• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    堯人山國家森林公園蟲生真菌資源初步調(diào)查

    2017-11-18 23:49:57周家喜鄒曉周葉鳴
    江蘇農(nóng)業(yè)科學 2017年18期
    關(guān)鍵詞:白僵菌國家森林公園蟲草

    周家喜+鄒曉+周葉鳴

    摘要:于2015年9月對貴州省堯人山國家森林公園蟲生真菌資源進行初步調(diào)查,共采集16個標本,基于ITS1-5.8S-ITS2 rDNA 基因序列,對采集標本分離菌株進行培養(yǎng)鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),標本分屬3科7屬10種,主要有白僵菌屬、棒束孢屬、蠟蚧菌屬、線性蟲草屬、被毛包屬、多頭霉屬、枝穗霉屬,其中白僵菌屬為優(yōu)勢屬,寄主以鱗翅目昆蟲為主。調(diào)查結(jié)果為該地區(qū)蟲生真菌資源的分布、多樣性和利用提供了參考。

    關(guān)鍵詞:蟲生真菌;資源調(diào)查;分類鑒定;堯人山國家森林公園;寄主;多樣性;標本統(tǒng)計;分子鑒定

    中圖分類號: Q-9 文獻標志碼: A 文章編號:1002-1302(2017)18-0244-05

    收稿日期:2016-04-21

    基金項目:國家自然科學基金(編號:31360031);國家自然科學基金重大項目(編號:31093440);貴州省農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)項目(編號:黔科合NY[2013]3034)。

    作者簡介:周家喜(1990—),男,云南保山人,碩士研究生,主要從事微生物生態(tài)學研究。E-mail:1552047449@qq.com。

    通信作者:鄒 曉,博士,教授,主要從事真菌資源與利用及生態(tài)學研究。E-mail:coprinus@126.com。 蟲生真菌指一類能寄生在寄主體內(nèi)和體表的真菌,包括引起寄主致死的昆蟲病原真菌如白僵菌,專性寄生昆蟲體表降低寄主活力的蟲寄生菌如蟲囊菌,與各種昆蟲共生的共生菌如多毛菌[1],寄生在線蟲、變形蟲、輪蟲等小動物上的捕食性真菌如捕食線蟲性真菌Duddingtonia flagran[2]。蟲生真菌寄主范圍較廣,除多種昆蟲外,還包括蜘蛛、螨類、線蟲、輪蟲、蜈蚣等多種動物[3]。

    自然界中蟲生真菌資源極為豐富,廣泛分布于壺菌門、子囊菌門、接合菌門、擔子菌門、半知菌門等各個亞門中[4]。據(jù)不完全統(tǒng)計,目前世界上報道的蟲生真菌約有100多個屬800多種[2]。我國蟲生真菌資源也很豐富,已發(fā)現(xiàn)記載的昆蟲病原真菌涉及40多個屬400多種[5],其中捕食和寄生線蟲真菌140種,蟲草屬真菌120種[6-7]。蟲生真菌與人類生活關(guān)系密切,涉及食用、藥用、生防等多個方面。在古代,我國就曾有食用白僵蠶、冬蟲夏草、蟬花等蟲生真菌的記載[8]。研究發(fā)現(xiàn),部分蟲生真菌(蛹蟲草、冬蟲夏草、蟬花等)具有強腎、潤肺、通精氣及抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老、降血脂血糖、提高人體免疫力等藥用功效[9-10]。由于蟲生真菌種類多、安全有效、容易大量生產(chǎn),所以在害蟲防治、植物病害、雜草防治等生物防治方面可發(fā)揮重要作用[11],常見的真菌殺蟲劑有球孢白僵菌[12]、金龜子綠僵菌[13]、玫煙色擬青霉[14]、蠟蚧輪枝菌[15]、湯普生被毛孢[16]等。此外,蟲生真菌還含有蟲草多糖、蟲草酸、腺苷等多種活性成分,在醫(yī)藥保健品、化妝品及其他領(lǐng)域用品的開發(fā)應(yīng)用上具有很大潛力[17]。但由于蟲生真菌分布十分廣泛,不同生境條件下分離獲得的同一種類的菌株間在數(shù)量和致病性上存在顯著差異[18]。實踐中,多數(shù)蟲生真菌的產(chǎn)孢量、生長速度、活性產(chǎn)物的產(chǎn)生、毒力等方面存在差異,而且存在退化比較嚴重的現(xiàn)象[11]。因此,開展蟲生真菌種類資源及分布研究,對發(fā)現(xiàn)新資源、開發(fā)新的生物制品及篩選高效生防菌具有十分重要的理論意義和應(yīng)用價值。

