大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌抑菌活性及其機(jī)制

周 亮， 謝麗玲， 朱 琳， 朱炎坤， 韓光耀， 畢 蕭， 彭 齊

(汕頭大學(xué) 理學(xué)院，廣東 汕頭 515063)

大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌抑菌活性及其機(jī)制

周 亮， 謝麗玲*， 朱 琳， 朱炎坤， 韓光耀， 畢 蕭， 彭 齊

(汕頭大學(xué) 理學(xué)院，廣東 汕頭 515063)

研究大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌的抑菌活性及機(jī)制。主要采用牛津杯法和液體倍比稀釋法；通過掃描電鏡、SDS-PAGE、二維電泳及串聯(lián)質(zhì)譜等方法探討大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌的抑菌機(jī)制。結(jié)果顯示，大黃醇提取物對(duì)嗜水氣單胞菌有明顯的抑制效果，抑菌圈為(24.5±0.2) mm，MIC和MBC均為3.91 mg/mL；在藥物作用下，菌體表面變粗糙，細(xì)胞膜受損并出現(xiàn)破裂；在經(jīng)藥物處理4 h后，細(xì)菌蛋白含量明顯下降(P<0.05)，2-DE電泳發(fā)現(xiàn)3個(gè)差異性蛋白。結(jié)果表明，大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌的抑制作用機(jī)制是破壞其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及影響特定蛋白的表達(dá)。

大黃；嗜水氣單胞菌；抑菌活性；機(jī)制

自然界中廣泛存在的嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila) 對(duì)魚類、兩棲類、爬行類、鳥類和哺乳類等動(dòng)物具有很強(qiáng)的感染作用,在臨床上表現(xiàn)為急性出血性敗血癥的主要特征[1-3]。近年來，人們大量使用化學(xué)藥物如消毒劑和抗生素來防治嗜水氣單胞菌對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的危害，導(dǎo)致藥物殘留、破壞動(dòng)物免疫力以及體內(nèi)微平衡等毒副作用，既危及水產(chǎn)動(dòng)物的健康，又危害人類的健康。因此尋找綠色有效抑菌物質(zhì)越來越引起人們關(guān)注[4-9]。 大黃隸屬蓼科植物，也稱錦紋、黃良，別名將軍、生軍、馬蹄黃，主要活性成分包括大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素和土大黃素等，是一類蒽醌衍生物，還有多種有機(jī)化合物和無機(jī)物。大量研究表明大黃對(duì)幽門螺旋桿菌、厭氧菌、真菌有明顯抗菌作用，是廣譜的抗菌中藥。中藥具有毒副作用小、取材方便、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，因此采用中藥防治疾病，對(duì)發(fā)展水產(chǎn)動(dòng)物無公害養(yǎng)殖，開發(fā)綠色抗菌藥物有著十分重要的意義[10-12]。本文研究了大黃對(duì)致病性嗜水氣單胞菌的抑菌活性及機(jī)制，為開發(fā)低毒高效、用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的綠色抗菌新藥提供參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 供試菌株 嗜水氣單胞菌(A.hydropila)XX-25，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)劉永杰教授惠贈(zèng)，本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 LB培養(yǎng)基(質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%) 酵母粉0.5，蛋白胨1，氯化鈉1。

1.1.3 試劑 甲叉雙丙烯酰胺、丙烯酰胺、尿素、CHAPS、DTT、十二烷基硫酸鈉、三羥甲基氨基甲烷、溴酚藍(lán)、Bio-Lyte、考馬斯亮藍(lán)R-250等購自上海sangon生物工程有限公司，甲醇、甘油、無水乙醇、正丁醇、濃鹽酸、冰乙酸等購自汕頭西隴化工有限公司。

1.1.4 儀器與設(shè)備 TDL-5-A型低速大容量離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；UVmini-1240紫外可見分光光度計(jì)(島津國際貿(mào)易(上海)有限公司)；SPX-250B型生化培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)儀器廠)；JSM-6360LA掃描電鏡(日本電子)；等電聚焦電泳儀(上海普迪生物技術(shù)有限公司)。

