基于分散固相萃取-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定蔬菜中多種除草劑殘留的方法

平華，李楊，李冰茹，何昭穎，劉繼培，馬智宏

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基于分散固相萃取-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定蔬菜中多種除草劑殘留的方法

平華1,2，李楊1，李冰茹1，何昭穎1，劉繼培3，馬智宏1

（1北京市農(nóng)林科學(xué)院北京農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究中心，北京100097；2沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)信息與電氣工程學(xué)院，沈陽110866；3北京市大興區(qū)土肥工作站，北京102600）

研究吸附填料不同添加量對除草劑回收率的影響，以建立蔬菜中24種除草劑殘留的分散固相萃取-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）檢測方法。蔬菜樣品加入乙腈振蕩提取，將凈化填料N-丙基乙二胺（PSA）（不同添加量0.05 g、0.10 g、0.20 g）加入提取液中凈化。采用UPLC-MS/MS測定，對液相色譜柱、流動相條件和質(zhì)譜條件（錐孔電壓、碰撞能量）進行優(yōu)化，電噴霧電離，多反應(yīng)監(jiān)測模式檢測。以0.1%的甲酸水-乙腈為流動相進行梯度洗脫，各化合物峰形尖銳，靈敏度高，UPLC-MS/MS上機10 min內(nèi)完成了24種除草劑的檢測。添加0.10 g和0.20 g PSA時，三氟羧草醚、2,4-滴、唑嘧磺草胺、噻吩磺隆、苯磺隆、氯嘧磺隆6種除草劑回收率明顯降低；其余除草劑隨著PSA添加量的增加回收率沒有明顯的變化，在75.5%—114.7%之間；吸附填料PSA添加量為0.05 g時，24種除草劑回收率為65.6%—114.7%。24種除草劑在1.0—250 μg·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.9946—0.9998。蔬菜中24種除草劑的方法檢出限在1.2—160.8 μg·kg-1，定量限在4.0—536.0 μg·kg-1，可以滿足定量分析的要求。在空白蔬菜樣品中添加50、100、200 μg·kg-13個質(zhì)量分?jǐn)?shù)的24種除草劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，24種除草劑的回收率在66.5%—116%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.3%—9.7%。采用建立的測定方法，對38份蔬菜樣本進行檢測發(fā)現(xiàn)，所有蔬菜樣品中僅檢出阿特拉津殘留，檢出率為57.9%，檢出范圍為未檢出—0.84 μg·kg-1，其余23種除草劑均未檢出。該方法簡便、快速、節(jié)省溶劑、靈敏度高，可用于大批量蔬菜中除草劑殘留快速檢測。

超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法；蔬菜；除草劑；分散固相萃取

0 引言

【研究意義】目前世界上除草劑品種超過300個，每年有效成分總產(chǎn)量70×104—80×104t，占化學(xué)農(nóng)藥總產(chǎn)量的40%—50%[1]。隨著中國農(nóng)業(yè)栽培耕作方式趨向于規(guī)模化和集約化發(fā)展，除草劑的使用量日漸增大，其銷售總額已超過殺蟲劑和殺菌劑，成為第一大類農(nóng)藥[2]。除草劑在使用后，大部分被吸附在土壤中，除了被雜草吸收外，還會被種植的農(nóng)作物吸收，一旦進入食物鏈，會對人類健康造成危害。許多國家都開始制定除草劑殘留限量，美國環(huán)保署規(guī)定大多數(shù)產(chǎn)品中三嗪類除草劑的最大殘留限量為0.25 mg·kg-1，歐盟規(guī)定特丁津在蔬菜中最大殘留限量為0.05 mg·kg-1[3]。中國食品中農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)GB 2763—2016《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》中有關(guān)除草劑在蔬菜中的最低殘留限量為 0.05 mg·kg-1。因此，需要建立蔬菜中除草劑快速提取、分離及測定方法?！厩叭搜芯窟M展】目前蔬菜中除草劑常用的凈化方法有固相萃取、固相微萃取、凝膠滲透色譜和分散固相萃取法[4-8]等，其中分散固相萃取法快速、操作簡便，是目前廣泛使用的前處理方法[9]。常用的檢測方法有氣相色譜法[10]、高效液相色譜法[11-12]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[13]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[14-15]、酶聯(lián)免疫法[16]等。近年來發(fā)展起來的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）具有比傳統(tǒng)方法快5—10倍的優(yōu)勢，可以根據(jù)待測物的性質(zhì)選擇不同的離子化模式，檢測不同化學(xué)性質(zhì)的除草劑，有廣闊的應(yīng)用前景[17-20]?！颈狙芯壳腥朦c】目前檢測方法多為針對三嗪類、磺酰脲類、苯脲類等某一種類型的除草劑，考慮到不同類型除草劑之間的聯(lián)合毒性效應(yīng)，本研究擬對目前使用量較大的三嗪類、酰胺類、磺酰脲類、二苯醚類等7種不同類型的24種除草劑進行同時測定?！緮M解決的關(guān)鍵問題】研究不同凈化填料及不同添加量對蔬菜提取液凈化效果，以簡化樣品前處理過程；研究不同類型色譜柱、不同流動相、不同質(zhì)譜條件對24種除草劑分離效果及靈敏度的影響，以提高定量的準(zhǔn)確性。將分散固相萃取法與UPLC-MS/MS技術(shù)相結(jié)合，以提高檢測效率，實現(xiàn)節(jié)省溶劑，保護檢測人員健康和環(huán)境的目的，為大批量樣品的檢測提供簡便、快速、準(zhǔn)確的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

