健脾清化散瘀飲對(duì)脾虛濕熱血瘀型隆起糜爛性胃炎患者EGF、bFGF、Ki67表達(dá)的影響

方文怡 ，高尤亮 ，毛欣欣 ，柯 曉 ，王文榮 ，胡光宏

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建 福州350003；3.莆田市第一醫(yī)院，福建 莆田 351100）

健脾清化散瘀飲對(duì)脾虛濕熱血瘀型隆起糜爛性胃炎患者EGF、bFGF、Ki67表達(dá)的影響

方文怡1，2，高尤亮2，毛欣欣3，柯 曉2，王文榮2，胡光宏2

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建 福州 350122；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建 福州350003；3.莆田市第一醫(yī)院，福建 莆田 351100）

目的 觀察健脾清化散瘀飲治療脾虛濕熱血瘀型隆起糜爛性胃炎（REG）的臨床療效，并探討其可能作用機(jī)制。 方法 選取脾虛濕熱血瘀型REG患者32例做為REG組，健康志愿者20例做為正常組，正常組不予干預(yù)，REG組予健脾清化散瘀飲口服治療，療程為3個(gè)月，觀察REG組的臨床療效，并比較正常組及REG組治療前后EGF、bFGF、Ki67表達(dá)的變化。 結(jié)果 中醫(yī)臨床證候、胃鏡、病理療效總有效率分別為93.75%、78.14%、84.375%。與正常組比較，REG組治療前胃黏膜EGF、bFGF、Ki67表達(dá)明顯提高（P＜0.01，P＜0.05）；REG組治療后胃黏膜EGF、bFGF、Ki67表達(dá)較與治療前明顯下調(diào)（P＜0.01，P＜0.05）。 結(jié)論 健脾清化散瘀飲治療脾虛濕熱血瘀型REG有效，其作用機(jī)制可能與降低Ki67、bFGF、EGF表達(dá)有關(guān)。

隆起糜爛性胃炎；健脾清化散瘀飲；脾虛濕熱血瘀證；EGF；bFGF；Ki67

隆起糜爛性胃炎（raised erosive gastritis，REG）是一種具有特征形態(tài)及病理變化的特殊類(lèi)型的胃炎，第十屆世界胃腸病學(xué)大會(huì)將其列為具有高度癌變傾向的疾病之一［1-2］。REG是一類(lèi)以細(xì)胞增殖異常為特征的增殖性疾病，具有癌變傾向。Ki67是公認(rèn)的全面反映細(xì)胞群體增殖活性的可靠且客觀的指標(biāo)［3］。此外近年研究表明，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor，EGF）可顯著刺激上皮細(xì)胞的增殖，兩者表達(dá)失衡可影響胃黏膜修復(fù)功能的表達(dá)，促進(jìn)REG的發(fā)生和發(fā)展［4-5］。前期研究發(fā)現(xiàn)REG以脾虛濕熱血瘀證多見(jiàn)［6］，且經(jīng)驗(yàn)方健脾清化散瘀飲治療本病較單純西藥組更有優(yōu)勢(shì)［7］，因此本研究擬進(jìn)一步探討健脾清化散瘀飲治療REG的療效作用機(jī)制，通過(guò)觀察中醫(yī)證候積分、胃鏡、病理治療前后的變化，以及對(duì)胃黏膜EGF、bFGF、Ki67表達(dá)的影響，探討健脾清化散瘀飲治療REG的可能的作用機(jī)制，為中藥治療REG的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 鏡下REG診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《全國(guó)慢性胃炎共識(shí)意見(jiàn)（2012，上海）》［8］制訂：胃鏡下單個(gè)或多個(gè)疣狀、膨大皺襞狀或丘疹樣隆起，最大徑5～10 mm，頂端可見(jiàn)黏膜缺損或臍樣凹陷，中央有糜爛。