1.2方法

1.2.1 大黃醇提物的制備 大黃烘干12 h后進(jìn)行粉碎，精確稱取大黃粉末5.0 g，用50 mL 70%乙醇在圓底燒瓶中80 ℃回流提取2次，每次1 h，合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至濃度為0.5 g/mL，用0.22 μm水系濾膜過濾除菌后置于4 ℃冰箱保存。

1.2.2 大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌敏感性試驗(yàn) ①牛津杯法[13]：取對(duì)數(shù)期約107cfu/mL的細(xì)菌菌液100 μL稀釋，均勻涂布平板，牛津杯中加入大黃醇提物200 μL，陰性對(duì)照為無菌水，陽性對(duì)照為20 μg/mL氨芐青霉素。37 ℃培養(yǎng)16 h后觀察，測定抑菌圈大小。②最低抑菌濃度(MIC)測定[14-17]：采用液體倍比稀釋法測定中藥粗提液的最低抑菌濃度，陰性對(duì)照加入等量的無菌水，不渾濁的最低藥物濃度為 MIC 值。③最低殺菌濃度(MBC)測定：根據(jù)MIC的結(jié)果，將培養(yǎng)液劃線于LB培養(yǎng)基上。平皿內(nèi)無細(xì)菌生長的藥物濃度為MBC值。

1.2.3 抑菌機(jī)制的研究 ①菌體形態(tài)觀察[18-21]：將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的嗜水氣單胞菌按2%接種量接種到3.91 mg/mL(MIC)提取液的培養(yǎng)液中，以不加藥液為對(duì)照。37 ℃搖床培養(yǎng)4、6、8 h后分別取樣，離心去上清，2.5%的戊二醛4 ℃固定過夜后用0.2 mol/L的PBS(pH=7.4)洗3次，然后依次用30%、50%、60%、85%、90%、100%乙醇脫水1次，每次15 min，最后涂片，干燥，噴金，在掃描電鏡下觀察。②丙烯酰胺凝膠電泳和細(xì)胞可溶性蛋白含量的測定：將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的嗜水氣單胞菌按2%接種量接種到3.91 mg/mL提取液的培養(yǎng)液中，以不加藥液為對(duì)照組。37 ℃搖床培養(yǎng)，收集4、6、8、10 h菌體后超聲破碎提取蛋白。選用10%分離膠、5%濃縮膠，用0.5%考馬斯亮藍(lán) R-250進(jìn)行染色，上樣量為25 μL?？扇苄缘鞍诐舛扔肂radford法測定，每組測定3次。③雙向電泳及質(zhì)譜的分析[22-24]：第一向等電聚焦，將提取的樣品與水化液混合(1∶4)總體積250 μL，吸入到IPG膠條槽中，水化和聚焦在20 ℃自動(dòng)進(jìn)行。等電聚焦結(jié)束、膠條進(jìn)行平衡完后，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。第二向SDS凝膠采用分離膠10%、濃縮膠5%的不連續(xù)垂直板電泳。電泳結(jié)束，取出凝膠，進(jìn)行染色。用脫色液在搖床上進(jìn)行脫色過夜，純水漂洗3次，凝膠圖像掃描儀獲取圖片，使用PDQuest軟件對(duì)圖片進(jìn)行強(qiáng)度校正、背景消減、點(diǎn)檢測、點(diǎn)匹配等分析。將特異性點(diǎn)送到深圳市維納菲生物技術(shù)有限公司進(jìn)行質(zhì)譜檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1敏感性試驗(yàn)

大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示，用0.5 g/mL大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌的抑制活性明顯，結(jié)果見表1。大黃醇提物所形成的抑菌圈直徑為(24.5+0.2) mm，說明大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌有很好的抑制效果。MIC是評(píng)價(jià)抗菌藥物抑菌活性的指標(biāo)，MBC則是指將細(xì)菌殺死的最低藥物濃度。結(jié)果顯示大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌的MIC和MBC的結(jié)果為3.91 mg/mL。