ACQUITY超高效液相色譜儀（美國Waters公司）；Xevo TQ三重四極桿質(zhì)譜儀，配有ESI電離源（Waters公司）；3K30高速冷凍離心機（美國Sigma公司）；純水機（美國Pall公司）；R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士BUCHI公司）；空氣浴振蕩器（哈爾濱市東明醫(yī)療儀器廠）；0.2 μm微孔過濾膜（美國Gelman Laboratory公司）；乙腈（HPLC級，美國Fisher公司）；36%鹽酸（優(yōu)級純，北京化工廠）；無水硫酸鎂（分析純，北京化工廠），使用前馬弗爐500℃加熱5 h，冷卻后放入干燥器備用；鍵合硅固相萃取吸附劑C18填料（日本YMC公司）；N-丙基乙二胺（PSA）吸附劑填料（天津博納艾杰爾科技有限公司）。

阿特拉津、西瑪津、草凈津、密草通、敵草凈、另丁津、西草凈、撲草凈、撲滅通、撲滅津、莠滅凈、特丁津、特丁凈、異丙甲草胺、乙草胺、噻吩磺隆、三氟羧草醚、烯草酮、苯磺隆、唑嘧磺草胺、異噁草松、氯嘧磺隆、2,4-滴和氟磺胺草醚24種除草劑標(biāo)準(zhǔn)品（純度均大于98%，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所）。將24種除草劑標(biāo)準(zhǔn)品配成混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，實驗時用初始流動相配成不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2 前處理方法

蔬菜樣品勻漿，精確稱取5.0 g樣品，加入乙腈溶液10.0 mL，振蕩30 min，再加入4.0 g無水硫酸鎂和1.0 g氯化鈉，劇烈振蕩1 min，4℃離心3 min（5 000 r/min）。精確吸取1.0 mL上清液至離心管中，加入0.05 g PSA粉末，振蕩1 min，4℃離心3 min（5 000 r/min），取0.5 mL上清液，加入乙腈﹕水（1﹕1）0.5 mL，混勻后過0.2 μm濾膜，UPLC-MS/MS測定。

實驗中對PSA、C18兩種不同的凈化方法分別進行了優(yōu)化，在上清液中分別加入0.05 g PSA和0.05 g C18比較其凈化效果，選出合適的凈化填料；然后分別在上清液中添加0.05 g、0.10 g和0.20 g PSA，比較PSA不同添加量的凈化效果，最終采用上述優(yōu)化后的方法。

1.3 分析條件

1.3.1 超高效液相色譜條件 色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；色譜柱溫：40℃；樣品室溫度：10℃；進樣體積：5 μL；流動相A：乙腈，流動相B：0.1%甲酸水，流速為0.3 mL·min-1；梯度洗脫條件：0—0.25 min，10%—30% A；0.25—7.0 min，30%—70% A；7.0—8.0 min，70%—95% A；8.0—10.0 min，10% A。

采用HSS T3 C18、BEH C18兩種不同的色譜柱分別進行實驗，比較24種除草劑在色譜柱上的峰形、分離效果及響應(yīng)值，以選擇一個適宜的色譜柱。對流動相條件進行優(yōu)化，在流動相B（水相）中分別添加0.05%、0.1%、0.2% 3種不同比例甲酸時，對比24種除草劑的峰形、分離度和靈敏度，選擇一個合適的甲酸添加比例，最終采用上述優(yōu)化后的條件。

