針刀干預(yù)對(duì)帕金森病大鼠行為學(xué)和紋狀體神經(jīng)遞質(zhì)的影響*

徐 菁，蘆 娟，郭 妍，梁靖蓉，馬薇薇，盧勝春，郭長(zhǎng)青△

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029; 2.江西德興市勝春醫(yī)院，江西 德興 334224)

實(shí)驗(yàn)研究

針刀干預(yù)對(duì)帕金森病大鼠行為學(xué)和紋狀體神經(jīng)遞質(zhì)的影響*

徐 菁1，蘆 娟1，郭 妍1，梁靖蓉1，馬薇薇1，盧勝春2，郭長(zhǎng)青1△

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029; 2.江西德興市勝春醫(yī)院，江西 德興 334224)

目的：觀察針刀干預(yù)對(duì)帕金森病(PD)大鼠行為學(xué)和紋狀體神經(jīng)遞質(zhì)DA、NA、5-HT含量的影響。方法： SD雄性大鼠，隨機(jī)抽取16只作空白組，剩余采用右側(cè)紋狀體雙靶點(diǎn)注射法成功制備PD大鼠模型后，隨機(jī)分為模型組、電針組、針刀組。電針組電針“百會(huì)”“太陽(yáng)”，每周3次；針刀組松解C1、C2橫突后結(jié)節(jié)，每周2次。4周觀察期后，采用APO誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)觀察大鼠行為學(xué)變化， HE染色法光鏡下觀察中腦黑質(zhì)形態(tài)學(xué)變化，高效液相色譜-電化學(xué)法檢測(cè)紋狀體DA、NA、5-HT的含量。結(jié)果：空白組不轉(zhuǎn)圈，模型組轉(zhuǎn)圈無(wú)變化，電針組和針刀組干預(yù)后轉(zhuǎn)圈數(shù)較模型組減少顯著(P<0.01)；模型組紋狀體遞質(zhì)DA、NA、5-HT含量顯著低于空白組(P<0.01)， 針刀組DA、NA、5-HT含量較模型組升高顯著(P<0.01或P<0.05)。結(jié)論：針刀干預(yù)可減輕PD大鼠的行為學(xué)癥狀和升高紋狀體神經(jīng)遞質(zhì)DA、NA、5-HT含量，緩解帕金森病癥狀。

針刀療法；帕金森??；行為學(xué)；神經(jīng)遞質(zhì)；高效液相色譜-電化學(xué)法

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一種中老年人高發(fā)的神經(jīng)系統(tǒng)退行病變，病程長(zhǎng)、致殘率高、缺乏有效的治愈手段，嚴(yán)重影響患者生活[1]。目前國(guó)內(nèi)約221萬(wàn)帕金森病患者，患病率達(dá)1.7%[2]，臨床治療以口服左旋多巴為主，早期緩解癥狀，不能延緩病情，且長(zhǎng)期服藥過(guò)程中引起的副作用也是困擾患者的一大難題。

針刀療法結(jié)合針刺效應(yīng)和剝離松解的優(yōu)勢(shì)作用，臨床中用于治療帕金森病有確定療效[3]，但缺少關(guān)于其治療機(jī)制的基礎(chǔ)研究。本實(shí)驗(yàn)以PD模型大鼠為研究對(duì)象，旨在探討針刀干預(yù)對(duì)PD大鼠行為學(xué)的影響以及對(duì)紋狀體神經(jīng)遞質(zhì)DA、NA、5-HT含量的調(diào)節(jié)作用，以期為臨床針刀療法治療帕金森病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論支撐。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

