chǔ)藏管理，減少霉菌毒素污染對(duì)飼料加工企業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失，以提高養(yǎng)殖業(yè)的安全性。

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(責(zé)任編輯：舒蓮梅)

Investigationofmycotoxinscontaminationinfeedsandfeedingredientsinthefirsthalfof2017insomepartsofChina

LIU Feng-zhi, LI Feng, WANG Yong-li

(College of Food Science and Engineering, Shandong Agricultural University, Key Laboratory of Food Processing Technology and Quality Control in Shandong Province, Tai'an 271018, China)

Three kinds of mycotoxins (aflatoxins B1, zearalenone, deoxynivalenol) were determined using enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method and high performance liquid chromatography (HPLC). The results showed that the positive rates of aflatoxins B1(AFB1), zearalenone (ZEN) and deoxynivalenol (DON) in 356 feeds and feedstuffs were 87.8%, 95.0% and 98.3%, respectively. Their average contents were 11.2, 689.0 and 1 855.2 μg/kg, respectively, suggesting that mycotoxin contamination of feed and feed ingredients were serious in some regions of China. ZEN and DON contaminations in maize and by-products, feed and meal were serious, while AFB1contamination was more serious in meal, and three kinds of mycotoxins contamination in silage and fermented feed were not serious, but had a wide range of pollution. These results indicated that the feed production enterprises should strengthen the management of feedstuffs and feed-products.

aflatoxin B1; zearalenone; deoxynivalenol; feed; mycotoxins

2017-08-04；

2017-10-08

山東省高等學(xué)?？萍加?jì)劃項(xiàng)目(J16LE18)。

劉鳳芝(1982-)，女，博士研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)。

王永麗(1982-)，女，講師，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)。

10.7633/j.issn.1003-6202.2017.11.011

S816.17

A

1003-6202(2017)11-0046-05