胃癌中解聚素—金屬蛋白酶17的表達(dá)及預(yù)后價值研究

馮宇嬌+王宏坤+鄭繪霞+梁建芳

【摘要】 目的：檢測解聚素-金屬蛋白酶17（ADAM17）在胃癌中的表達(dá)情況，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其預(yù)后意義。方法：收集85例胃腺癌組織標(biāo)本及相應(yīng)正常對照組織進(jìn)行免疫組化法檢測，應(yīng)用Kaplan-Meier生存分析法和Cox比例風(fēng)險回歸模型進(jìn)行生存分析，評價ADAM17表達(dá)、臨床病理指標(biāo)與胃癌患者生存期的關(guān)系。結(jié)果：胃癌組織中ADAM17表達(dá)明顯高于正常組織（P<0.05）；ADAM17的表達(dá)與胃癌組織中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期均有關(guān)（P<0.05），與年齡及腫瘤分化程度均無關(guān)（P>0.05）。單因素Cox比例生存分析顯示，ADAM17表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均與患者預(yù)后密切相關(guān)（P<0.05），多因素Cox回歸分析顯示ADAM17高表達(dá)是胃癌患者獨立的預(yù)后因素。結(jié)論：ADAM17蛋白表達(dá)在胃癌的發(fā)生進(jìn)展過程中起了一定的作用，ADAM17高表達(dá)的患者預(yù)后差，是評價胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 胃癌； ADAM17； 免疫組化； 預(yù)后

【Abstract】 Objective：To detect the expression of a disintegrin and metalloproteinase 17（ADAM17） in tissue of gastric cancer and explore the roll and prognostic value of development of them.Method：ADAM17 expression was detected by immunohistochemistry in 85 gastric cancer tissues and the corresponding normal tissues，Kaplan-Meier survival analysis and Cox regression were used to evaluate the relationship of ADAM17 expression and clinical pathology indicators and overall survival of patients.Result：The expression of ADAM17 protein in cancer was significantly higher than that in normal tissues（P<0.05）.ADAM17 protein expression in cancer were significantly related to lymph node metastasis and TNM stage（P<0.05），no related with age and tumor differentiation degree（P>0.05）.The single factor survival analysis showed that ADAM17 protein expression and lymph node metastasis were correlated with patients prognosis（P<0.05），and Cox multi-factor analysis showed that ADAM17 expression was an independent prognostic factor.Conclusion：The expression of ADAM17 protein may play a roll of development progression of gastric cancer.The high expression of ADAM17 is poor prognosis in gastric cancer，and it is a independent prognostic factor for gastric cancer.

【Key words】 Gastric cancer； A disintegrin and metalloproteinase 17； Immunohistochemistry； Prognosis

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.20.005

胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，病理類型主要以腺癌多見，目前主要以手術(shù)切除結(jié)合放化療的方式為主，但是多年來胃癌的預(yù)后都沒有得到較大的改善，究其原因一是患者多數(shù)就診時已屬于中晚期，二是到目前為止尚未找到能夠評價患者預(yù)后的關(guān)鍵因子，因此尋找有效的分子標(biāo)記物來評估患者預(yù)后，為患者的后期生存質(zhì)量提供較大的改善是目前研究的熱點。解聚素-金屬蛋白酶（a disintegrin and metalloprotease domain，ADAM）家族是近年來發(fā)現(xiàn)的一種跨膜蛋白，它含去整合素域和金屬蛋白酶域結(jié)構(gòu)的蛋白[1]。解聚素-金屬蛋白酶17（a disintegrin and metalloproteinase 17，ADAM17）是其蛋白家族的成員之一，又名腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶，具有解聚素和金屬蛋白酶的活性，研究發(fā)現(xiàn)，ADAM17在炎癥和腫瘤組織中均有一定的作用[2-3]。本研究采用免疫組化法檢測85例胃癌組織中ADAM17表達(dá)情況，探討其與胃癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011-2014年本院收治的胃癌手術(shù)切除病例，對石蠟標(biāo)本重新包埋切片觀察，整理85例胃腺癌及相應(yīng)切緣陰性組織做對照，所有病例經(jīng)過兩位經(jīng)驗豐富的高年資病理專家診斷。并進(jìn)行隨訪，其中未能隨訪53例，有隨訪資料32例，生存期5～70個月，其中17例死亡。

1.2 主要試劑和方法 ADAM17抗體、免疫組化試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物科技有限公司。免疫組化EnVision法進(jìn)行檢測，按照試劑盒說明書進(jìn)行，ADAM17濃度配比1∶200，以PBS液代替一抗作為陰性對照。endprint