    堯人山國家森林公園位于貴州省黔南布依族苗族自治州三都水族自治縣都柳江畔(107°53′~107°58′E、24°54′~25°59′N),海拔560~1 365 m,總面積5 718.5 hm2;公園內(nèi)群山連綿,峰巒疊嶂,堪稱“水鄉(xiāng)綠海,黔南明珠”;氣候溫和濕潤,屬中亞熱帶季風氣候,年平均溫度為18 ℃,年降水量為 1 349.5 mm[19]。該區(qū)森林資源豐富,約有5/6的面積尚處于原始森林狀態(tài),森林覆蓋率達90.87%,素有“百里林?!敝Q;園內(nèi)生態(tài)環(huán)境穩(wěn)定,林深樹密,樹種繁多,動物資源豐富,是野生動物的樂園[20]。公園特殊的生態(tài)環(huán)境和優(yōu)越的氣候條件,蘊藏著豐富的蟲生真菌資源;豐富多樣的植被,溫暖濕潤的氣候,為昆蟲、蜘蛛、螨等節(jié)肢動物的生長、繁衍提供了場所和適宜的環(huán)境;濕暖的氣候、茂密的植被和豐富的動物區(qū)系,為病原菌的流行提供了良好的條件。

    筆者所在課題組于2015年9月對貴州省黔南布依族苗族自治州三都水族自治縣堯人山國家森林公園蟲生真菌資源進行初步調(diào)查,并根據(jù)ITS1-5.8S-ITS2系統(tǒng)發(fā)育及寄主分布分析其多樣性,以期豐富當?shù)氐纳镔Y源,為當?shù)叵x生真菌資源的開發(fā)利用和合理保護提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯20 g切塊煮沸,過濾取液,葡萄糖 20 g,瓊脂18 g,補水至1 L,121 ℃滅菌30 min。

    1.2 調(diào)查方法

    根據(jù)堯人山國家森林公園面積廣、森林植被覆蓋面大且受人為干擾程度低、山勢陡峻、溝谷交錯、水熱充沛的特點,采用定點調(diào)查、沿路踏查、普查等方式,詳細采集地表層、枯枝落葉及灌木叢中的蟲生真菌,并在采集中記錄蟲生真菌生長環(huán)境情況和罹病個體數(shù)。

    1.3 標本分離、鑒定

    1.3.1 標本分離 先用自來水將標本蟲體表面沖洗干凈,再用無菌水沖洗標本3次,接著用75%乙醇表面消毒5 s。掰斷蟲體部分,用已滅菌的接種針挑取蟲體斷面組織塊,接種到加有抗生素的PDA平板上,16 ℃培養(yǎng)30 d。挑取已分離得到的純菌落接種于PDA試管斜面中進行保存。

    1.3.2 DNA提取、擴增、測序 用接種針從PDA平板上挑取菌絲體,根據(jù)OMEGA試劑盒方法提取總DNA,并于-20 ℃保存。選用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS2(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)[21]擴增ITS區(qū)的rRNA。反應(yīng)體系25 μL:master mix 12.5 μL,ddH2O 8.5 μL,引物ITS1和ITS2均為1.0 μL,DNA模板2.0 μL。PCR反應(yīng)條件為:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性1 min,50 ℃退火 1 min,72 ℃延伸1 min,循環(huán)35次;最后72 ℃延伸 10 min,擴增產(chǎn)物送往上海的美國英杰生命技術(shù)有限公司純化測序并獲取序列。endprint

    1.3.3 分子鑒定 將得到的ITS序列提交GenBank的Blast程序進行比對,下載相似性大于93%的序列及其相關(guān)近緣屬菌株的ITS序列,首先用MEGA 5.2對序列進行比對剪切,然后通過最大似然法(ML),運行1 000次Bootstrap驗證,構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹[22]。

    1.4 寄主多樣性分析

    將采集到的罹病個體按寄主屬性進行分類整理,根據(jù)寄主的豐富度及種類分析蟲生真菌的多樣性及分布情況。

    1.5 多樣性指數(shù)分析

    采用辛普森指數(shù)(Simpson)、香農(nóng)-威納指數(shù)(Shannon-Wiener)及均勻度指數(shù)(Pielou)研究分析堯人山國家森林公園蟲生真菌的多樣性[23]。

    Simpson指數(shù):D=1-∑Pi2。

    式中:Pi為種的個體數(shù)占群落中總個體數(shù)的比例,Pi=ni/N,ni為第i種的個體數(shù),N為所有種的個體數(shù)。

    Shannon-wiener指數(shù):H′=-∑PilnPi;