表1 嗜水氣單胞菌的抑菌圈

2.2掃描電鏡觀察結(jié)果

掃描電鏡鏡像觀察結(jié)果見圖1。大黃處理4 h后有部分菌體的形態(tài)發(fā)生明顯變化(箭頭所指)，部分細(xì)菌出現(xiàn)裂解(圖1a1)。對(duì)照組(圖1a)的菌體為長桿狀，表面光滑，形態(tài)飽滿，沒有細(xì)胞破損情況。然而處理6、8 h后，正常細(xì)胞逐漸變多，大部分細(xì)胞呈正常形態(tài)。說明大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌的細(xì)胞膜有一定影響，可能是破壞了細(xì)胞膜的完整性，細(xì)胞內(nèi)滲透壓的改變，最終導(dǎo)致細(xì)菌破裂死亡。

圖1 嗜水氣單胞菌的掃描電鏡觀察結(jié)果Fig.1 SEM results of Aeromonas hydrophilaa,b,c：對(duì)照組4、6、8 h電鏡圖；a1、b1、c1處理組4、6、8 h電鏡圖a,b,c:Controls of different time in fourth,sixth,eighth；a1,b1,c1:treated with ethanol-extracts from Rhubarb of different time in fourth,sixth,eighth

2.3細(xì)菌蛋白測定

用SDS-PAGE檢測大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌蛋白的影響，結(jié)果顯示，處理組與對(duì)照組在分子量20 KD附近的條帶有明顯差異(圖2)，表明經(jīng)大黃醇提物作用后，嗜水氣單胞菌蛋白的表達(dá)在4、6、8、10 h中受到不同程度影響，處理組的蛋白條帶變淡，這可能是某些蛋白在表達(dá)上受到了抑制。經(jīng)Bradford法測其蛋白濃度，結(jié)果如圖3所示。在4、6、8、10 h時(shí)，處理組總蛋白含量有變化，且4 h蛋白含量變化顯著(P<0.05)，說明大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌的蛋白表達(dá)量也產(chǎn)生了影響。

圖2 可溶性蛋白的SDS-PAGEFig.2 Solubility proteins of SDS-PAGEM：Makre；a、b、c、d：對(duì)照組4、6、8、10 h的蛋白；1、2、3、4：處理組4、6、8、10 h的蛋白M: Maker；a，b，c，d:Controls of different time in fourth,sixth,eighth,tenth hour；1,2,3,4：treated with ethanol-extracts from Rhubarb of different time in fourth,sixth,eighth,tenth hour

2.42-DE及質(zhì)譜結(jié)果

通過細(xì)菌蛋白雙向電泳后，用凝膠圖像掃描儀獲取圖像(圖4)，結(jié)果顯示，在分子量20 KD附近有3個(gè)明顯的蛋白差異點(diǎn)，取這3個(gè)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析，結(jié)果如表2所示。結(jié)合質(zhì)譜結(jié)果發(fā)現(xiàn)圖4中點(diǎn)1是轉(zhuǎn)錄延長因子GreA(transcription elongation factor GreA)，細(xì)菌在mRNA合成時(shí)，轉(zhuǎn)錄延長因子與RNA聚合酶結(jié)合參與延長階段，為細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成做準(zhǔn)備。大黃醇提物處理后，轉(zhuǎn)錄延長因子GreA的表達(dá)量出現(xiàn)極度下調(diào)，轉(zhuǎn)錄延長因子不夠，會(huì)使得RNA聚合酶無法在DNA上滑動(dòng)，mRNA合成受阻，最后蛋白質(zhì)不能正常合成，影響細(xì)菌生命活動(dòng)。圖4中點(diǎn)2是超氧化物歧化酶(superoxide dismutase)，超氧化物歧化酶是除去機(jī)體內(nèi)氧自由基的重要酶，它的量不足，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞無法承受氧自由基的脅迫，影響細(xì)菌的正常生理功能。圖4中點(diǎn)3是烷基氫過氧化物還原酶亞基C(alkyl hydroperoxide reductase subunit C，Ahp C)，這也是細(xì)菌抵抗氧化脅迫的主要蛋白組成成分之一，一旦外界環(huán)境惡劣時(shí)，此蛋白為了適應(yīng)外界的脅迫而過量表達(dá)。