6-羥基多巴胺(6-OHDA,美國(guó)Sigma公司生產(chǎn));阿撲嗎啡(APO，美國(guó)Sigma公司生產(chǎn));水合氯醛(天津市科密歐化學(xué)試劑中心生產(chǎn))；多聚甲醛(常德市華生醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn))；0.9%氯化鈉溶液(哈藥集團(tuán)三精制藥有限公司生產(chǎn))；多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NA)、五羥色胺(5-HT)、磷酸二氫鈉(NaH2PO4)、檸檬酸(CA)、乙二胺四乙酸四鈉鹽(EDTA,AR級(jí))；辛烷基磺酸鈉(OSA,HPLC級(jí)，美國(guó)Sigma公司生產(chǎn))；乙腈(ACN,HPLC級(jí)，美國(guó)Fisher Scientific公司生產(chǎn))；高氯酸(HClO4);硫代硫酸鈉(Na2S2O5,國(guó)產(chǎn)AR級(jí))。

1.2 主要儀器

腦立體定位儀(美國(guó)Stoelting公司生產(chǎn))；一次性無(wú)菌針灸針(0.25 mm×25 mm,北京中研太和醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn))； KWD-808Ⅰ型電針治療儀(常州市華音電子有限公司生產(chǎn))；一次性漢章系列無(wú)菌針刀(0.4 mm×40 mm,北京健力園醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn))；16通道Coularray庫(kù)侖陣列電化學(xué)高效液相色譜儀及色譜工作站、5600A電化學(xué)檢測(cè)器(均為美國(guó)ESA公司生產(chǎn))；離心機(jī)MIKRO 22R(德國(guó)Hettich公司生產(chǎn))；低溫冰箱(法國(guó)JOUAN公司生產(chǎn))；針筒式微孔濾膜過(guò)濾器(水系0.22 μm，天津騰達(dá)過(guò)濾器廠生產(chǎn))。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及造模分組

SD健康雄性大鼠72只，SPF級(jí)，體質(zhì)量(200±20)g，購(gòu)于北京維通利華公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[生產(chǎn)許可批號(hào):SCXK(京)2012-0001]。于北京中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)[SYXK(京)2011-0024]，自然光線，自由進(jìn)食和飲水。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，狀態(tài)良好，第2周開始實(shí)驗(yàn)，大鼠術(shù)前后12 h禁食不禁水。隨機(jī)抽取16只作空白組對(duì)照觀察，剩余全部造模。

1.3.1 動(dòng)物造模 采用右側(cè)紋狀體雙靶點(diǎn)定向注射6-羥基多巴胺制備PD大鼠模型。大鼠稱重后，腹腔注射10%的水合氯醛(0.3 ml/100 g)麻醉,將大鼠頭部固定于腦立體定位儀上,頭部備皮消毒后，在右耳前做1.5 cm長(zhǎng)的切口至暴露出前囟,確定前囟坐標(biāo)。按照包新民、舒斯云主編的《大鼠腦立體定位圖譜》[4]定位注射靶點(diǎn)坐標(biāo):①前囟前0.7 mm，中線右側(cè)3.0 mm，硬膜下4.5 mm；②前囟后0.2 mm，中線右側(cè)2.6 mm，硬膜下6.0 mm。用微型電鉆按上述坐標(biāo)鉆孔。用5 μl微量注射器向腦內(nèi)兩個(gè)預(yù)定靶點(diǎn)分別以0.5 μL/min速度注入6-OHDA 15 μg，注畢留針10 min，以1 mm/min的速度緩慢退針，之后用明膠海綿填塞鉆孔止血，縫合頭皮，待動(dòng)物清醒后放回,分籠保暖飼養(yǎng)。術(shù)后腹腔注射青霉素鈉8萬(wàn)U/天，連續(xù)注射1周，防止感染。

1.3.2 模型評(píng)價(jià) 造模4周后腹腔注射0.01%的APO(0.5 mg/kg)誘發(fā)大鼠旋轉(zhuǎn)行為，觀察并記錄大鼠旋轉(zhuǎn)啟動(dòng)后60 min內(nèi)的圈數(shù)，若穩(wěn)定出現(xiàn)以左側(cè)肢體(健側(cè))為支點(diǎn)，首尾相接并恒定轉(zhuǎn)向左側(cè)，且旋轉(zhuǎn)圈數(shù)平均7圈/min以上者，視為PD大鼠造模成功，否則視為不成功模型[5]。造模成功率為86%，造模成功共48只。