1.3.2 質(zhì)譜條件 離子源：電噴霧電離源（ESI）；掃描方式：正離子和負(fù)離子模式；監(jiān)測模式：多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）；毛細(xì)管電壓：1.0 kV（正離子模式，ESI+）；1.0 kV（負(fù)離子模式，ESI-）；霧化氣溫度：400℃；去溶劑氣流量：800 L·h-1；碰撞氣流量：0.15 mL·min-1；離子源溫度：150℃。

采用24種除草劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液優(yōu)化質(zhì)譜條件。根據(jù)化合物的性質(zhì)，采用ESI+或ESI-掃描模式進行一級質(zhì)譜分析，分別選擇準(zhǔn)分子離子[M+H]+或[M-H]-為母離子，優(yōu)化了24種除草劑的錐孔電壓（2—80 V），選擇每個化合物母離子響應(yīng)值最高時的電壓為最佳錐孔電壓；然后優(yōu)化了24種除草劑二級質(zhì)譜的碰撞電壓（2—80 eV），選擇每個化合物的兩個碎片離子響應(yīng)值最高時的電壓為最佳碰撞電壓，兩個碎片離子響應(yīng)值最大的為定量離子，反之為定性離子。

1.4 實際蔬菜樣品的測定

為了驗證該方法的適用性，在北京昌平區(qū)、順義區(qū)蔬菜大棚分別采集了黃瓜、小白菜、蒿子桿、尖椒、西紅柿、茄子、豆角、韭菜、洋蔥等38份蔬菜樣本，采用上述優(yōu)化好的方法對蔬菜中24種除草劑的殘留情況進行了測定。葉菜類：小白菜、蒿子桿、韭菜、大白菜、芥菜、生菜、油菜、圓白菜；茄果類：茄子、辣椒、西紅柿、圣女果；瓜類：黃瓜、苦瓜；豆類：豆角、豇豆；鱗莖類：蔥頭。計算不同類型蔬菜中除草劑檢出率，分析比較了不同類型蔬菜中除草劑殘留量大小。

2 結(jié)果

2.1 凈化方法的選擇

C18、PSA為分散固相萃取中常用的凈化填料，具有簡便、快速、凈化效率高等特點[21]。試驗對比了0.05 gPSA和0.05 g C18凈化效果，發(fā)現(xiàn)提取液用PSA凈化后回收率平均值為94.6%，C18凈化后回收率平均值為76.6%，PSA凈化效果優(yōu)于C18，因此選擇PSA為凈化填料。隨后比較了PSA不同添加量的凈化效果，添加0.05 g、0.10 g和0.20 g PSA時，三氟羧草醚、2,4-滴、唑嘧磺草胺、噻吩磺隆、苯磺隆、氯嘧磺隆6種除草劑的回收率分別在65.6%—100.8%、43.7%—79.7%和24.3%—61.6%；其余18除草劑隨著PSA添加量的增加回收率沒有明顯的變化，均在75.5%—114.7%。PSA添加量為0.05 g時24種除草劑回收率在65.6%—114.7%。因此，最終選擇上清液中加入0.05 g PSA進行凈化，實現(xiàn)去除雜質(zhì)的同時對目標(biāo)化合物不造成影響（圖1）。

2.2 色譜條件的選擇

由于24種除草劑性質(zhì)各不相同，分屬于7種不同類型，為獲得好的峰形和分離效果需要對色譜條件進行優(yōu)化。對比了24種除草劑在HSS T3 C18、BEH C18色譜柱上的峰形和分離效果，發(fā)現(xiàn)莠滅凈、特丁凈、乙草胺在BEH C18色譜柱上峰形較差，拖尾嚴(yán)重，而24種除草劑在HSS T3 C18色譜柱上峰形、分離度及響應(yīng)值均優(yōu)于BEH C18色譜柱，與文獻相符[22]。同時考查了水相中添加不同比例甲酸（0.05%、0.1%、0.2%）對各化合物分離度和靈敏度的影響。結(jié)果表明，甲酸的加入有利于目標(biāo)化合物離子化，提高靈敏度。其中加入0.1%甲酸時，各個化合物峰形好，響應(yīng)值相對較高。因此最終選擇HSS T3 C18色譜柱、0.1%的甲酸水-乙腈為流動相，進行梯度洗脫，10 min內(nèi)完成了24種除草劑的檢測，分離度良好，峰形尖銳，靈敏度高。各個化合物總離子流見圖2。