1.2 中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn) 由于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)并無(wú)脾虛濕熱血瘀證的中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)，因此課題組在福建省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)消化系統(tǒng)疾病專(zhuān)業(yè)委員會(huì)、福建中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病學(xué)分會(huì)的指導(dǎo)下，并與全國(guó)名老中醫(yī)楊春波教授共同討論，擬定了REG脾虛濕熱血瘀證的診斷標(biāo)準(zhǔn)。主癥：① 胃脘部痞脹或疼痛；② 舌質(zhì)紫暗或暗紅，有瘀斑或瘀點(diǎn)，苔白膩微黃或黃膩或黃膩干；③ 餐后及飲食不慎后癥狀易發(fā)作或加重。次癥：① 精神倦怠；② 胃脘部灼熱；③ 胃脘痛日久不愈；④ 口苦口臭；⑤ 不思飲食。胃鏡象：胃鏡下單個(gè)或多個(gè)疣狀、膨大皺襞狀或丘疹樣隆起，最大徑5～10 mm，頂端可見(jiàn)黏膜缺損或臍樣凹陷，中央有糜爛［8］。證型確定：具備主證3項(xiàng)加次證1項(xiàng)并結(jié)合胃鏡象。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) ① 治療組符合西醫(yī)診斷及中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)；②正常組無(wú)上消化道不適且胃鏡鏡下胃黏膜正常，Hp陰性者；③ 年齡18～60歲；④ 同意加入本研究并簽署知情同意書(shū)。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) ① 合并腦血管、心血管、肝、腎、肺和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病者；② 伴有胃潰瘍或十二指腸潰瘍患者；③ 哺乳期或妊娠婦女、精神病患者；④ 不愿配合檢查、治療及失訪患者，未按規(guī)定服用藥物，無(wú)法判斷臨床療效者。

1.5 一般資料 選取我院2013年1月—2015年12月脾虛濕熱血瘀型REG患者32例做為REG組，同時(shí)選取健康志愿者20例做為正常組。2組在性別、年齡上比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

表1 2組一般資料比較（x±s）

2 治療方法

2.1 REG組 予經(jīng)驗(yàn)方健脾清化散瘀飲口服治療，藥物組成：黨參 15 g，白術(shù) 9 g，茯苓 15 g，茵陳9 g，黃連 3 g，半夏 9 g，陳皮 9 g，扁豆 15 g、厚樸9 g，砂仁 6 g，莪術(shù) 9 g，鱉甲 18 g，丹參 15 g，炙甘草3 g，本院藥劑科煎藥機(jī)代煎，每次1袋，每袋200 mL，早晚各服1次，療程為3個(gè)月。

2.2 病理學(xué)檢查 正常組于胃竇部鉗取胃黏膜組織3塊。REG組胃鏡下觀察胃竇有隆起病變部位處取胃黏膜組織3塊，首次活檢處鏡下進(jìn)行拍照留底。于中藥口服治療后，胃鏡下隆起未消失者，于原部位鉗取胃黏膜組織3塊；若隆起消失者，盡量于原部位鉗取胃黏膜組織3塊。所取組織經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋常規(guī)厚度切片，HE染色后置于顯微鏡下觀察。病理診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《中國(guó)慢性胃炎共識(shí)意見(jiàn)（2012 年，上海）》［8］。

2.3 觀察指標(biāo) 采用MaxVisionTM／AP免疫組化法染色測(cè)定EGF、bFGF、Ki67。兔抗人bFGF單克隆抗體（工作效價(jià)1∶50）、兔抗人EGF單克隆抗體（工作效價(jià)1∶50）購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，Ki67單克隆抗體購(gòu)自邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，MaxVisionTM／AP購(gòu)自邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。按試劑說(shuō)明書(shū)步驟操作，實(shí)驗(yàn)均設(shè)陰性及陽(yáng)性對(duì)照。EGF、bFGF陽(yáng)性表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，Ki67陽(yáng)性表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。染色結(jié)果在相同條件下進(jìn)行拍照，圖片進(jìn)行計(jì)算機(jī)圖像分析測(cè)累積光密度（IOD）、Ki67計(jì)數(shù)。

2.4 療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

2.4.1 證候療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 參照《慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見(jiàn)》［9］擬定，主要觀察臨床癥狀（主癥、次癥）和體征的變化并根據(jù)癥候量化表記錄、評(píng)分，所有癥狀均分為無(wú)、輕、中、重4級(jí)，主癥分別記 0、2、4、6 分，次癥分別記 0、l、2、3 分。 ① 臨床痊愈：主要癥狀、體征消失或基本消失，療效指數(shù)≥95%；② 顯效：主要癥狀、體征明顯改善，70%≤療效指數(shù)＜95%；③ 有效：主要癥狀、體征明顯好轉(zhuǎn)，30%≤療效指數(shù)＜70%；④ 無(wú)效：主要癥狀、體征無(wú)明顯改善，甚或加重，療效指數(shù)＜30%。

