Beclin1和HLAⅠ、Ⅱ在人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)及其關(guān)系

紀(jì)曉坤，王學(xué)利，王 珩，趙銀環(huán)，吳家寧，王 蕊，吳 娟，杜 蕓

Beclin1和HLAⅠ、Ⅱ在人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)及其關(guān)系

紀(jì)曉坤，王學(xué)利，王 珩，趙銀環(huán)，吳家寧，王 蕊，吳 娟，杜 蕓

目的探討轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒的自噬基因Beclin1和免疫應(yīng)答效應(yīng)分子HLAⅠ、Ⅱ在人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)，分析Beclin1在卵巢癌免疫應(yīng)答中的作用。方法應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)、RT-PCR、Western blot法檢測Beclin1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞前后Beclin1和HLAⅠ、Ⅱ的mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化。應(yīng)用免疫熒光顯微鏡觀察Beclin1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞后，其自噬小體的變化。用MTT法檢測Beclin1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SKOV3前后細(xì)胞的增殖活性。結(jié)果SKOV3細(xì)胞轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒后，Beclin1的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平分別是空載體組的5、2倍。熒光顯微鏡觀察，轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒組卵巢癌細(xì)胞MDC標(biāo)記的自噬小體數(shù)量顯著增多。RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染Beclin1可誘導(dǎo)HLAⅠ、Ⅱ等位基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯。Beclin1質(zhì)粒組的HLAⅠ-A、B、C和HLAⅡ-DP、DQ、DR的mRNA分別是空載體組的2、1.6、3倍和2、6、3倍；其HLAⅠ、Ⅱ的蛋白表達(dá)分別是空載體組的2、1.6倍。MTT結(jié)果顯示，Beclin1質(zhì)粒組與空載體組、空白對照組相比，在轉(zhuǎn)染24、48、72、96 h后，其細(xì)胞生長抑制率分別為42.6%、37.8%、24.35%、14.81%。結(jié)論在人卵巢癌SKOV3細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染外源性Beclin1可誘導(dǎo)細(xì)胞自噬并使免疫應(yīng)答效應(yīng)分子HLAⅠ、Ⅱ的表達(dá)增加。HLAⅠ、Ⅱ表達(dá)的增加可能使卵巢癌細(xì)胞免疫應(yīng)答增強(qiáng)。轉(zhuǎn)染外源性Beclin1可抑制卵巢癌SKOV3的細(xì)胞增殖。

卵巢腫瘤；Beclin1；HLAⅠ、Ⅱ；自噬；免疫應(yīng)答

卵巢癌是婦科惡性腫瘤中發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤。盡管手術(shù)和化療不斷發(fā)展，卵巢癌的預(yù)后仍然較差，約15%的患者于診斷后1年內(nèi)死亡，5年生存率僅25%[1]，其最主要原因是卵巢癌發(fā)現(xiàn)時已屬進(jìn)展期(Ⅲ～Ⅳ期)。盡管考慮腫瘤分級、組織學(xué)類型和化療敏感性等普遍因素，卵巢癌的預(yù)后仍然存在較大差異，其主要來自于腫瘤和患者的差異，患者的差異主要體現(xiàn)在對卵巢癌的免疫應(yīng)答。

接受日期：2017-07-05

目前，已有多項(xiàng)研究證實(shí)免疫應(yīng)答在調(diào)節(jié)疾病過程中起顯著作用[2-3]。

在先天性和后天性腫瘤免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵性作用的人類主要組織相容性復(fù)合體HLAⅠ、Ⅱ，其在腫瘤性損傷中的表達(dá)會發(fā)生改變。據(jù)文獻(xiàn)報道[4]HLAⅠ、Ⅱ表達(dá)的改變在腫瘤免疫逃逸機(jī)制中發(fā)揮重要作用。近年更多的免疫學(xué)家和臨床腫瘤醫(yī)師將注意力轉(zhuǎn)向腫瘤細(xì)胞的經(jīng)典和非經(jīng)典HLAⅠ、Ⅱ表達(dá)的改變[5-8]。