    Pielou均勻度指數(shù):E=H′/Hmax。

    式中:H′為實際觀察的物種多樣性指數(shù);Hmax為最大的物種多樣性指數(shù),Hmax=lnS,S為群落中的總物種數(shù)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 蟲生真菌標本統(tǒng)計

    本次調(diào)查共采集到蟲生真菌罹病個體16個(圖1),并獲得其分離菌株16株,詳細信息見表1。

    2.2 蟲生真菌初步鑒定

    對于采集的標本,通過形態(tài)學比較,初步鑒定全為肉座菌目真菌,分屬3科7屬10種(表2、表3)。數(shù)量最多的一科為蟲草菌科,占總數(shù)的62.50%,包括棒束孢屬2種、蠟蚧菌屬1種、白僵菌屬2種;其次是線性蟲草菌科,占總數(shù)的31.25%,包括被毛孢屬1種、多頭霉屬1種、線性蟲草屬2種;最少的一科為生赤殼科,占總數(shù)的6.25%,只有枝穗霉屬1種。若以樣本數(shù)超過4為優(yōu)勢屬,那么該地區(qū)蟲生真菌優(yōu)勢屬為白僵菌屬,占總數(shù)的31.25%,主要為球孢白僵菌;其次是棒束孢屬,約占25.00%,主要有細腳棒束孢和環(huán)鏈棒束孢。

    2.3 蟲生真菌分子鑒定

    在蟲生真菌分離菌株DNA構(gòu)建的ITS1-5.8S-ITS2系統(tǒng)發(fā)育樹中,所有試用序列明顯分為7個不同分支,分別是棒束孢類、蠟蚧菌類、白僵菌類、被毛孢類、多頭霉類、枝穗霉類、線性蟲草類。菌株GZUIFR-SD03、GZUIFR-SD05、GZUIFR-SD06、GZUIFR-SD08、GZUIFR-SD13與球孢白僵菌(JX110371、HQ444271、KM249039、KT280276)和布氏白僵菌(LN886699)聚在白僵菌屬分支中。菌株GZUIFR-SD01、GZUIFR-SD02、GZUIFR-SD04、GZUIFR-SD09與細腳棒束孢(GU194179)、環(huán)鏈棒束孢(JQ425656)等聚在棒束孢屬分支中。菌株GZUIFR-SD15與刀孢蠟蚧菌(EU918702)、絲枝蠟蚧霉(JX241644)等聚在蠟蚧菌屬分支中。菌株GZUIFR-SD11與中國多頭霉(NR119928)、P. tomentosus(KF049666)等聚在多頭霉屬分支中。菌株GZUIFR-SD07與瘤狀被毛孢(EF194146)、鹿兒島被毛孢(KM652172)等一起聚在被毛孢屬分支中。菌株GZUIFR-SD10與粉紅粘帚霉(KT387608)、羅杰斯無性穗霉(KC806290)等聚在枝穗霉屬分支中。菌株GZUIFR-SD14與蟻窩線蟲草(AB222679)聚在一起,菌株GZUIFR-SD12和GZUIFR-SD16與蜂頭線蟲草(JN943351)聚在一起,均屬于線性蟲草屬分支。該結(jié)果與初步形態(tài)鑒定結(jié)果一致,從分子水平表明堯人山國家森林公園蟲生真菌種類豐富(圖2)。

    2.4 蟲生真菌寄主多樣性分析

    根據(jù)本次調(diào)查結(jié)果可知,該區(qū)蟲生真菌寄主種類多、范圍廣(表4)。如圖3所示,包括鱗翅目、膜翅目、同翅目、鞘翅目、雙翅目等昆蟲及蜘蛛等多種動物。其中,鱗翅目昆蟲最多,占37.50%,主要有鱗翅目幼蟲和蛹、毛蟲、刺蛾幼蟲等;其次是膜翅目和同翅目,均占18.75%,膜翅目主要包括蜂和螞蟻等,同翅目包括蟬和蝽;寄主為蜘蛛的占12.50%;最少的為鞘翅目和雙翅目,各占6.25%,發(fā)現(xiàn)的鞘翅目主要為瓢

    蟲,雙翅目主要是蒼蠅。結(jié)果表明,堯人山國家森林公園蟲生真菌資源豐富,廣泛分布于昆蟲、蜘蛛等多種節(jié)肢動物上。

    2.5 多樣性分析

    從表4中可以看出,堯人山蟲生真菌群落多樣性偏低(D=0.79,H′=1.84),均勻度較高(E=0.95)。寄主多樣性同樣偏低(D=0.77,H′=1.61),均勻指數(shù)較真菌群落均勻指數(shù)低(E=0.88)。