1.西瑪津, 2.西草凈, 3.敵草凈, 4.阿特拉津, 5.密草通, 6.撲滅通, 7.莠滅凈, 8.另丁津, 9.特丁津, 10.撲滅津, 11.異噁草松, 12.草凈津, 13.特丁凈, 14.撲草凈 15.乙草胺,16.異丙甲草胺, 17.烯草酮, 18.氟磺胺草醚, 19.唑嘧磺草胺, 20.噻吩磺隆, 21.苯磺隆, 22.氯嘧磺隆, 23. 2,4-滴, 24.三氟羧草醚

2.3 質(zhì)譜方法的選擇

由于24種除草劑化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，電離方式也不同，分別選用正離子和負(fù)離子模式掃描。分別優(yōu)化了錐孔電壓和碰撞能量，使每種除草劑的母離子與特征碎片離子產(chǎn)生的離子對強度達到最大，將響應(yīng)值最大的碎片離子設(shè)定為定量離子，次級響應(yīng)離子為定性離子。24種除草劑的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

2.4 方法的線性范圍與檢出限

用初始流動相配制1.0—250 μg·L-1系列質(zhì)量濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，24種除草劑在1.0—250 μg·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)在0.9946—0.9998，可以滿足定量分析的要求。以3倍信噪比計算，蔬菜中24種除草劑的方法檢出限（LOD）在1.2—160.8 μg·kg-1；以10倍信噪比計算，蔬菜中24種除草劑的定量限（LOQ）在4.0—536.0 μg·kg-1（表2）。

2.5 加標(biāo)回收試驗

在空白蔬菜樣品中添加50、100、200 μg·kg-13個質(zhì)量分?jǐn)?shù)的24種除草劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述優(yōu)化的實驗方法進行加標(biāo)回收率實驗，每個添加水平重復(fù)測定3次。結(jié)果表明，24種除草劑的回收率在66.5%—116%（表3）。

2.6 實際蔬菜樣品的測定

按照優(yōu)化的方法，對采集的38份蔬菜樣本，包括黃瓜、小白菜、蒿子桿、尖椒、西紅柿、茄子、豆角、韭菜、洋蔥等蔬菜中24種除草劑的殘留情況進行了測定。所有蔬菜樣品中僅檢出阿特拉津殘留，檢出22次，檢出率57.9%，檢出范圍為未檢出—0.84 μg·kg-1（表4），其余23種除草劑均未檢出。阿特拉津平均殘留量：葉菜類＞瓜類＞豆類＞茄果類＞鱗莖類。檢出量相對較高的蔬菜品種為蒿子桿、韭菜、小白菜，均為葉菜類蔬菜（圖3）。

圖2 24種除草劑總離子流色譜圖

1.小白菜, 2.蒿子桿, 3.韭菜, 4.韭菜, 5.韭菜, 6.黃瓜, 7.辣椒, 8.黃瓜, 9.水果黃瓜, 10.豇豆, 11.辣椒, 12.辣椒, 13.黃瓜, 14.苦瓜, 15.豆角, 16.大白菜, 17.辣椒, 18.辣椒, 19.茄子, 20.西紅柿, 21.圓白菜, 22.茄子, 23.大白菜, 24.圓白菜, 25.生菜, 26.生菜, 27.芥菜, 28.油菜, 29.茄子, 30.茄子, 31.茄子, 32.圣女果, 33.西紅柿, 34.黃瓜, 35.豇豆, 36.豆角, 37.蔥頭, 38.蔥頭

表1 24種除草劑的質(zhì)譜分析參數(shù)

*代表定量離子* Represents quantitative ions in the table

3 討論

分散固相萃取法是美國農(nóng)業(yè)部于2003年提出使用的一種樣品前處理技術(shù)，該技術(shù)的核心在于將固相萃取吸附劑分散到樣品萃取液中吸附干擾物，保留目標(biāo)化合物，避免了傳統(tǒng)固相萃取法提取液因淋洗、洗脫、濃縮等引起的目標(biāo)化合物的損失，凈化液可以直接進行色譜分析[23-24]。該方法適用范圍廣，分析物包括高極性、非極性、高酸性和堿性等化合物，還具有溶劑使用量小、污染少、不使用含氯化物溶劑、樣品處理量大的優(yōu)點[25]。常用的吸附填料有PSA、C18、GCB（石墨化炭黑）等，用于除去基質(zhì)中的色素、脂肪酸、甾醇類、糖類等雜質(zhì)，吸附劑種類和用量可以根據(jù)目標(biāo)化合物的性質(zhì)和基質(zhì)干擾程度進行優(yōu)化。其中，PSA為一種弱陰離子交換劑，同時含有伯胺和仲胺基團，能有效地去除中提取液中的色素、脂肪酸、糖類和其他有機酸等雜質(zhì)，還可通過氫鍵作用結(jié)合一些共提物。周瑤敏等[26]采用PSA作為吸附劑對大米提取液進行凈化，測定了大米中的6種酰胺類除草劑。邱世婷等[27]對比了PSA、C18和GCB對大豆提取液的凈化效果發(fā)現(xiàn)，PSA對雜質(zhì)的凈化能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于C18和GCB，基質(zhì)效應(yīng)明顯較少。本實驗中對比了PSA、C18的凈化效果，也同樣發(fā)現(xiàn)PSA比C18凈化效果好。