1.3.3 分組和干預(yù)手段 造模成功后大鼠隨機(jī)分成模型組、電針組、針刀組3組，每組16只。造模結(jié)束后1周進(jìn)行干預(yù)，其中空白組、模型組動(dòng)物正常飼養(yǎng),只做觀察。電針組：將大鼠俯臥固定于鼠板上，參照李忠仁主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[6]取“百會(huì)”(位置在頂骨正中)；“太陽(yáng)”(在大鼠眼外眥與耳之間連線近1/3處)，用0.25 mm×25 mm毫針針刺，接電針儀，疏密波，頻率2～100 Hz交替，強(qiáng)度約1 mA，電壓0.1 V,針刺強(qiáng)度以大鼠頭部微顫為宜，留針20 min。每周3次，連續(xù)4周。針刀組：龍膽紫定位后常規(guī)備皮、消毒，選用0.4 mm×40 mm HZ系列一次性針刀，取C1、C2橫突后結(jié)節(jié)處[7]松解，刀口線與脊柱方向平行，刀體與皮面垂直刺入，出刀后按壓片刻止血。每周2次，連續(xù)4周。

1.4 行為學(xué)檢測(cè)

4周治療期結(jié)束后1周對(duì)各組大鼠進(jìn)行APO誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為學(xué)觀察，評(píng)價(jià)方法同前模型評(píng)價(jià)方法，評(píng)價(jià)后進(jìn)行取材。

1.5 HE染色法光鏡下觀察黑質(zhì)形態(tài)學(xué)

行為學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)束后，次日每組大鼠取8只，用10%水合氯醛麻醉，經(jīng)左心室4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液灌注固定后取腦組織，分離并保留黑質(zhì)，在4%多聚甲醛的磷酸緩沖液中固定1周，經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋，切取6 μm厚的冠狀切片，行HE染色，觀察組織形態(tài)學(xué)。

1.6 高效液相色譜-電化學(xué)法檢測(cè)紋狀體神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NA)、5-羥色胺(5-HT)含量

各組剩余大鼠水合氯醛麻醉后斷頭處死，冰盤上取腦，分離雙側(cè)紋狀體液氮凍存；稱重取定量腦組織，加入1 ml的標(biāo)準(zhǔn)液，置4℃冰浴中用超聲波勻漿1 min， 4℃12000轉(zhuǎn)/min離心15 min，取出上清液后加入0.1 mol/L的高氯酸0.5 ml，OSA 1ml，漩渦震蕩3 min后4℃低速離心3000轉(zhuǎn)/min ，3 min。除去有機(jī)相，在下層水相中加入高氯酸(HClO4)1 ml，經(jīng)旋渦振蕩3 min、低速離心3 min后,取上層水樣直接進(jìn)樣，每次進(jìn)樣10 μL。設(shè)定色譜條件為：工作電極1∶150 mV、工作電極2∶450 mV、工作電極3∶500 mV、工作電極4∶550 mV，柱溫：25℃。流動(dòng)相：NaH2PO490 mmol/L，CA 50 mmol/L，OSA 1.7 mmol/L， EDTA 0.05 μmol/L。上述溶液以0.2 μm水系膜過(guò)濾，濾過(guò)液中加入乙腈(10%)，設(shè)置流速為：0.6 mL/min，在室溫下進(jìn)行，內(nèi)標(biāo)法定量分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 針刀干預(yù)對(duì)大鼠旋轉(zhuǎn)行為學(xué)的影響