    3 結(jié)論與討論

    堯人山國家森林公園蟲生真菌資源豐富多樣,分布廣泛,初步調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)包括3科8屬10種,分別是蟲草菌科(棒束孢屬、白僵菌屬、蠟蚧菌屬)、線性蟲草菌科(多頭霉屬、被毛孢屬、線性蟲草屬)、生赤殼科(枝穗霉屬)。其中,白僵菌屬為優(yōu)勢屬,球孢白僵菌為主要種群。

    關(guān)于貴州地區(qū)蟲生真菌資源調(diào)查已有報道,該地區(qū)的蟲生真菌種類十分豐富,蟲草屬為優(yōu)勢屬,但在本次調(diào)查中卻沒有發(fā)現(xiàn),而堯人山優(yōu)勢屬白僵菌屬卻是貴州的廣布屬,廣泛分布于貴陽、湄潭、遵義及梵凈山等地[24-28]。此外,枝穗霉及部分線性蟲草在以上保護區(qū)卻少有發(fā)現(xiàn)。這可能與蟲生真菌的發(fā)生與溫濕度環(huán)境及寄主有關(guān),蟲草屬和線性蟲草屬真菌多發(fā)生于高濕的闊葉林環(huán)境且對寄主專一(少為廣譜),導(dǎo)致這部分真菌發(fā)生量減少且零星分布,調(diào)查難度增大,而白僵菌屬可寄生多種昆蟲,分布廣泛,容易調(diào)查。

    在自然環(huán)境中,蟲生真菌的繁衍、分布與氣候環(huán)境、土壤性質(zhì)、動植被豐富度、海拔高度、人類活動以及歷史環(huán)境變遷等有關(guān)[29]。堯人山地區(qū)植被豐富,鱗翅目、雙翅目、同翅目、鞘翅目、蜘蛛等節(jié)肢動物廣泛分布于原始森林中,其中鱗翅目昆蟲分布最廣,豐富多樣的動物資源為該地區(qū)復(fù)雜的病原真菌附著提供了場所和營養(yǎng)條件。季風氣候顯著,環(huán)境溫和濕潤,大大提高了該地區(qū)病原真菌的寄生率和存活率。此次調(diào)查結(jié)果顯示,該區(qū)蟲生真菌多樣性指數(shù)偏低,均勻度較高,這可能與本次獲得標本數(shù)較少有關(guān)。堯人山國家森林公園蟲生真菌的調(diào)查,豐富了當?shù)氐纳镔Y源,為該地區(qū)蟲生真菌資源的分布、多樣性研究及開發(fā)利用提供了有益參考。endprint

    參考文獻:

    [1]梁宗琦. 蟲生真菌的多樣性[J]. 生物多樣性,1996,4(4):235-241.

    [2]王 瑞,孫曉燕,馬亞囡,等. 捕食性真菌Duddingtonia flagrans胞外蛋白質(zhì)的生化性質(zhì)研究[J]. 中國獸醫(yī)科學,2015,45(8):776-780.

    [3]梁宗琦,梁建東,陳萬浩,等. 一蟻巢中束梗孢類昆蟲病原真菌的多型現(xiàn)象Ⅱ. 隱存的一個多頭束霉新種:蟻生多頭束霉[J]. 微生物學通報,2015,43(2):379-385.

    [4]王成樹. 蟲生真菌研究與應(yīng)用的發(fā)展與機遇——2012年蟲生真菌??蜓訹J]. 菌物學報,2012,31(3):305-306.

    [5]王利軍,譚萬忠,羅華東,等. 蟲生真菌及其在害蟲生物控制中的應(yīng)用現(xiàn)狀與展望[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學,2010,39(4):119-125.

    [6]金 娜,劉 倩,簡 恒. 植物寄生線蟲生物防治研究新進展[J]. 中國生物防治學報,2015,31(5):789-800.

    [7]梁宗琦. 中國真菌志[M]. 北京:科學出版社,2007:1-8.

    [8]董彩虹,李文佳,李增智,等. 我國蟲草產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀,問題及展望——蟲草產(chǎn)業(yè)發(fā)展金湖宣言[J]. 菌物學報,2016,35(1):1-15.

    [9]劉愛英. 中國蟬花資源研究應(yīng)用[M]. 貴陽:貴州科技出版社,2012,3-9.

    [10]余伯成,唐永范,唐 亮,等. 蟲草素的藥理作用研究進展[J]. 現(xiàn)代藥物與臨床,2011,26(5):349-352.

    [11]陳曉琳,樊美珍,李增智. 蟲生真菌育種工作研究進展[J]. 生物學雜志,2008,25(6):61-62.