圖3 細(xì)菌經(jīng)大黃醇提物處理后蛋白釋放情況Fig.3 Leakage of protein from bacteria after treatment with ethanol extracts of Rhubard

圖4 嗜水氣單胞菌的2-DE圖譜Fig.4 The 2-DE of Aeromonas hydrophilaa、b分別代表4 h的對(duì)照組、4 h的處理組a:control;b:treated with ethanol-extracts from Rhubarb

編號(hào)結(jié)果BLAST結(jié)果Mr(Da)/pI分?jǐn)?shù)覆蓋率/%對(duì)比的肽段1gi|491497280轉(zhuǎn)錄延長因子GreA17671/4．6530858%152gi|644513742超氧化物歧化酶21598/5．5549848%143gi|491479594烷基氫過氧化物還原酶亞基C20776/5．03737100%32

3 討 論

菌體細(xì)胞膜是具有高度選擇透過性膜，其通透性發(fā)生改變會(huì)影響細(xì)胞的正常生理功能[25-27]。研究表明，大黃醇提物處理嗜水氣單胞菌4 h后，通過電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌表面出現(xiàn)不規(guī)則的皺痕，部分細(xì)菌的膜已破裂，影響了細(xì)菌結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定和能量代謝，最終影響了細(xì)菌的正常生理功能。

雙向電泳技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的核心技術(shù)之一。它利用各種蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和分子量的不同來分離復(fù)雜蛋白質(zhì)組分。本研究應(yīng)用雙向電泳獲得了嗜水氣單胞菌的2-DE 圖譜，并選取了3個(gè)高豐度且差異性明顯的蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析。該3個(gè)蛋白點(diǎn)分別為轉(zhuǎn)錄延長因子GreA、超氧化物歧化酶、烷基氫過氧化物還原酶亞基C。大量文獻(xiàn)表明，這3個(gè)蛋白對(duì)細(xì)菌的正常生理及其結(jié)構(gòu)極為重要。如Kun等[28]認(rèn)為伸長GreA是細(xì)菌RNA聚合酶不可或缺的復(fù)雜因子之一，它在轉(zhuǎn)錄延伸中扮演多個(gè)角色。石磊等[29]認(rèn)為超氧化物歧化酶廣泛存在于微生物、動(dòng)物和植物等多種生物體內(nèi)，超氧化物歧化酶通過清除機(jī)體超氧自由基，達(dá)到保護(hù)機(jī)體免受超氧自由基傷害。V. Leclère等[30]也表明超氧化物歧化酶能抵抗外界氧壓力，保護(hù)細(xì)菌免受外部超氧化物的作用。Ahp C蛋白屬于巰基依賴2-Cys過氧還原家族蛋白，是細(xì)菌中抵抗氧化脅迫的主要蛋白之一，在幽門螺桿菌中是最主要的抗氧化蛋白，細(xì)菌Ahp C可自聚合形成大分子的聚合體，同時(shí)開始獲得分子活性[31]。研究大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌蛋白表達(dá)的結(jié)果顯示，藥物處理后，這些蛋白出現(xiàn)差異表達(dá)，而作為生命活動(dòng)重要的這三種蛋白的非正常表達(dá)，使得細(xì)菌生命體的正?；顒?dòng)受到影響。 本研究發(fā)現(xiàn)大黃醇提物對(duì)嗜水氣單胞菌有很好的抑制活性，并且其抑菌機(jī)制主要破壞其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及影響特定蛋白的表達(dá)。

[1] GB/T 18652-2002,中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《致病性嗜水氣單胞菌檢驗(yàn)方法》[S].2002.