表2 24種除草劑的線性方程、相關(guān)系數(shù)、方法檢出限與定量限

因此，本實驗選取PSA作為吸附劑。實驗中發(fā)現(xiàn)當(dāng)PSA添加量增加時，對目標(biāo)化合物三氟羧草醚、2,4-滴、唑嘧磺草胺、噻吩磺隆、苯磺隆、氯嘧磺隆6種除草劑吸附能力也隨之增加，6種除草劑的回收率隨著PSA添加量的增加而降低。如添加量為0.1 g、0.2 g凈化提取液時，2,4-滴的回收率分別為43.7%、24.3%，隨著PSA添加量的增加回收率明顯降低，與文獻報道的結(jié)果相符[22, 28]。Ji等[29]分別對比了PSA不同添加量對三嗪類除草劑回收率的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PSA加入量為0.05 mg 時，三嗪類除草劑回收率較高，本研究結(jié)果與前人研究結(jié)果一致。王玉健等[30]采用加入0.05 g PSA凈化提取液，高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定了果蔬中的阿特拉津、撲草凈、西瑪津、莠滅凈、樸滅津、西草凈6種三嗪類除草劑，檢出限為5.0 μg·kg-1，本試驗中這6種除草劑的檢出限在1.6—3.2 μg·kg-1，低于文獻方法。

表3 加標(biāo)回收試驗結(jié)果

表4 蔬菜樣品中除草劑檢出情況

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目前除草劑的色譜檢測方法主要有氣相色譜法、液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜法、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等。其中，氣相色譜和液相色譜法僅以保留時間定性，化學(xué)性質(zhì)相近的除草劑無法分開，影響定性定量，且容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。氣相色譜質(zhì)譜和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法由于檢出限低、靈敏度高、定性定量相對更加準(zhǔn)確，在痕量樣品的分析中得到了廣泛應(yīng)用[31]。近年來隨著超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀的應(yīng)用，使得分析速度大大提高，節(jié)省了有機溶劑的使用，與氣相色譜質(zhì)譜法相比，節(jié)省了4倍以上的分析時間，提高了檢測效率。因此在本實驗中選用了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定24種除草劑，10 min即可以完成蔬菜中痕量除草劑的分析，具有快速、靈敏度高、定性定量準(zhǔn)確的優(yōu)勢。

4 結(jié)論

建立了超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定蔬菜中24種除草劑殘留量的方法。采用分散固相萃取法凈化蔬菜提取液，并考察了不同吸附劑的凈化效果，簡化了操作步驟，凈化效果好且回收率符合要求。采用優(yōu)化的超高效液相色譜質(zhì)譜條件，10 min內(nèi)即可完成24種除草劑的同時測定。建立的檢測方法具有簡單、快速、節(jié)省溶劑、準(zhǔn)確、靈敏度高的特點，適用于大批量蔬菜樣品中除草劑多殘留的檢測，為實際樣品的檢測提供檢測依據(jù)。

[1] 儲曉剛. 大豆中除草劑殘留定性定量檢測技術(shù)研究[D]. 無錫: 江南大學(xué), 2007.

CHU X G.Study on qualitative and quantitative analysis technology for herbicide residues in soybean[D]. Wuxi: Jiangnan University, 2007. (in Chinese)

[2] 李繼革, 施家威, 王玉飛. 固相萃取-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定大米中10種除草劑中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2016 (10): 1388-1392.

LI J G, SHI J W, WANG Y F. Determination of 10 herbicides in rice by solid-phase extraction-gas chromatography-tandem mass spectrometry method., 2016(10): 1388-1392. (in Chinese)

[3] ZHANG L, YU R,WANG Z, LI N, ZHANG H, YU A. Determination of triazine herbicides in vegetables by ionic liquid foam floatation solid phase extraction high performance liquid chromatography, 2014, 953-954(1): 132-137.