    [12]劉愛英,鄒 曉,胡海燕,等. 煙草甲致病真菌的初步篩選[J]. 中國生物防治,2008,24(2):186-188.

    [13]何學友,陳順立,楊 希,等. 金龜子綠僵菌在森林土壤中的分布及對松墨天牛致病性測定[J]. 菌物學報,2007,26(2):289-294.

    [14]梁宗琦,劉愛英,陳月碧,等. 昆蟲病原真菌的研究利用——Ⅰ:玫煙色擬青霉不同菌株對菜青蟲的致病效果和固體培養(yǎng)[J]. 植物保護,1980,6:12-14.

    [15]袁盛勇,孔 瓊,張 虹,等. 蠟蚧輪枝菌MZ041024菌株對溫室白粉虱和吹棉蚧的室內(nèi)毒力[J]. 西南師范大學學報(自然科學版),2007,32(1):111-114.

    [16]韓智杰,瞿嬌嬌,張曉娜,等. 湯普森被毛孢對二斑葉螨致死率的建模分析[J]. 應(yīng)用昆蟲學報,2013,50(2):406-412.

    [17]黃秀華,方書亮,溫 魯. 用高蟲草素菌粉開發(fā)藥品和保健品[J]. 中國醫(yī)藥科學,2012,2(13):157-158.

    [18]王 爽,李新民,劉春來,等. 東北地區(qū)土壤中高毒力蟲生真菌菌株的篩選[J]. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學,2015(1):50-56.

    [19]楊秀標,文光培. 堯人山里好風光[J]. 森林與人類,2015(9):84-86.

    [20]貴州省林業(yè)廳森林管理辦公室. 貴州國家森林公園[J]. 森林與人類,2010(3):84-96.

    [21]White T. Analysis of phylogenetic relationships by amplification and direct sequencing of ribosomal RNA genes. PCR protocols:a guide to methods and applications[M]. New York:Academic,1990,15-22.

    [22]Kumar S,Tamura K,Nei M. MEGA3:integrated software for molecular evolutionary genetics analysis and sequence alignment[J]. Briefings in Bioinformatics,2004,5(2):150-163.

    [23]陳名君,劉玉軍,周 娜,等. 皇甫山蟲生真菌物種多樣性研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)大學學報,2009,36(4):564-567.

    [24]梁宗琦,劉愛英,馮冬梅. 梵凈山自然保護區(qū)的一些蟲生真菌[J]. 真菌學報,1993,12(2):110-117.

    [25]梁宗琦,劉愛英,黃建忠,等. 寬闊水自然保護區(qū)的蟲草及其相關(guān)真菌Ⅰ[J]. 真菌學報,1996,15(4):264-271.

    [26]梁宗琦,劉愛英,黃建忠,等. 闊水自然保護區(qū)的蟲草及其相關(guān)真菌Ⅱ[J]. 菌物系統(tǒng),1997,16(1):61-67.

    [27]梁宗琦,劉愛英,黃建忠,等. 桫欏自然保護區(qū)的蟲草及其相關(guān)真菌[J]. 菌物系統(tǒng),2002,21(1):9-14.

    [28]梁宗琦. 貴州的部分昆蟲病毒,細菌和原生動物[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學,1984(6):27-30.

    [29]李文英,賀運春,王建明,等. 山西省蟲生真菌生態(tài)多樣性研究[J]. 生物多樣性,2003,11(1):53-58.臧彩云,沈袁玲,顧敏京,等. 零價鐵對灘涂土壤重金屬鎘形態(tài)及有效性的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學,2017,45(18):249-251.endprint

