小檗堿聯(lián)合頭孢他啶對產AmpC酶大腸埃希菌體外抑制作用研究

庾鳳娟　張曉媚

【摘要】 目的：探討小檗堿聯(lián)合頭孢他啶對產AmpC酶大腸埃希菌體外的抑制作用，為臨床中西醫(yī)結合治療提供用藥依據。方法：分別檢測小檗堿和頭孢他啶對20株產AmpC酶大腸埃希菌株的MIC；采用K-B法對20株產AmpC酶大腸埃希菌做單獨小檗堿、單獨頭孢他啶及頭孢他啶+小檗堿的聯(lián)合藥敏試驗。結果：頭孢他啶對產AmpC酶大腸埃希菌MIC 8～256 g/L；小檗堿對產AmpC酶大腸埃希菌MIC 31.25～250 g/L；頭孢他啶+小檗堿聯(lián)合藥敏試驗對耐藥菌FIC表現均為相加作用；20株產AmpC酶大腸埃希菌藥敏試驗表現為頭孢他啶聯(lián)合小檗堿比單用頭孢他啶的藥敏抑菌環(huán)直徑增大，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論：小檗堿對產AmpC酶大腸埃希菌具有抑制作用；小檗堿聯(lián)合頭孢他啶對產AmpC酶大腸埃希菌聯(lián)合藥敏結果呈相加作用。

【關鍵詞】 小檗堿； 頭孢他啶； 產AmpC酶大腸埃希菌； 抑菌作用

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.18.081 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）18-0155-02

Inhibitory Effect of Berberine Combined with Ceftazidime on AmpC-producing Escherichia Coli in Vitro/YU Feng-juan，ZHANG Xiao-mei.//Chinese and Foreign Medical Research，2017，15（18）：155-156

【Abstract】 Objective：To explore the effect of Berberine combined with Ceftazidime on AmpC-producing escherichia coli in vitro，to provide medication basis for the clinical treatment of traditional Chinese and western medicine.Method：The MIC of Berberine and Ceftazidime to 20 AmpC enzyme escherichia coli were detected separately.The combined susceptibility test of 20 strains of AmpC-producing escherichia coli were detected separately with Berberine，Ceftazidime and Ceftazidime+Berberine by K-B method.Result：The MIC of Ceftazidime to AmpC enzyme escherichia coli was 8-256 g/L，the MIC of Berberine to AmpC enzyme Escherichia coli was 31.25-250 g/L.The FIC of Ceftazidime+Berberine drug susceptibility test to the drug-resistant bacteria performed additive effect.The diameter of the antimicrobial ring by Ceftazidime combined with Berberine were increased than the single use of Ceftazidime，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Berberine can inhibit the AmpC-producing escherichia coli，and Berberine combined with Ceftazidime shows additive effect on the drug sensitivity of escherichia coli producing AmpC enzyme.

【Key words】 Berberine； Ceftazidime； AmpC enzyme producing escherichia coli； Antimicrobial effects

First-authors address：Guangzhou Haizhu Hospital of Chinese Medicine，Guangzhou 510220，China

隨著質粒介導的ESBLs、AmpC酶的出現，藥物劑量增加的同時，也增加了毒副作用，頭孢類和單胺類抗生素的耐藥率也不斷增加，這給臨床的治療和醫(yī)院感染的控制帶來巨大嚴重的困難[1]。中藥成分復雜，許多中藥都有較強的抑菌作用，如小檗堿為我國常用中藥之一，能清熱瀉火，燥濕解毒，是一種很好的清熱解毒消炎藥[2]，它作用于細菌（如大腸埃希氏、肺炎克雷伯菌等）的多個位點，未見報道有明顯的抗藥性[3]。小檗堿的抗菌譜廣[4]，對多種細菌有抑制作用[5]，但對產AmpC酶大腸埃希菌的研究較少。本實驗探討小檗堿、頭孢他啶單用和聯(lián)合應用時對產AmpC酶大腸埃希菌的影響，為臨床提供中西藥合理、有效應用的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細菌 菌株為2015年6月-2016年12月從筆者所在醫(yī)院臨床標本中分離出的產AmpC酶大腸埃希菌20株。陰性質控菌株和AmpC酶陽性質控菌株均由中國疾病預防控制中心提供。

1.1.2 主要試劑 M-H瓊脂粉、氯唑西林（CLO，2 mmol/L）、克拉維酸（CA，2 mmol/L）、頭孢他啶藥（30 μg）、血平板。小檗堿由中國藥品生物制品鑒定所提供。endprint

1.1.3 主要儀器設備 VITEK-2微生物鑒定及藥敏分析儀、BSC-1500ⅡB2-X生物安全柜、AVC-4AI型凈化工作臺。

1.2 方法

采用K-B法初篩產AmpC酶大腸埃希菌，采用改良三維試驗確認。采用瓊脂稀釋法測定小檗堿MIC，采用液體兩倍稀釋法測定頭孢他啶MIC。采用K-B法對產AmpC酶大腸埃希菌做單獨小檗堿、單獨頭孢他啶及頭孢他啶+小檗堿的聯(lián)合藥敏試驗。

1.3 統(tǒng)計學處理

本研究所的數據采用SPSS 13.0軟件進行處理，計量資料用（x±s）表示，比較用t檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 產AmpC酶大腸埃希菌確認