[4] YANG M. Determination of 25 pesticides in vegetables and fruits by QuEchERS, 2011, 32(11): 35-39.

[5] BERRADA H, FONT G, MOLTó J C. Application of solid-phase microextraction for determining phenylurea herbicides and their homologous anilines from vegetables, 2004, 1042(1/2): 9-14.

[6] SANNINO A. Determination of phenylurea herbicide residues in vegetables by liquid chromatography after gel permeation chromatography and Florisil cartridge cleanup, 1998, 81(5): 1048-1053.

[7] ZHI J, MOU R, CHEN M, ZHU Z. Multi-residue determination of 15 phenylurea herbicides in vegetables using solid phase extraction and online post-column ultraviolet decomposition-fluorescent derivatiztion- high performance liquid chromatography, 2008, 26(1): 93-97.

[8] PASDAR Y, PIRSAHEB M, Akramipour R, Ahmadi- Jouibari T, FATTAHI N, SHARAFI K, GHAFFARI H R. Assessment of triazine herbicides residual in fruit and vegetables using ultrasound assisted extraction-dispersive liquid-liquid microextraction with solidification of floating organic drop,2017, 28(7): 1247-1255.

[9] 曾正宏, 陳勇, 楊瑞章, 王太全, 張丹, 曹軍. 分散固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法測定水果和蔬菜中撲草凈和禾草丹殘留量. 理化檢驗:化學(xué)分冊, 2010, 46(9): 1046-1048.

ZENG Z H, CHEN Y, YANG R Z, WANG T Q, ZHANG D, CAO J. GC-MS determination of residual amounts of prometryne and thioencarb in fruits and vegetables with dispersive solid phase extraction., 2010, 46(9): 1046-1048. (in Chinese)

[10] 田宏哲, 白雪松, 苑馨方, 杜芳, 徐靜. 氣相色譜-電子捕獲檢測器同時測定瓜果類蔬菜中15種除草劑殘留農(nóng)藥學(xué)學(xué)報, 2016, 18(5): 625-632.

TIAN H Z, BAI X S, YUAN X F, DU F, XU J. Simultaneous determination of fifteen herbicides in cucurbitaceous andsolanaceous vegetables by gas chromatography with electron caption detector., 2016, 18(5): 625-632. (in Chinese)

[11] 支建梁, 牟仁祥, 陳銘學(xué), 朱智偉. 柱后紫外光解熒光衍生液相色譜法測定蔬菜中殘留的15種苯脲除草劑色譜, 2008, 26(1): 93-97.

ZHI J L, MOU R X, CHEN M X, ZHU Z W. Multi-residue determinationof 15 phenylurea herbicides in vegetables using solid phase extraction and online post-column ultraviolet decomposition- fluorescent derivatization high performance liquid chromatography., 2008, 26(1): 93-97. (in Chinese)

[12] 金雁, 姚家彪, 趙穎, 郭雋, 蔣施, 潘偉, 劉寧, 鐘鈺. 高效液相色譜法測定蔬菜中磺酰脲類除草劑多殘留量的研究. 檢驗檢疫科學(xué), 2008, 18(6): 7-10.

JIN Y, YAO J B, ZHAO Y, GUO J, JIANG S, PAN W, LIU N, ZHONG Y. Simultaneous determination of sulfonylurea herbicide residues in vegetables by HPLC, 2008, 18(6): 7-10. (in Chinese),

[13] 杜曉林, 蔭碩妍, 李荷麗, 苗虹, 吳永寧. 氣相色譜-質(zhì)譜法測定蔬菜中65種除草劑的殘留量中國食品衛(wèi)生雜志, 2013, 25(3): 241-245.

DU X L, YIN S Y, LI H L, MIAO H, WU Y N. Determination of 65 herbicides in vegetables by gas chromatography-mass spectrometry., 2013, 25(3): 241-245. (in Chinese)

[14] 劉海林, 耿安靜, 陸曉宇, 朱將偉. LC-MS/MS測定蔬菜中殘留的磺酰脲類除草劑江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015, 43(7): 325-327.

LIU H L, GENG A J, LU X Y, ZHU J W. Determination of sulfonylurea herbicides in vegetables by LC-MS/MS., 2015, 43(7): 325-327. (in Chinese)

[15] 俞志剛, 丁為民, 何敬, 徐義, 車成彬, 由君, 楊照地. MSPD- RRLC-UV/MS法同時檢測果蔬中9種三嗪類除草劑殘留量. 分析試驗室, 2009, 28(9):38-42.