自噬形態(tài)學(xué)上的特征性變化是細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量自噬小體，而自噬在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中的作用十分復(fù)雜。腫瘤細(xì)胞自噬增強(qiáng)可使其產(chǎn)生耐藥、抵抗放療并適應(yīng)缺氧和營養(yǎng)缺乏狀態(tài)而存活。自噬異常增強(qiáng)可使細(xì)胞發(fā)生程序性死亡。近年，研究認(rèn)為自噬的異常調(diào)節(jié)對卵巢癌的發(fā)病機(jī)制和耐受放、化療發(fā)揮重要作用[9]。目前，自噬與免疫應(yīng)答間的關(guān)系尚未見報道，本實(shí)驗(yàn)旨在探索兩者間的關(guān)系及其可能的相互作用。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞株、培養(yǎng)條件及試劑SKOV3細(xì)胞株由河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院科研中心提供，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，于37 ℃、5%CO2環(huán)境下培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞達(dá)80%～90%融合時用0.25%胰蛋白酶-EDTA液進(jìn)行消化以1 ∶4傳代，次日換液，每2天傳代1次。

1.2方法將SKOV3細(xì)胞按每毫升5×105個的密度接種于不含抗生素的RPMI 1640培養(yǎng)基的無菌6孔培養(yǎng)板內(nèi)，待細(xì)胞生長密度達(dá)80%～90%時，按轉(zhuǎn)染試劑盒提供的方法進(jìn)行轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)分3組，分別為轉(zhuǎn)染外源性Beclin1質(zhì)粒組、空載體組、空白對照組。

1.3轉(zhuǎn)染法取OPTI-DMEM 100 μL，加入Lipofectamine 2000DNA轉(zhuǎn)染試劑2 μL，輕輕混勻，室溫靜置孵育5 min；向上述混合液中加入0.5 μg/μL的質(zhì)粒DNA 1 μL，輕輕混勻，室溫孵育20 min；先在每孔細(xì)胞中加入1.5 mL不含牛血清、不含抗生素的RPMI 1640培養(yǎng)基，再將上述混合物分別加入各孔細(xì)胞中，輕輕混勻；轉(zhuǎn)染6 h后更換含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)至48 h收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA和總蛋白，進(jìn)行RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)。

1.4RNA提取和RT-PCR實(shí)驗(yàn)采用Trizol法提取細(xì)胞中總RNA，紫外分光光度計(jì)測其濃度，用Fermentas公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，用美國ABI公司的7500實(shí)時定量PCR儀，以合成的cDNA為模板，以美國Promega公司的GoTaq qPCR Master Mix實(shí)時定量試劑盒為反應(yīng)體系，進(jìn)行目的基因擴(kuò)增。

1.5細(xì)胞總蛋白提取和Westernblot實(shí)驗(yàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染72 h后，加入細(xì)胞裂解液及蛋白酶抑制劑(兩者體積比為100 ∶1)提取細(xì)胞總蛋白，用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，定量后的蛋白用于Western blot實(shí)驗(yàn)。

Western blot實(shí)驗(yàn)：制備5%濃縮膠和12%分離膠，根據(jù)蛋白濃度以每孔100 μg上樣；SDS-PAGE電泳：5%濃縮膠90 V 40 mA條件電泳到達(dá)分離界面后，改換電壓120 V 40 mA，1.5～2 h分離樣品蛋白；根據(jù)蛋白Marker在目的條帶區(qū)域的凝膠處切膠，置于轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡，PVDF膜先放入甲醇液中激活3 min，再放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中平衡10 min；由負(fù)極到正級依次為：3層濾紙、凝膠、PVDF膜、3層濾紙，放入電轉(zhuǎn)儀中，4 ℃條件下進(jìn)行印跡電泳(恒流180 mA、120 min)，將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上；將PVDF膜用5%脫脂奶粉37 ℃震蕩封閉1 h；TTBS洗膜3次，加入Beclin1和GAPDH一抗(稀釋比例均為1 ∶1 000)，HLA Ⅰ和HLA Ⅱ一抗(稀釋比例均為1 ∶100)，4 ℃孵育過夜(>6 h)；TTBS洗膜3次，加入抗兔熒光二抗(稀釋比例為1 ∶5 000)，37 ℃避光孵育1 h；TTBS避光洗膜3次，最后用Odyssey成像系統(tǒng)檢測結(jié)果，采集灰度值，保存圖片。

1.6MTT比色法測定細(xì)胞增殖收集瞬時轉(zhuǎn)染后對數(shù)生長期的3組細(xì)胞，以每孔每毫升1×104個細(xì)胞分別接種于96孔板，每組設(shè)10個復(fù)孔，置于37 ℃、5%CO2條件下進(jìn)行培養(yǎng)。分別在轉(zhuǎn)染后第24、48、72、96 h每孔加入濃度為5 mg/mL的四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)20 μL，溫箱培育4 h后小心吸取培養(yǎng)基，每孔加入DMSO 150 μL，震蕩混勻10 min，酶標(biāo)儀測定492 nm處的吸光度(A)值以計(jì)算SKOV3細(xì)胞的生長抑制率：抑制率(%)=(1-A轉(zhuǎn)染組/A未轉(zhuǎn)染組)×100%。