療效指數(shù)＝［（治療前積分－治療后積分）／治療前積分］×100%；

2.4.2 胃鏡及病理療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 參照《慢性胃炎的中西醫(yī)結(jié)合診療共識(shí)意見(jiàn)》［9］擬定，① 治愈：胃鏡下隆起糜爛較治療前消失，慢性炎癥好轉(zhuǎn)達(dá)輕度，腺體萎縮、腸化生和異型增生消失；② 顯效：胃鏡下隆起糜爛較治療前減少≥2／3，慢性炎癥好轉(zhuǎn)，腺體萎縮、腸化生和異型增生明顯減輕；③ 有效：胃鏡下隆起糜爛較治療前減少≥1／3～2／3，炎癥有所減輕，腺體萎縮、腸化生和異型增生減輕；④ 無(wú)效：胃鏡下隆起糜爛較治療前減少＜1／3或增多，病理所見(jiàn)無(wú)好轉(zhuǎn)者。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的兩組比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，多組比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

3 結(jié) 果

3.1 REG組證候療效、胃鏡療效、病理療效情況見(jiàn)表2。

表2 REG組證侯療效、胃鏡療效、病理療效情況

3.2 正常組及REG組治療前后胃黏膜EGF、bFGF、Ki67表達(dá)比較 見(jiàn)表3。

表3 正常組及REG組治療前后胃黏膜EGF、BFGF、Ki-67表達(dá)比較（x±s）

4 討 論

REG屬于中醫(yī)“痞滿(mǎn)”“嘈雜”“胃脘痛”等范疇，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)REG患者以脾虛濕熱血瘀證最為常見(jiàn)，其中實(shí)證多與氣滯、濕、熱、血瘀等因素有關(guān)，虛證多與氣虛有關(guān)，且隨著胃黏膜病變程度加重，血瘀、虛證的比例較前增加［10］。健脾清化散瘀飲為本課題組治療REG的經(jīng)驗(yàn)方，全方共奏健脾益氣、清熱化濕、軟堅(jiān)散結(jié)、活血化瘀之效。本研究采用健脾清化散瘀飲治療脾虛濕熱血瘀型REG患者32例，結(jié)果顯示：胃鏡療效有效率為78.14%；病理療效有效率為84.375%；中醫(yī)證候療效有效率為93.75%。所有治療組用藥后均未見(jiàn)明顯不良反應(yīng)。該結(jié)果提示健脾清化散瘀飲治療REG有一定的臨床療效。

EGF對(duì)胃黏膜有保護(hù)及促增生作用，在生理狀態(tài)下，EGF能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)，但是它的過(guò)度表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞的分裂增殖以及細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)［11］。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，Ki67表達(dá)的高低，對(duì)評(píng)價(jià)浸潤(rùn)性生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為，評(píng)估細(xì)胞增殖活性、判斷腫瘤預(yù)后具有重要意義［12］，因此Ki67有可能作為確定癌前人群高危個(gè)體的生物標(biāo)志物［13］。bFGF是一種多功能細(xì)胞生長(zhǎng)因子及血管生長(zhǎng)因子，能刺激血管生成，抵抗胃酸對(duì)黏膜重建的抑制作用［14］，且與胃癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，bFGF陽(yáng)性表達(dá)率越高，越易發(fā)生轉(zhuǎn)移［15］。

本研究結(jié)果表明：與正常組比較，REG患者EGF、Ki67、bFGF表達(dá)明顯升高，提示REG患者胃黏膜處于一種高增殖、高分化、高表達(dá)狀態(tài)，導(dǎo)致黏膜產(chǎn)生隆起性病變。而經(jīng)健脾清化散瘀飲3個(gè)月口服治療后，REG患者黏膜中 EGF、Ki67、bFGF表達(dá)明顯下調(diào)，提示健脾清化散瘀飲可能是通過(guò)下調(diào)EGF、Ki67、bFGF表達(dá)而對(duì)REG起治療作用。

綜上所述，健脾清化散瘀飲治療REG不僅在臨床癥狀療效、病理學(xué)各方面有著顯著的療效，而且明顯降低EGF、bFGF、Ki67表達(dá)，這可能是健脾清化散瘀飲治療REG的作用機(jī)制之一，為臨床上治療REG提供進(jìn)一步的試驗(yàn)理論依據(jù)，而具體的調(diào)控機(jī)制的研究還有待進(jìn)一步的研究探索。

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R573.3

B

1000-338X（2017）05-0006-03

2017-08-20

福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2015J01478）；福建衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研課題（WZPW201302）；福建省教育廳課題（JAT 160225）

方文怡（1985—），女，醫(yī)學(xué)碩士，主要從事中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病研究。

通迅作者：柯曉（1965—），男，主任醫(yī)師。 E-mail：drkxkx@163.com