YU Z G, DING W M, HE J, XU Y, CHE C B, YOU J, YANG Z D. Determination of nine triazine herbicides residues in fruits and vegetables by MSPD-RRLC-UV/MS, 2009, 28(9): 38-42. (in Chinese)

[16] LEE J K, AHN K C, PARK O S, KO Y K, KIM D W. Development of an immunoassay for the residues of the herbicide Bensulfuron- Methyl, 2002, 50(7): 1791-1803.

[17] 王曉春, 王廣, 焦杏春. 三嗪類除草劑分析方法研究進展農(nóng)藥, 2011, 50(5): 320-324.

WANG X C, WANG G, JIAO X C. Developments of the determination methods for triazine herbicides., 2011, 50(5): 320-324. (in Chinese)

[18] LACINA O, ZACHARIASOVA M, URBANOVA J, VACLAVIKOVA M, CAJKA T, HAJSLOVA J. Critical assessment of extraction methods for the simultaneous determination of pesticide residues and mycotoxins in fruits, cereals, spices and oil seeds employing ultra- high performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry, 2012, 1262(4): 8-18.

[19] DONG X, LIANG S X, SHI Z H, SUN H. Development of multi-residue analysis of herbicides in cereal grain by ultra- performance liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometry, 2016, 192: 432-440.

[20] KACZY?SKI P, ?OZOWICKA B, JANKOWSKA M, HRYNKO I. Rapid determination of acid herbicides in soil by liquid chromatography with tandem mass spectrometric detection based on dispersive solid phase extraction, 2016, 152: 127-136.

[21] KACZY?SKI P. Clean-up and matrix effect in LC-MS/MS analysis of food of plant origin for high polar herbicides, 2017, 230: 524-531.

[22] 諸力, 王晨, 陳紅平, 張穎彬, 周蘇娟, 王國慶, 劉新. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定茶葉中 11種植物生長調(diào)節(jié)劑及吡蟲啉, 啶蟲脒的殘留分析化學(xué), 2017, 45(4): 529-536.

ZHU L, WANG C, CHEN H P, ZHANG Y B, ZHOU S J, WANG G Q, LIU X. Simultaneous determination of plant growth regulators and imidacloprid, acetamiprid in tea by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry., 2017, 45(4): 529-536. (in Chinese)

[23] ANASTASSIADES M, LEHOTAY S J, STAJNBAHER D, SCHENCK F J. Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and “dispersive solid-phase extraction” for the determination of pesticide residues in produce, 2003, 86(2): 412.

[24] WILKOWSKA A, BIZIUK M. Determination of pesticide residues in food matrices using the QuEChERS methodology, 2011, 125(3): 803-812.

[25] SINHA S N, VASUDEV K, RAO M V V. Quantification of organophosphate insecticides and herbicides in vegetable samples using the “Quick Easy Cheap Effective Rugged and Safe”(QuEChERS) method and a high-performance liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometry (LC-MS/MS) technique, 2012, 132(3): 1574-1584.

[26] 周瑤敏, 熊艷, 袁林峰, 胡麗芳, 羅林廣. 分散固相萃取法快速測定大米中的酰胺類除草劑中國糧油學(xué)報, 2010, 25(8): 113-116.

ZHOU Y M, XIONG Y, YUAN L F, HU L F, LUO L G. QuECHERS and gas chromatography determination of amid herbicides in rice., 2010, 25(8): 113-116. (in Chinese)

[27] 邱世婷, 侯雪, 楊曉鳳, 韓梅, 劉煒, 易盛國. 凝膠滲透色譜-分散固相萃取-氣相色譜法測定大豆中的多種除草劑西南農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2016, 29(3): 566-569.

QIU S T, HOU X, YANG X F, HAN M, LIU W, YI S G. Determination of herbicide residues in soybean by gel permeation chromatography(GPC) -dispersive solid phase extraction(d-SPE) - gas chromatography., 2016, 29(3): 566-569. (in Chinese)

[28] 蔣振暉, 扎烏拉, 應(yīng)鐵進. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定草莓中的4-氯苯氧乙酸和2,4-二氯苯氧乙酸中國食品學(xué)報, 2015, 15(11): 192-198.