與空白組相比：模型組大鼠轉(zhuǎn)圈數(shù)較空白組增加(P<0.01)；與模型組相比：電針組、針刀組大鼠轉(zhuǎn)圈數(shù)減少顯著(P<0.01)；與電針組相比：針刀組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。干預(yù)前后，空白組大鼠均不發(fā)生轉(zhuǎn)圈行為改變；造模后大鼠出現(xiàn)旋轉(zhuǎn)行為學(xué)改變，且模型組大鼠干預(yù)前后轉(zhuǎn)圈數(shù)不發(fā)生變化；電針和針刀干預(yù)后大鼠轉(zhuǎn)圈數(shù)均顯著低于模型組，且針刀組轉(zhuǎn)圈數(shù)要低于電針組，這表明電針和針刀干預(yù)都可以改善PD模型大鼠的轉(zhuǎn)圈行為學(xué)，針刀干預(yù)效果優(yōu)于電針干預(yù)。見表1。

表1 各組大鼠干預(yù)前后轉(zhuǎn)圈行為學(xué)比較

注：與空白組比較，△△P<0.01；與模型組比較，**P<0.01

2.2 光鏡下觀察針刀干預(yù)對(duì)PD大鼠模型中腦黑質(zhì)HE染色形態(tài)學(xué)的影響

空白組：神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)多、有序、形態(tài)正常,未見變性壞死，膠質(zhì)纖維排列規(guī)整。模型組：神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目顯著減少,部分細(xì)胞見胞體腫脹,空泡變性,膠質(zhì)細(xì)胞增生,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),胞核大小不一致。電針組：神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)目部分增加，胞體腫脹減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減輕，膠質(zhì)纖維排列欠佳。針刀組：神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)增加明顯，形態(tài)接近空白組正常細(xì)胞，胞體腫脹減輕，膠質(zhì)細(xì)胞增生減輕，膠質(zhì)纖維排列較規(guī)整，電針組與針刀組差異不顯著。見封三彩圖1。

2.3 針刀干預(yù)對(duì)PD大鼠紋狀體內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量影響

與空白組相比：模型組大鼠DA、NA、5-HT含量均顯著降低(P<0.01)；與模型組相比：電針組NA、5-HT含量較模型組升高(P<0.05)，針刀組DA、NA、5-HT含量較模型組升高顯著(P<0.01)；與電針組相比：針刀組DA、NA、5-HT含量未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。造模后，模型組大鼠紋狀體神經(jīng)遞質(zhì)DA、NA、5-HT含量均較空白組顯著減少，電針和針刀干預(yù)后大鼠紋狀體神經(jīng)遞質(zhì)DA、NA、5-HT含量高于模型組，且針刀組DA、5-HT含量高于電針組，接近于空白組。結(jié)果表明，針刀和電針干預(yù)均可以改善PD模型大鼠紋狀體內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)DA、NA、5-HT含量，且針刀干預(yù)的改善效果總體優(yōu)于電針干預(yù)。見表2。

表2 各組大鼠干預(yù)后DA、NA、5-HT含量的比較

注：與空白組比較，△△P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01

3 討論

針刀治療在帕金森病輔助治療方面療效確定，優(yōu)勢(shì)逐漸凸顯，需要通過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究明確其作用機(jī)制。

本研究采用目前常用的PD動(dòng)物模型造模方法之一：6-OHDA右側(cè)紋狀體定向注射法，直接損毀腦內(nèi)特定的神經(jīng)核團(tuán)，引起多巴胺能神經(jīng)元的不可逆損傷。造模技術(shù)成熟，成功率達(dá)86%，模型可靠。選擇APO誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為做行為學(xué)評(píng)價(jià)[8]，外周給予多巴胺受體激動(dòng)劑APO后，進(jìn)入中樞使損傷側(cè)的突觸后膜DA受體激動(dòng)，興奮作用引起大鼠向健側(cè)旋轉(zhuǎn)，通過(guò)記錄單位時(shí)間內(nèi)的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)對(duì)PD的行為癥狀進(jìn)行量化觀察[9]。本實(shí)驗(yàn)表明針刀和電針干預(yù)均可減輕帕金森病模型大鼠行為學(xué)癥狀。光鏡下見模型組神經(jīng)元細(xì)胞減少和變性壞死明顯，針刀和電針干預(yù)后神經(jīng)元細(xì)胞變性壞死減輕，形態(tài)學(xué)變化表明針刀干預(yù)可以減輕帕金森病模型大鼠的黑質(zhì)神經(jīng)元變性缺失。