1.7MDC染色檢測自噬小體取對數(shù)生長期SKOV3細(xì)胞以每孔每毫升1×106個細(xì)胞密度接種于放有蓋玻片的6孔板中，待細(xì)胞貼壁后按外源性Beclin1組、空載體組和空白對照組進(jìn)行瞬時轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染48 h后，PBS洗2次，換含MDC(0.05 mmol/L)的新鮮培養(yǎng)基于37 ℃培養(yǎng)箱避光孵育60 min后，4%多聚甲醛固定15 min，PBS洗2次，取出細(xì)胞爬片，晾干后在熒光顯微鏡下觀察和照相。

2 結(jié)果

2.1SKOV3細(xì)胞轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒后Beclin1的表達(dá)SKOV3細(xì)胞轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒后，其自噬相關(guān)基因Beclin1的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平分別是轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒組的5、2倍。轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒后，各組Beclin1 mRNA表達(dá)分別為：轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒組9.29±0.27、空載體組1.84±0.10、空白對照組1.39±0.01，其數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析SNK兩兩比較和非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行分析，轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒組與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Beclin1蛋白表達(dá)分別為：轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒組11.68±2.90、空載體組5.13±0.61、空白對照組5.67±0.85，其數(shù)據(jù)采用單因素方差分析SNK兩兩比較，轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒組與空載體組、空白對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，圖1)。

圖1Westernblot法檢測SKOV3卵巢癌細(xì)胞Beclin1的蛋白表達(dá)

1.轉(zhuǎn)染外源性Beclin1質(zhì)粒組；2.空載體組；3.空白對照組

2.2轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒后SKOV3細(xì)胞自噬小體的變化轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒組卵巢癌細(xì)胞MDC標(biāo)記的自噬小體數(shù)量顯著增多，提示轉(zhuǎn)染外源性Beclin1可誘導(dǎo)卵巢癌SKOV3細(xì)胞自噬增強(qiáng)(圖2)。

ABC圖2 熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染48h后SKOV3細(xì)胞中自噬小體的變化：A．轉(zhuǎn)染外源性Beclin1質(zhì)粒組；B．空載體組；C．空白對照組

2.3轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒后HLAⅠ、Ⅱ的表達(dá)轉(zhuǎn)染外源性Beclin1可誘導(dǎo)HLAⅠ、Ⅱ等位基因即HLAⅠ-A、B、C 和 HLAⅡ-DP、DQ、DR的轉(zhuǎn)錄和翻譯。Beclin1質(zhì)粒組的HLAⅠ-A、B、C和HLAⅡ-DP、DQ、DR的轉(zhuǎn)錄mRNA(表1)分別是空載體組的2、1.6、3倍和2、6、3倍；其HLAⅠ、Ⅱ的蛋白表達(dá)分別是空載體組2、1.6倍(表2，圖3)。

表1 RT-PCR檢測SKOV3卵巢癌細(xì)胞等位基因HLAⅠ-A、B、C和HLAⅡ-DP、DQ、DR的mRNA表達(dá)

與空白對照組相比，aP<0.01；與空白對照組，bP<0.05

表2 Western blot法檢測SKOV3卵巢癌細(xì)胞HLA Ⅰ、Ⅱ的蛋白表達(dá)

與空載體組、空白對照組相比，aP<0.01

圖3Westernblot法檢測SKOV3細(xì)胞HLAⅠ、Ⅱ的蛋白表達(dá)

1.轉(zhuǎn)染外源性Beclin1質(zhì)粒組；2.空載體組；3.空白對照組

2.4轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒后SKOV3細(xì)胞的生長抑制率轉(zhuǎn)染Beclin1質(zhì)粒組與空載體組、空白對照組相比，在轉(zhuǎn)染24、48、96 h后，其細(xì)胞生長抑制率分別為42.6%、37.8%、24.35%、14.81%(表3)。