[2] 呂愛軍,李任年,余為一.嗜溫氣單胞菌研究進(jìn)展[J].中國動(dòng)物檢疫, 2000,(11):42-43.

[4] 李國旺,苗志國,趙恒章.大黃的體外抑菌實(shí)驗(yàn)[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2011,28(1)：66-68.

[5] Singh V,Chaudhary DK,Mani I,et al.Development of diagnostic and vaccine markers through cloning,expression,and regulation of putative virulence-protein-encoding genes of Aeromonas hydrophi-la[J]. The Journal of Microbiology,2013,51(3): 275-282.

[6] Vaseeharan B,Thaya R.Medicinal plant derivatives as immunos-timulants: an alternative to chemotherapeutics and antibiotics in aquaculture[J]. Aquaculture international,2014,22(3): 1079-1091.

[7] Su HC,Ying GG,Tao R,et al. Occurrence of antibiotic resist-ance and characterization of resistance genes and integrons in En-terobacteriaceae isolated from integrated fish farms in south China[J]. Journal of environmental monitoring,2011,13(11):3223 -3229.

[8] 謝麗玲,彭齊,蔡鏈純,等.黃芩醇提物對(duì)副溶血性弧菌抑制機(jī)制的研究[J].生物技術(shù)通報(bào),2015,31(8):159-165.

[9] 陳晴,謝鯤鵬,云寶儀,等.黃柏等中草藥對(duì)MRSA的抑菌作用及其對(duì)質(zhì)粒的消除作用[J].微生物學(xué)雜志，2013,33(3):54-57.

[10] 馬建鳳,劉華鋼,朱丹.中藥體外抑菌研究的方法學(xué)進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究,2010,33(1):42-45.

[11] 劉蓓蓓.大黃中有效成分的提取、分離測定及其抗突變作用[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(6):63-65.

[12] 李淑娟,董曉華,武海霞,等.大黃及其有效成分藥理作用研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2005,11(1)：76-78

[13] 劉健,王海雁,趙淑江.牛津杯法測定五倍子對(duì)大黃魚病原弧菌的體外抑菌活力[J].海洋科學(xué),2009,33(11):44-47.

[14] 張靜袆,周曾芬,張喻.大蒜油抑制幽門螺桿菌體外實(shí)驗(yàn)研究[J].臨床消化病雜志,2006,18(2):108-109.

[15] 林燕文.2種蓼科植物體外抑菌試驗(yàn)研究[J].微生物學(xué)雜志，2011,31(3):102-105.

[16] Feng He, Ying Yang , Guang Yang,et al.Studies on antibacterial activity and antibacterial mechanism of a novel polysaccharide fromStreptomycesvirginiaH03[J].Food Control ,2010,21(9):1257-1263

[17] Yi Zhao, Mingshun Chen, Zhengang Zhao,et al.The antibiotic activity and mechanisms of sugarcane (SaccharumofficinarumL.) bagasse extract against food-borne pathogens[J].Food Control ,2015,(185):112-118.

[18] Rinki Dandapat,Bhabani Sankar Jena,Pradeep Singh Negi. Antimutagenic and antibacterial activities ofPeltophorumferrugineumflower extracts[J]. Asian Pacific Journal of Tropical Disease,2012,2(12): S778-S782.

[19] Sangetha,S Zuraini Z, Suryani S,et al.In situ TEM and SEM studies on the antimicrobial activity and prevention of Candida albicans biofilm by Cassia spectabilis extract[J].Micron,2009,40(4):439-443.

[20] Ann-Li Yong, Keng-Fei Ooh, Hean-Chooi Ong,et al.Investigation of antibacterial mechanism and identification of bacterial protein targets mediated by antibacterial medicinal plant extracts[J].Food Control ,2015,186:32-36.

[21] Lianci Peng, Shuai Kang, Zhongqiong Yin,et al. Antibacterial activity and mechanism of berberine againstStreptococcusagalactiae[J].Int J Clin Exp Pathol ,2015,8(5):5217-5223.