黑質(zhì)-紋狀體通路和帕金森病發(fā)病相關(guān)，其中聯(lián)系紋狀體部的3個(gè)主要神經(jīng)元通路[10]為DA能通路、NA能神經(jīng)、5-HT能通路。帕金森病典型病理生理改變是黑質(zhì)-紋狀體通路內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元為代表的神經(jīng)元變性缺失，細(xì)胞內(nèi)α-突觸核蛋白異常聚集。DA能神經(jīng)元的胞體分布于黑質(zhì)，軸突投射于紋狀體[11]。神經(jīng)元胞體分泌神經(jīng)遞質(zhì)DA通過(guò)軸突釋放到紋狀體發(fā)揮效應(yīng)。當(dāng)DA能神經(jīng)元變性缺失，直接引起紋狀體部位神經(jīng)遞質(zhì)DA含量的減少[12]。研究認(rèn)為[13]黑質(zhì)-紋狀體內(nèi)以DA為代表的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量減少是帕金森病的一個(gè)重要的神經(jīng)生化改變，DA含量下降到70%左右就會(huì)出現(xiàn)帕金森病的核心癥狀-運(yùn)動(dòng)功能障礙，如靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng)直等。NA能神經(jīng)元中樞起于藍(lán)斑區(qū)，神經(jīng)纖維分布到紋狀體、額葉前皮質(zhì)和邊緣系統(tǒng)。研究表明[14]，在PD狀態(tài)下，紋狀體部位遞質(zhì)NA含量有輕、中度減少， NA含量是臨床診斷PD重要的生化指標(biāo)之一[15]。5-HT主要來(lái)自于中縫核群中的5-HT能神經(jīng)元，是紋狀體中含量?jī)H次于DA的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)。有資料表明[16]在PD患者紋狀體內(nèi)5-HT遞質(zhì)有一定減少。經(jīng)過(guò)PD患者死后尸體解剖發(fā)現(xiàn)[17]，伴隨殼核部的DA含量下降，尾狀核部5-HT的相關(guān)物質(zhì)(5-HT、5-羥色氨酸、5-羥色胺的轉(zhuǎn)運(yùn)體、色氨酸羥化酶等)有降低[18]，目前研究認(rèn)為[19-21]5-HT能抑制造模后基底節(jié)回路中GABA引起的異常神經(jīng)沖動(dòng)，改善丘腦以及大腦皮質(zhì)對(duì)運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)，改善PD的運(yùn)動(dòng)癥狀。有研究[22]通過(guò)腦漲落圖技術(shù)對(duì)PD患者和正常對(duì)照者行腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)檢查時(shí)，結(jié)果顯示PD患者腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)DA、NA、5-HT等含量較正常對(duì)照減少。認(rèn)為PD發(fā)病和患者紋狀體內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)DA、NA、5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量減少有關(guān)。本研究成功造模后發(fā)現(xiàn)，模型組紋狀體遞質(zhì)DA、NA、5-HT含量顯著低于空白組(P<0.01)，與既往研究結(jié)果一致。