JIANG Z H, ZHA W L, YING T J. Determination of 4- chlorophenoxyacetic acid and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid in strawberry by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry., 2015, 15(11): 192-198. (in Chinese)

[29] JI F, ZHAO L X, YAN W, FENG Q Z, LIN J M. Determination of triazine herbicides in fruits and vegetables using dispersive solid-phase extraction coupled with LC-MS, 2008, 31(6-7): 961-968.

[30] 王玉健, 黃慧玲, 李華平, 梁振綱. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定果蔬中6種三嗪類除草劑的殘留量理化檢驗:化學(xué)分冊, 2013, 49(10): 1223-1227.

WANG Y J, HUANG H L, LI H P, LIANG Z G. HPLC-MS/MS determination of residual amounts of 6 triazine herbicides in fruits and vegetables., 2013, 49(10): 1223-1227. (in Chinese)

[31] 任傳博, 田秀慧, 張華威, 劉云, 孫巖, 徐英江, 宮向紅, 王茂劍. 固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定海水中13種三嗪類除草劑殘留量質(zhì)譜學(xué)報, 2013, 34(6): 353-361.

REN C B, TIAN X H, ZHANG H W, LIU Y, SUN Y, XU Y J, GONG X H, WANG M J. Determination of triazine herbicides in seawater using solid phase extraction- UPLC-MS/MS., 2013, 34(6): 353-361. (in Chinese)

（責(zé)任編輯 李云霞）

SimultaneousDetermination of Multi Herbicides Residues in Vegetables by Dispersive Solid Phase Extraction and Ultra-high Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry

PING Hua1,2, LI Yang1, LI BingRu1, HE ZhaoYing1, LIU JiPei3, MA ZhiHong1

(1Beijing Research Center for Agricultural Standards and Testing, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing 100097;2College of Information and Electrical Engineering, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110866;3Soil and Fertilizer Workstation of Daxing Beijing, Beijing 102600)

To study the purification efficiency of different amount of absorption on the recovery of the herbicides, the ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) with dispersive solid phase extraction method was developed for the determination of 24 herbicides in vegetables．The vegetable samples were extracted with acetonitrile and purified by primary-secondary amine (PSA) with different dosage of 0.05 g, 0.10 g and 0.20 g. UPLC-MS/MS method was performed with electrospray ionization (ESI) source under the multiple reaction monitoring (MRM) mode．0.1% formic acid water-acetonitrile was chosen as mobile phase in gradient elution, and the peaks of all the compounds were sharp with high sensitivity under this conditions. 24 kinds of herbicides were detected by UPLC-MS/MS within 10 min. Adding 0.10 g and 0.20 g PSA, the recovery rate of acifluorfen, 2,4-Dicholrophenoxyacetic acid, flumetsulam, thifensulfuron methyl, tribenuron methyl, and chlorimuron ethyl was decreased significantly, and the rest of the herbicides recovery did not change significantly, ranging from 75.5% to 114.7%. When adding 0.05 g PSA, 24 herbicides recovery rate was 65.6%-114.7%. Standards concentration ranged from 1.0 μg·L-1to 250 μg·L-1had a good linear relationship, and the correlation coefficient was 0.9946-0.9998. Limits of detection of 24 herbicides in vegetables ranged from 1.2 to 160.8 μg·kg-1, and limit of quantitative between 4.0 and 536.0 μg·kg-1, which can satisfy the requirement of quantitative analysis. The mixed standard solution of 24 herbicides were spiked in the blank vegetable samples at three levels 50, 100, 200 μg·kg-1, and the recovery of 24 kinds of herbicides at the rate of 66.5%-116%, the relative standard deviation between 2.3%-9.7%, which can meet the requirements. Using the established determination method, 38 vegetable samples were detected, and only atrazine was detected in all vegetable samples with the detection rate of 57.9% and the detection range from not detected to 0.84 μg·kg-1. The other remaining 23 kinds of herbicides were not detected.The UPLC-MS/MS method is simple, rapid, solvent saving and sensitive, which is suitable for the determination of herbicides in a large number of vegetable samples.

ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; vegetables; herbicides; dispersive solid phase extraction

2017-06-03；接受日期：2017-07-27

北京市優(yōu)秀人才項目（2015000020060G131）、北京市農(nóng)林科學(xué)院科技創(chuàng)新能力建設(shè)專項（KJCX20150301）、北京市農(nóng)林科學(xué)院青年科研基金（QNJJ201521）

平華，E-mail：pingh@brcast.org.cn。通信作者馬智宏，Tel：010-51503405；E-mail：mazh@brcast.org.cn