表3 MTT比色法測定SKOV3卵巢癌細(xì)胞的增殖

與空白對照組相比，aP<0.01

3 討論

免疫系統(tǒng)能識別并清除腫瘤細(xì)胞，以阻止腫瘤的生長和擴(kuò)散。近年，對腫瘤免疫監(jiān)視理論的研究突出免疫逃逸機(jī)制在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中作用。HLAⅠ、Ⅱ表達(dá)的改變在已發(fā)現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞逃避免疫識別及清除機(jī)制中發(fā)揮重要作用，越來越多的免疫學(xué)家及臨床腫瘤醫(yī)師在研究腫瘤免疫逃逸機(jī)制中更青睞于分析HLAⅠ、Ⅱ表達(dá)改變。在一些腫瘤中[4,10-11]，HLAⅠ、Ⅱ的表達(dá)與臨床預(yù)后的關(guān)系能反映兩者在腫瘤細(xì)胞先天性和獲得性免疫系統(tǒng)的相互作用中發(fā)揮作用。值得注意的是，在大量腫瘤性損傷中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HLAⅠ、Ⅱ的表達(dá)改變[4,10]。

Chang等[10]報道除肝癌、白血病及淋巴瘤外的大部分腫瘤中均存在HLAⅠ表達(dá)異常，對100多種腫瘤性損傷的研究發(fā)現(xiàn)16%～80%的損傷出現(xiàn)HLAⅠ的表達(dá)缺失或下降[4]。在非經(jīng)典型HLAⅠ的抗原中，HLA-G已證實(shí)在卵巢癌中表達(dá)[10-13]。HLAⅡ抗原不同于HLAⅠ，其通常在惡性腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)[14-15]，頻率為0～100%。

前期研究顯示HLAⅠ在識別并清除腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮重要作用，該作用具有HLAⅠ依賴性，由此可見腫瘤細(xì)胞HLAⅠ表達(dá)異常使機(jī)體免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答產(chǎn)生不利影響。作為非經(jīng)典型HLAⅠ抗原的代表HLA-G，其作用可抑制細(xì)胞毒細(xì)胞的活性和CTL、CD4+輔助T細(xì)胞的增殖，抵抗NK細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷作用[4]；HLA-G也可將APC(抗原提呈細(xì)胞)細(xì)胞膜上的HLA-G轉(zhuǎn)移至活化T細(xì)胞，誘導(dǎo)產(chǎn)生新的輔助T細(xì)胞亞群。該作用為腫瘤細(xì)胞逃避免疫識別和清除提供幫助[16]。值得注意的是NK細(xì)胞的腫瘤殺傷作用是由經(jīng)典型和非經(jīng)典型HLAⅠ與NK細(xì)胞配體激活共同作用的結(jié)果。HLAⅡ分子可將抗原肽提呈給輔助T細(xì)胞，而HLAⅡ在抗原肽提呈過程中需要HLAⅠ、APM及共刺激分子協(xié)同作用[4]。通常CD4+T與HLAⅡ-抗原肽復(fù)合物及APC細(xì)胞的共刺激分子相互作用，通過CD40-CD40L的作用導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞和活化的APC細(xì)胞的增殖和分化，從而提高抗原提呈作用。HLAⅡ依賴性和腫瘤抗原特異性CD4+T可間接地通過釋放IFN的細(xì)胞因子活化嗜酸性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞，殺滅腫瘤細(xì)胞[6]。

自噬是細(xì)胞吞噬細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器于雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小體中，并將自噬小體運(yùn)送至溶酶體將其降解為氨基酸和能量再利用的動態(tài)連續(xù)過程?；A(chǔ)水平的自噬有助于通過清除受損傷及衰老的細(xì)胞器和更新長壽蛋白維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)；而持續(xù)大量的自噬可導(dǎo)致細(xì)胞程序性死亡[17]。然而，自噬在腫瘤中起截然相反的兩種作用：一方面自噬阻止腫瘤形成；另一方面使腫瘤細(xì)胞在營養(yǎng)缺乏、代謝性應(yīng)激、抵抗化療藥物等不利環(huán)境中生存。自噬調(diào)節(jié)異?？赡茉诼殉舶┑陌l(fā)病機(jī)制及抵抗放、化療的治療中發(fā)揮重要作用[9]。Beclin1是第一個被發(fā)現(xiàn)的自噬相關(guān)基因，也是自噬最重要的效應(yīng)分子和腫瘤抑制因子，參與自噬的起始、自噬小體的形成和降解等過程。Beclin1在40%～75%的人類散發(fā)性乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌中存在單等位基因缺失[18]。在Liang等[19]的研究中顯示50%散發(fā)性卵巢癌中發(fā)現(xiàn)Beclin1單等位基因缺失，與卵巢良性腫瘤相比Beclin1在卵巢癌中的表達(dá)下調(diào)。在體外研究和體內(nèi)異種移植腫瘤研究中已證實(shí)，在乳腺癌MCF-7中Beclin1的異位表達(dá)完全可以使乳腺癌MCF-7重建自噬[19]。Peracchio等[9]未公開的數(shù)據(jù)顯示在卵巢癌患者中提高Beclin1和 LC3表達(dá)能提高化療的有效率，該現(xiàn)象有助于探索癌癥治療的新方法。