有研究表明合成DA等神經(jīng)遞質(zhì)的原料主要來(lái)自于血液[23]。中腦黑質(zhì)-紋狀體區(qū)主要由大腦中動(dòng)脈供血，受交感神經(jīng)頸上節(jié)的支配。當(dāng)交感神經(jīng)頸上節(jié)受異常刺激會(huì)引起大腦中動(dòng)脈異常，直接影響中腦黑質(zhì)部血供和DA、NA、5-HT等神經(jīng)遞質(zhì)的正常合成代謝。交感神經(jīng)頸上節(jié)位于C1、C2橫突水平，其后方臨最長(zhǎng)肌及其筋膜，前方覆有椎前筋膜[24]。針刀在C1、C2橫突后結(jié)節(jié)處松解，可直接改善神經(jīng)節(jié)周邊肌腱、筋膜的緊張狀態(tài)，減輕對(duì)其的異常刺激，改善大腦中動(dòng)脈對(duì)黑質(zhì)紋狀體區(qū)的血供，有助于促進(jìn)DA、NA、5-HT等神經(jīng)遞質(zhì)合成。本實(shí)驗(yàn)針刀干預(yù)后，大鼠行為學(xué)轉(zhuǎn)圈數(shù)減少較模型組和電針組顯著,電針和針刀干預(yù)后DA(P<0.01)、NA(P<0.05)、5-HT(P<0.01)含量較模型組升高顯著，表明針刀通過(guò)松解頸部軟組織，可改善大腦中動(dòng)脈對(duì)黑質(zhì)紋狀體區(qū)的血供，升高紋狀體部DA、NA、5-HT等神經(jīng)遞質(zhì)的含量。

針刀療法以微創(chuàng)的方式調(diào)整軟組織異常狀態(tài)，對(duì)軟組織病變及其影響下的神經(jīng)、血管、骨關(guān)節(jié)及內(nèi)臟器官功能異常都有治療作用[25]。本實(shí)驗(yàn)以新型微創(chuàng)療法針刀為干預(yù)手段，通過(guò)觀察大鼠行為學(xué)變化、黑質(zhì)形態(tài)學(xué)變化、紋狀體相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)含量變化，探討了針刀療法通過(guò)局部松解間接調(diào)節(jié)腦神經(jīng)遞質(zhì)含量而發(fā)揮對(duì)帕金森病的治療作用機(jī)制,是對(duì)帕金森病治療新方式和治療機(jī)制的新探索。

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ImpactofBehaviorandNeurotransmitterinPDRatsbyAcupotomyIntervention

XUJing1,LUJuan1,GUOYan1,LIANGJing-rong1,MAWei-wei1,LUSheng-chun2,GUOChang-qing1△

(1.BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China; 2.DexingShengchunHospital,Dexing334224,China)

Objective：To observe effect of the acupotomy intervention on behavior and striatum neurotransmitters, such as contents of DA, NA, and 5-HT in PD rats.Methods16 SD rats(male) were randomly selected into the blank control group; the rest rats were modeled into PD rats with the method of right striatum double target injection, the PD rats were randomly divided into the model group, the electro-acupuncture group, and the acupotomy group. The rats in the electro-acupuncture group were needling on GV20 and EX-HN5, three times a week; acupotomy was used to debonding transverse processes of C1and C2, twice per week. After four-week observation period, behavior changes were assessed by rotation test triggered by APO; morphological changes of substantia nigra were observed with HE staining method under light microscope; the content of DA, NA, and 5-HT were detected with HPLC-ECD.ResultsIn terms of the rotation test, the rats in the blank control group did not rotate; the rotation in the model group showed no change; the rotation was significantly decreased after electro-acupuncture intervention and acupotomy intervention, when compared to the model group(P<0.01). In terms of the content of DA, NA, and 5-HT, they significantly became lower in the model group when compared to the blank control group(P<0.01); they were obviously increased after acupotomy intervention(P<0.01, orP<0.05).ConclusionAcupotomy intervention can alleviate behavioral symptoms and increase the contents of DA, NA, and 5-HT these striatum neurotransmitters when treating PD in rats.

Acupotomy therapy; Behavior study PD; Neurotransmitter; HPLC-ECD

R246.6

A

1005-0779(2017)11-0058-04

江西德興市勝春醫(yī)院課題(橫向課題)，編號(hào):535104032。

徐菁(1990-)，女， 2015級(jí)針灸推拿學(xué)專業(yè)碩士研究生。

△

郭長(zhǎng)青(1959-)，男，教授,博士研究生導(dǎo)師，研究方向：針刀理論與臨床研究。

2017-06-26