20株產AmpC酶大腸埃希菌進一步確認為陽性菌株。

2.2 頭孢他啶和小檗堿MIC

頭孢他啶對產AmpC酶大腸埃希菌MIC 8～256 g/L，MIC90為64 g/L。小檗堿對產AmpC酶大腸埃希菌MIC 31.25～250 g/L，MIC90為62.5 g/L。

2.3 體外聯(lián)合藥敏試驗

2.3.1 K-B法測定結果 20株產AmpC酶大腸埃希菌單獨應用頭孢他啶的抑菌圈直徑為10～21.5 mm，小檗堿+頭孢他啶抑菌圈直徑為12～24 mm，兩種藥物抑菌圈直徑比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.3.2 4號和10號菌株聯(lián)合藥敏結果 頭孢他啶+小檗堿聯(lián)合藥敏試驗對4、10號產AmpC酶大腸埃希菌的FIC指數均表現為相加作用，見表2、表3。

3 討論

大腸埃希菌隨著第三代頭孢菌素的廣泛應用如頭孢曲松，頭孢他啶等，繼產超廣譜β內酰胺酶（ESBLs）之后，又出現產質粒介導AmpC酶大腸埃希菌，其水解底物范圍更廣，常呈現多重耐藥的特點。本實驗擬利用中藥單體與西藥聯(lián)合用藥，可收到單一用藥不能獲得的效果，聯(lián)合用藥，改變了藥物原來的體內過程或藥物的理化性質，以及藥效學和藥動學等方面的作用關系。古代中醫(yī)常用小檗堿治療腹瀉，近年來也有很多關于其抗菌活性的研究。有研究指出，小檗堿濃度低時抑菌，高濃度有殺菌作用，這與本文研究相符，小檗堿濃度在31.25 g/L以上具有抑菌作用，其MIC90為62.5 g/L，其抗菌效果顯著。實驗對4、10號菌株進行聯(lián)合抑菌的測定，結果均表現為相加作用。頭孢他啶+小檗堿聯(lián)合用藥抗菌作用明顯，可能是小檗堿具有抗菌增效的作用[6]。其抗菌活性可能和這幾個方面有關：（1）頭孢他啶的抗菌作用機制為影響細菌細胞壁的合成，而小檗堿可干擾DNA自我復制功能和消質粒的作用[7-8]，抑制蛋白質和核酸的合成，兩者聯(lián)合增加抑菌效果；（2）第三代頭孢菌素耐藥多數由于廣譜酶的產生，小檗堿可能有抑制廣譜酶的生成量或其活性的作用[9]；（3）小檗堿可使細胞中隔變形，直接破壞細菌內部超微結構；（4）中藥如小檗堿抑菌成分較多，可作用于細菌的不同部位和繁殖的不同階段，并對細菌的多個代謝環(huán)節(jié)，如丙酮酸的氧化脫羧過程，故不易產生耐藥性。

中西藥聯(lián)用可以發(fā)揮其各自優(yōu)勢，優(yōu)于單獨使用中藥或西藥的綜合療效。本實驗結果顯示小檗堿+頭孢他啶聯(lián)合使用，對產AmpC酶大腸埃希菌的FIC指數均表現為相加作用。更深一層思考：產AmpC酶大腸埃希菌經小檗堿+頭孢他啶培養(yǎng)后是否會誘導蛋白質發(fā)生變化？蛋白質研究是日后的一個研究方向，相當多種細胞的蛋白質組數據庫已經建立，蛋白質研究無論是基礎理論還是技術方法都進展十分迅速和日漸完善[10-11]。

參考文獻

[1]陳廣燦，周樹勤，劉淑慧，等.小檗堿與β原內酰胺類抗生素對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的協(xié)同抗菌作用[J].廣東醫(yī)學，2007，32（14）：1812-1813.

[2]王維琪.黃連有效成分的藥理研究與進展[J].中醫(yī)臨床研究，2016，8（26）：147-148.

[3]劉玉慶，張玉忠，劉勝貴，等.中藥三黃湯小檗堿對E.coli生長抑制作用與慶大霉素的比較[J].應用與環(huán)境生物學報，2003，9（3）：302-306.

[4]羅預，孟林.黃連素合用頭孢菌素類抗生素的抑菌作用研究[J].中醫(yī)藥劑學，2004，22（11）：2033-2034.

[5]官研，劉志芳，汪長中，等.鹽酸小檗堿對表面葡萄球菌生物被膜形成的影響[J].中華微生物學和免疫學雜志，2011，31（10）：911-913.

[6]王謙，陳燕，程君，等.產質粒介導AmpC酶大腸埃希菌耐藥分析及相關機制[EB/OL].中華實驗和臨床感染病雜志：電子版，2007，1（3）：144-148.

[7]李廣勛.中藥藥理毒理與臨床[M].天津：天津科技翻譯出版公司，1992：60.

[8]陳群，王勝春.黃芩與止痢靈對大腸桿菌R質粒消除作用的實驗研究[J].中國微生態(tài)學雜志，1998，10（2）：80-82.

[9]張詠，洪玉.小檗堿藥用研究進展[J].中外健康文摘，2012，9（3）：179-180.

[10]陳振輝，司徒瑞儒，林勇平，等.小檗堿對產Ampc酶細菌的抑菌作用探討[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2013，34（15）：2049-2050.

[11]康熙雄，王雅杰，張錕.蛋白質組學及其臨床應用[J].診斷學理論與實踐，2004，3（5）：313-315.

（收稿日期：2017-02-15）endprint