    猜你喜歡
    白僵菌國家森林公園蟲草
    蟲草素提取物在抗癌治療中顯示出巨大希望
    中老年保健(2022年2期)2022-08-24 03:20:44
    蟲草素提取物在抗癌治療中顯示出巨大希望
    東臺黃海國家森林公園:以綠之名,拓荒出“養(yǎng)心”景致
    華人時刊(2020年21期)2021-01-14 01:33:12
    基于文本挖掘的阿爾山國家森林公園旅游形象感知研究
    科技傳播(2019年24期)2019-06-15 09:29:30
    不同儲存溫度對白僵菌孢子活性的影響
    三門江國家森林公園旅游產(chǎn)品定位及其市場開發(fā)策略
    白僵菌對酚類轉(zhuǎn)化及僵蠶中4-O-甲基葡萄糖苷化產(chǎn)物的研究進展
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    論峴山國家森林公園旅游資源的歷史由來和文化特色
    劍南文學(2016年14期)2016-08-22 03:37:24
    蛹蟲草液體發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選
    2種方法復(fù)壯馬尾松毛蟲球孢白僵菌的研究
    午夜日韩欧美国产| 特大巨黑吊av在线直播| www.www免费av| АⅤ资源中文在线天堂| 丰满的人妻完整版| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产精品野战在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲精品456在线播放app | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 成人av在线播放网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 美女黄网站色视频| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 久久欧美精品欧美久久欧美| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩免费av在线播放| 成人av一区二区三区在线看| 麻豆成人av在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲最大成人中文| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 怎么达到女性高潮| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产高清videossex| 一级作爱视频免费观看| 舔av片在线| 久久香蕉国产精品| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 一进一出好大好爽视频| 老汉色∧v一级毛片| 99视频精品全部免费 在线 | 成人国产一区最新在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产亚洲av高清不卡| 成年女人看的毛片在线观看| 香蕉久久夜色| 亚洲avbb在线观看| 久久久国产成人精品二区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 午夜影院日韩av| 亚洲电影在线观看av| 老汉色∧v一级毛片| 一区二区三区国产精品乱码| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 99热这里只有精品一区 | 午夜成年电影在线免费观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 在线观看日韩欧美| 又爽又黄无遮挡网站| www.精华液| 看免费av毛片| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 99国产综合亚洲精品| 在线免费观看不下载黄p国产 | 国产一区二区激情短视频| 香蕉国产在线看| 久久热在线av| 日本黄大片高清| 久久天堂一区二区三区四区| 色播亚洲综合网| 午夜福利成人在线免费观看| 日韩精品中文字幕看吧| 丰满的人妻完整版| 母亲3免费完整高清在线观看| 精品日产1卡2卡| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 成人特级av手机在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日韩欧美国产在线观看| 久久香蕉精品热| 国产免费av片在线观看野外av| 久久亚洲真实| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 亚洲av五月六月丁香网| 免费看a级黄色片| 舔av片在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 中文资源天堂在线| 国产三级在线视频| 国产午夜精品久久久久久| www.www免费av| svipshipincom国产片| 色综合婷婷激情| 日本五十路高清| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久九九热精品免费| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品电影一区二区在线| 亚洲九九香蕉| 精品日产1卡2卡| 曰老女人黄片| 99热只有精品国产| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 12—13女人毛片做爰片一| 哪里可以看免费的av片| 国产97色在线日韩免费| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 中文字幕人成人乱码亚洲影| a在线观看视频网站| 久久午夜综合久久蜜桃| www.自偷自拍.com| 欧美在线一区亚洲| 黄色丝袜av网址大全| 小说图片视频综合网站| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲人成伊人成综合网2020| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲美女视频黄频| 1024手机看黄色片| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久99热这里只有精品18| АⅤ资源中文在线天堂| 一进一出抽搐动态| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲av美国av| 国产欧美日韩一区二区精品| 搡老熟女国产l中国老女人| 搡老岳熟女国产| 欧美黑人巨大hd| 99久久成人亚洲精品观看| www日本在线高清视频| 美女免费视频网站| 高清毛片免费观看视频网站| 一级毛片高清免费大全| 亚洲国产精品999在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 丁香六月欧美| av国产免费在线观看| a级毛片在线看网站| 国内精品久久久久精免费| 在线观看66精品国产| 美女午夜性视频免费| 亚洲七黄色美女视频| 人妻久久中文字幕网| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲真实伦在线观看| 免费看美女性在线毛片视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 看免费av毛片| 悠悠久久av| 天堂动漫精品| 亚洲七黄色美女视频| 欧美3d第一页| 一个人看视频在线观看www免费 | 他把我摸到了高潮在线观看| 十八禁人妻一区二区| 天堂影院成人在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 极品教师在线免费播放| tocl精华| 中文字幕最新亚洲高清| 老司机在亚洲福利影院| or卡值多少钱| 精品久久久久久久久久久久久| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费大片18禁| 国产精品一区二区免费欧美| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久久久国内视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 久99久视频精品免费| 无限看片的www在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 成年版毛片免费区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 久久人妻av系列| 免费无遮挡裸体视频| 日韩免费av在线播放| 1024香蕉在线观看| 欧美在线一区亚洲| 首页视频小说图片口味搜索| 