[22] 張麗軍.2DE中IPG膠條轉(zhuǎn)移到SDS-PAGE中的技術(shù)改進(jìn)[J].生命科學(xué)研究,2004,8(3):225-230.

[23] Luche S,Santoni V,abilloud T. Evaluation of nonionic and zwitteri-onic detergents as membrane protein solubilizers in two-dimensional electrophoresis[J].Proteomics, 2003, 3(3):249- 253.

[24] O′ Farrell P H. High resolution two-dimensional gel electrophoresis of proteins[J]. Journal of Biological Chemistry,1975(10),250:4007-4021.

[25] M T馬迪根,J M馬丁克.微生物學(xué)(第11版)[M].北京:科學(xué)出版社,2009:95.

[26] 王倩,謝明杰.木犀草素對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌活性及其機(jī)制[J].微生物學(xué)報(bào),2010,50(9):1180-1184.

[27] 錢麗紅,陶妍,謝晶.茶多酚對(duì)金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的抑菌機(jī)理[J].微生物學(xué)報(bào),2010,37(11): 1628-1633.

[28] Kun Li, Tianyi Jiang, Bo Yu, et al.Transcription Elongation Factor GreA Has Functional Chaperone Activity[J].plos One,2012,7(12):e47521.

[29] 石磊,楊秀艷,趙麗華.超氧化物歧化酶在微生物中的含量及分布情況[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,26(7):794-796.

[30] V. Leclère, M. Bèchet,R. Blondeau.Functional significance of a periplasmic Mn-superoxide dismutase fromAeromonashydrophila[J].Journal of Applied Microbiology,2004, 96(4):828-833.

[31] Chuang MH,Wu MS,LoWL,et al.The antioxidant protein alkyl hydroperoxide reductase ofHelicobacterpyloriswitches from a peroxide reductase to a molecular chaperone function[J].Proceedings of the National Academy of Sciences,2006,103(8):2552-2557.

TheAntibacterialActivityandMechanismsofEthanol-ExtractsofRhubarb(Rheumofficinale)againstAeromonashydrophila

ZHOU Liang, XIE Li-ling, ZHU Lin, ZHU Yan-kun, HAN Guang-yao, BI Xiao, PENG Qi

(Coll.ofSci.,ShantouUni.,Shantou515063)

Antibacterial activity and mechanisms of ethanol-extracts of rhubarb (Rheumofficinale) (EER) againstAeromonashydrophilawas studied mainly using Oxford cup and liquid double dilution methods; the antibacterial mechanism of EER was investigated by SEM, SDS-PAGE analysis, two-dimensional electrophoresis and tandem mass spectrometry. The results showed that ethanol-extracts of EER had obvious antibacterial effects, with an inhibition zone diameter of (24.5±0.2) mm. Both the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of EER againstA.hydrophilawere 3.91 mg/mL; Under the action of medicine, the bacterial surface became rough, the cell membrane damaged, and appeared rupture. The content of bacterial protein significantly declined 4 h after treated with medicine (P<0.05), and 2-DE electrophoresis had found three proteins of difference. Therefore, the inhibition mechanism of EER againstA.hydrophilawas to destroy the structure of cell membrane and affect the expression of specific proteins.

rhubarb (Rheumofficinale);Aeromonashydrophila; antibacterial activity; mechanism

汕頭大學(xué)校內(nèi)科研基金項(xiàng)目(NFC14003)；廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(S2013010015919)；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015A020210095)

周亮 男，碩士研究生。研究方向?yàn)樯锘钚晕镔|(zhì)。E-mail：14lzhou@stu.edu.cn

* 通訊作者。女，碩士，副教授。研究方向?yàn)樯锘钚晕镔|(zhì)。E-mail：llxie@stu.edu.cn

2016-12-08；

2016-12-21

Q939.96

A

1005-7021(2017)04-0040-06

10.3969/j.issn.1005-7021.2017.04.007

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