1.3 免疫組化 ADAM17蛋白在腫瘤細(xì)胞胞膜/胞漿呈棕黃色為陽性表達(dá)，觀察陽性細(xì)胞百分比及染色強(qiáng)度，分別計數(shù)陽性細(xì)胞百分比（陰性=0分，1%～25%=1分，26%～50%=2分，51%～75%=3分，>75%=4分），評判陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度（陰性=0分，弱陽性=1分，中度陽性=2分，強(qiáng)陽性=3分），兩者相乘：≤4分為低表達(dá)或不表達(dá)，>4分為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，單因素及多因素Cox比例回歸模型用于評估預(yù)后相關(guān)因素，Kaplan-Meier法繪制生存曲線。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ADAM17蛋白在85例癌組織和正常組織中的表達(dá)情況 85例胃癌組織中，45例（52.9%）ADAM17呈不同程度的表達(dá)（圖1A），對比正常組織中僅2例（2.4%）顯示ADAM17表達(dá)（圖1B），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ 字2=54.373，P=0.000）。

2.2 ADAM17的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 ADAM17蛋白的表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期均有關(guān)（P<0.05），與患者發(fā)病年齡及腫瘤分化程度均無關(guān)（P>0.05），見表1。

2.3 生存分析 32例有隨訪資料的病例ADAM17高表達(dá)12例、年齡分布（小于44歲18例，大于44歲14例）、分化程度（高6例、中20例、低

6例）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例、TNM分期（Ⅰ、Ⅱ期19例，Ⅲ期13例），由表2可知，單因素Cox比例分析胃癌的生存期與ADAM17表達(dá)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均相關(guān)（P<0.05），與年齡分布、分化程度及TNM分期均無關(guān)（P>0.05）。表3顯示，多因素Cox比例回歸模型篩選發(fā)現(xiàn)ADAM17表達(dá)是胃癌患者獨立的預(yù)后因素（P<0.05），總生存期Kaplan-Meier生存曲線提示ADAM17高表達(dá)的胃癌患者預(yù)后明顯較ADAM17低表達(dá)或不表達(dá)的胃癌患者為差，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的生存期也明顯短于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者，見圖2。

3 討論

解聚素-金屬蛋白酶17（ADAM17）屬于Ⅰ型跨膜蛋白，參與著人類多種正常生理活動[4]。ADAM17具有剪切蛋白酶樣的作用，能夠活化細(xì)胞外多種結(jié)構(gòu)不同的功能區(qū)，從而釋放多種不同的分子，進(jìn)而發(fā)揮一定的生物學(xué)作用[5-6]。例如它可以剪切多種表皮生長因子及其受體、細(xì)胞因子及黏附分子等胞外結(jié)構(gòu)域，從而提高細(xì)胞的增殖和遷移能力[7-8]。

研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤組織中，ADAM17的高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖侵襲和血管形成及轉(zhuǎn)移的能力[9]。當(dāng)ADAM17表達(dá)受到抑制后即進(jìn)行干擾后可以明顯降低腫瘤細(xì)胞的增殖能力和周圍新生血管的形成能力[10-11]。在口腔鱗狀細(xì)胞癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等中均存在著ADAM17高表達(dá)，并與腫瘤侵襲性行為相關(guān)[12-13]。在乳腺癌、腎癌、非小細(xì)胞肺癌、膠質(zhì)瘤中均發(fā)現(xiàn)，ADAM17表達(dá)增高顯著促進(jìn)了腫瘤的增殖侵襲能力，且其高表達(dá)的患者預(yù)后較差[14-18]。在前三種腫瘤中，ADAM17表達(dá)不但與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，而且均認(rèn)為ADAM17可能是腫瘤分子靶向治療的新靶點。本研究結(jié)果顯示，ADAM17在癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組織，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明ADAM17在胃癌的發(fā)生過程中起了一定的作用，ADAM17的表達(dá)還與胃癌臨床病理指標(biāo)有關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān)，而與年齡及腫瘤分化程度等無關(guān)。進(jìn)一步分析顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例及TNM分期高的病例ADAM17表達(dá)率明顯增高，由此可知，ADAM17表達(dá)與腫瘤的惡性進(jìn)展有關(guān)，可能在胃癌的進(jìn)展中也起著一定的促進(jìn)作用。

在膠質(zhì)瘤中，ADAM17在高級別腫瘤中呈高表達(dá)，生存分析顯示其高表達(dá)的患者預(yù)后較差[19]。在食管鱗狀細(xì)胞癌中同樣發(fā)現(xiàn)，ADAM17呈高表達(dá)且與腫瘤的浸潤及轉(zhuǎn)移有關(guān)，是食管癌評價預(yù)后的獨立預(yù)后因子[20]。本研究單因素生存分析結(jié)果顯示，ADAM17蛋白表達(dá)高的患者生存期明顯較表達(dá)低的患者差，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者生存期明顯較未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者差。多因素Cox回歸模型提示ADAM17蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移兩個因素中，ADAM17高表達(dá)是評價胃癌患者的預(yù)后差的獨立因素。總生存期Kaplan-Meier生存曲線顯示，ADAM17高表達(dá)的胃癌患者預(yù)后明顯較ADAM17低表達(dá)或不表達(dá)的患者差。由此可見，ADAM17高表達(dá)是胃癌患者評估預(yù)后的獨立因子。綜上所述，ADAM17不但在胃癌的發(fā)生進(jìn)展過程中起著一定的作用，而且是胃癌患者評價預(yù)后的重要因子。

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