麻豆一二三区av精品| 日本成人三级电影网站| 国产又色又爽无遮挡免费看| 欧美激情在线99| 亚洲国产中文字幕在线视频| 一二三四在线观看免费中文在| 国产野战对白在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 中文字幕久久专区| 国产免费av片在线观看野外av| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 日本一本二区三区精品| 午夜福利在线在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产在线精品亚洲第一网站| 超碰成人久久| 国产一区二区三区视频了| 天堂动漫精品| av视频在线观看入口| 一级作爱视频免费观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久精品人妻少妇| 久久香蕉国产精品| 欧美zozozo另类| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲人成伊人成综合网2020| 一级毛片精品| 91字幕亚洲| 男女视频在线观看网站免费| 观看免费一级毛片| 国产真人三级小视频在线观看| 日本a在线网址| 一级毛片女人18水好多| 欧美日韩黄片免| 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品av久久久久免费| 黄色成人免费大全| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产亚洲av高清不卡| 国产高清激情床上av| 嫁个100分男人电影在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 国产黄片美女视频| 黄色女人牲交| 熟女人妻精品中文字幕| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美午夜高清在线| 久久久色成人| 午夜日韩欧美国产| 免费看a级黄色片| 亚洲精华国产精华精| 制服人妻中文乱码| 欧美不卡视频在线免费观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 免费搜索国产男女视频| 99久久成人亚洲精品观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品 欧美亚洲| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产免费av片在线观看野外av| 久99久视频精品免费| www日本在线高清视频| 波多野结衣高清无吗| 国产一区二区在线av高清观看| 国产成人欧美在线观看| 99国产精品99久久久久| 亚洲精品一区av在线观看| 国产av不卡久久| 在线观看免费午夜福利视频| 人人妻人人看人人澡| 午夜福利在线在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品日产1卡2卡| 日本在线视频免费播放| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 亚洲精华国产精华精| 欧美另类亚洲清纯唯美| 在线观看66精品国产| 亚洲av美国av| 亚洲成人久久爱视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 午夜福利在线在线| 日本免费a在线| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲专区字幕在线| 午夜福利高清视频| 欧美乱妇无乱码| 欧美日韩精品网址| 99国产综合亚洲精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美日本视频| 国产三级黄色录像| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品电影一区二区在线| 欧美日韩一级在线毛片| 一区二区三区高清视频在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产精品 国内视频| 国产免费男女视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产成人啪精品午夜网站| 精品久久久久久,| 国产精品 欧美亚洲| 国产视频一区二区在线看| 国产黄色小视频在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 哪里可以看免费的av片| 精品一区二区三区av网在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 又爽又黄无遮挡网站| 成人国产一区最新在线观看| 日本 欧美在线| 91在线观看av| 长腿黑丝高跟| 欧美中文综合在线视频| 国产一区二区在线观看日韩 | 在线观看美女被高潮喷水网站 | 日韩免费av在线播放| 午夜免费激情av| 看片在线看免费视频| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲avbb在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 日韩有码中文字幕| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲九九香蕉| 亚洲av成人一区二区三| 久久香蕉国产精品| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久国产精品影院| 又大又爽又粗| 99久久精品国产亚洲精品| 男人舔女人的私密视频| 一进一出抽搐动态| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲av熟女| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产成人欧美在线观看| 搡老岳熟女国产| 国产97色在线日韩免费| 真实男女啪啪啪动态图| 88av欧美| 亚洲人成网站高清观看| 午夜福利高清视频| www.www免费av| av天堂中文字幕网| 免费人成视频x8x8入口观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产高清视频在线观看网站| 脱女人内裤的视频| 色综合站精品国产| 看片在线看免费视频| 日韩三级视频一区二区三区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲熟妇熟女久久| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久久水蜜桃国产精品网| 黑人欧美特级aaaaaa片| 97超视频在线观看视频| xxx96com| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产激情欧美一区二区| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 嫩草影院精品99| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 99国产综合亚洲精品| 欧美日本视频| 精品免费久久久久久久清纯| 不卡av一区二区三区| 精品免费久久久久久久清纯| 又黄又爽又免费观看的视频| a级毛片在线看网站| 国语自产精品视频在线第100页| а√天堂www在线а√下载| 一本综合久久免费| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲黑人精品在线| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 最近最新中文字幕大全免费视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 免费大片18禁| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 91在线精品国自产拍蜜月 | 两个人的视频大全免费| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 午夜福利视频1000在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 免费在线观看亚洲国产| 91av网一区二区| 免费看日本二区| www.