本實(shí)驗(yàn)著重分析提高細(xì)胞自噬能否提高卵巢癌的免疫應(yīng)答，實(shí)驗(yàn)顯示在卵巢癌SKOV3細(xì)胞中提高Beclin1表達(dá)能誘導(dǎo)自噬而抑制細(xì)胞增殖，同時可以誘導(dǎo)免疫應(yīng)答效應(yīng)分子HLAⅠ、Ⅱ的表達(dá)。此結(jié)果為揭示腫瘤中自噬與免疫系統(tǒng)間未知的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

目前，卵巢癌的免疫生物治療方法取得重大突破。在諸如惡性黑色素瘤和腎細(xì)胞癌中免疫生物治療取得巨大成功；而相似的治療方針已延伸到卵巢癌的治療中。但是在卵巢癌取得巨大進(jìn)展的標(biāo)準(zhǔn)治療中仍然缺乏重要的腫瘤免疫學(xué)知識。另外，在惡性腫瘤中HLAⅠ的表達(dá)缺失有助于腫瘤細(xì)胞逃避CTL細(xì)胞的識別和清除，因此其有望成為潛在性有益的T細(xì)胞免疫治療新方法。本實(shí)驗(yàn)顯示在卵巢癌SKOV3細(xì)胞中提高Beclin1表達(dá)可誘導(dǎo)自噬進(jìn)而提高HLAⅠ、Ⅱ的表達(dá)并抑制細(xì)胞增殖，為卵巢癌患者提高免疫反應(yīng)增加抗腫瘤作用改善預(yù)后提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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ExpressionofBeclin1andHLAⅠ, ⅡinhumanSKOV3ovariancancercellsandtheircorrelation

JI Xiao-kun, WANG Xue-li, WANG Heng, ZHAO Yin-huan, WU Jia-ning, WANG Rui, WU Juan, DU Yun

(DepartmentofCancerDetection,theForthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011,China)

PurposeThe aim of this study was to investigate the relationship between autophagy gene Beclin1 and immune response effector classical HLAⅠ, Ⅱ in SKOV3 cells. To explore the role of Beclin1 in immunity in ovarian cancer cells which were transfected with the vector of Beclin1.MethodsRT-PCR and Western blot were used to detect the expression of Beclin1 and HLAⅠ, Ⅱ in SKOV3 cells. Fluorescence microscope was carried out to observe the unique autophagosome in SKOV3 cells. MTT was used to analyze the proliferation of the Beclin1 over-expressed SKOV3 cells.ResultsTransfection SKOV3 cells with Beclin1 vector could induce Beclin1 transcription and translation approximately 5 and 2 times compared with empty vector group respectively. The autophagosome stained by MDC was observed by fluorescence microscope. And much more green fluorescence signal was observed in Beclin1 vector group. RT-PCR and Western blot indicated that HLAⅠ, Ⅱinduced by transfection with extrinsic Beclin1. The allelic transcriptions of HLAⅠ-A, B, C and HLAⅡ-DP, DQ, DR in extrinsic Beclin1 group were approximately 2, 1.6, 3 and 2, 6, 3 times compared with empty vetcor group or untreated group, respectively. The results of Western blot showed that HLAⅠ, Ⅱin Beclin1 vector group induced as much as 2 and 1.6 times compared with empty vetcor group or untreated group, respectively. The results of MTT showed that the proliferation of SKOV3 cells treated with Beclin1 vector was significantly suppressed. The percentage of suppression in Beclin1 vector group at 24 h, 48 h, 72 h and 96 h is 42.6%, 37.8%, 24.35%, 14.81% compared with untreated group or empty vector group respectively.ConclusionThe enhancement of autophagy by over-expression of Beclin1 could induce HLAⅠ, Ⅱ transcription and translation in SKOV3 cells. The expression of HLAⅠ, Ⅱmay be responsible for triggering the immune response in ovarian cancer. Over-expression of Beclin1 could inhibit the proliferation of SKOV3 cells which were transfected with extrinsic Beclin1.

ovarian neoplasm； Beclin1； HLAⅠandⅡ； autophagy； immune response

R 737.31

A

1001-7399(2017)09-0954-05

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.09.003

河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院癌檢中心，石家莊 050011

紀(jì)曉坤，女，碩士，醫(yī)師。E-mail: jixiaokun01@163.com

杜 蕓，女，博士，主任醫(yī)師，通訊作者。E-mail: yydd40@126.com