自偷自拍.com| 又爽又黄无遮挡网站| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产淫片久久久久久久久 | 国产精品永久免费网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 老司机午夜十八禁免费视频| 搡老岳熟女国产| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲自拍偷在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产乱人视频| 欧美3d第一页| 神马国产精品三级电影在线观看| 女人被狂操c到高潮| 啦啦啦免费观看视频1| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 精华霜和精华液先用哪个| 精品无人区乱码1区二区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产日本99.免费观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 热99re8久久精品国产| 人人妻人人澡欧美一区二区| 操出白浆在线播放| 无遮挡黄片免费观看| 欧美日韩一级在线毛片| 人人妻人人澡欧美一区二区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 成人国产综合亚洲| 久久人妻av系列| 国产成人系列免费观看| 国产真实乱freesex| 国产乱人伦免费视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品国内亚洲2022精品成人| 美女午夜性视频免费| 青草久久国产| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 91麻豆精品激情在线观看国产| 成年免费大片在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 精品久久久久久久末码| 丁香六月欧美| 深夜精品福利| 性欧美人与动物交配| 日本黄大片高清| 中国美女看黄片| 亚洲在线观看片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 在线看三级毛片| 亚洲国产精品合色在线| 我要搜黄色片| 一级毛片女人18水好多| 久久天堂一区二区三区四区| 成熟少妇高潮喷水视频| 18禁观看日本| 在线观看午夜福利视频| 757午夜福利合集在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 一本精品99久久精品77| 亚洲精品在线观看二区| 麻豆成人午夜福利视频| 不卡av一区二区三区| 久久精品影院6| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品1区2区在线观看.| 久久香蕉国产精品| 首页视频小说图片口味搜索| 国产一区二区三区视频了| 国产精品 国内视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 看免费av毛片| 黑人操中国人逼视频| 午夜免费成人在线视频| 可以在线观看的亚洲视频| 少妇的逼水好多| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲成a人片在线一区二区| 悠悠久久av| e午夜精品久久久久久久| 亚洲精品一区av在线观看| 老司机福利观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产欧美日韩一区二区三| 窝窝影院91人妻| 国产三级黄色录像| 国产精品国产高清国产av| 母亲3免费完整高清在线观看| 国内精品美女久久久久久| 精品一区二区三区视频在线 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 在线观看午夜福利视频| 在线观看免费视频日本深夜| 女警被强在线播放| 男女午夜视频在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 一区福利在线观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 九色成人免费人妻av| 怎么达到女性高潮| 国产精品女同一区二区软件 | 国产三级黄色录像| 757午夜福利合集在线观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 999久久久精品免费观看国产| 麻豆成人午夜福利视频| 日韩欧美精品v在线| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 制服人妻中文乱码| 国产一区二区在线av高清观看| 免费看光身美女| 精品免费久久久久久久清纯| 久久久久免费精品人妻一区二区| 麻豆av在线久日| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 可以在线观看的亚洲视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 日本在线视频免费播放| 免费电影在线观看免费观看| 午夜日韩欧美国产| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 性色av乱码一区二区三区2| 又黄又爽又免费观看的视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲欧美日韩东京热| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲电影在线观看av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美在线黄色| 日韩大尺度精品在线看网址| 五月玫瑰六月丁香| 美女被艹到高潮喷水动态| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产成人福利小说| 亚洲av五月六月丁香网| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲精品在线观看二区| 老司机午夜福利在线观看视频| 在线永久观看黄色视频| 99热这里只有是精品50| 久久香蕉国产精品| h日本视频在线播放| 久久九九热精品免费| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产av麻豆久久久久久久| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产乱人伦免费视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 国产伦精品一区二区三区四那| 久久中文字幕一级| 不卡一级毛片| 黄色片一级片一级黄色片| 色综合亚洲欧美另类图片| 中文字幕av在线有码专区| 欧美成人性av电影在线观看| 三级国产精品欧美在线观看 | www日本黄色视频网| 国产单亲对白刺激| 欧美午夜高清在线| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久精品91无色码中文字幕| 男女午夜视频在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 天天添夜夜摸| 国产极品精品免费视频能看的| 俺也久久电影网| 成人三级黄色视频| 一级毛片精品| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 一进一出抽搐gif免费好疼| 最新在线观看一区二区三区| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲欧美日韩东京热| 美女cb高潮喷水在线观看 | 性色avwww在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 久久伊人香网站| 99国产综合亚洲精品| 黄色成人免费大全| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产欧美日韩一区二区三| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 99riav亚洲国产免费| 色在线成人网| 中文在线观看免费www的网站| 免费大片18禁| 国产精品亚洲一级av第二区| 性欧美人与动物交配| 宅男免费午夜| 国内精品一区二区在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 美女午夜性视频免费| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲av电影不卡..在线观看| 波多野结衣高清作品| 国产精品1区2区在线观看.| 日韩有码中文字幕| 18禁国产床啪视频网站| 中文资源天堂在线| 久9热在线精品视频| 色在线成人网| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产成人精品无人区| 久久欧美精品欧美久久欧美| svipshipincom国产片| 日韩欧美免费精品| 国产精品亚洲一级av第二区| 免费看日本二区| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 精品国产美女av久久久久小说|