五日生化需氧量測定中稀釋水的保存時間探討

胡彩霞

摘要：測定五日生化需氧量（BOD5）所需的接種稀釋水因含大量微生物，保存時間短，一般都是現(xiàn)用現(xiàn)配，筆者采用將稀釋水和接種液分開存放，使用時再分別加入到稀釋容器中，對樣品進行稀釋，這樣避免了接種液和稀釋水的提前混合，可以延長稀釋水的有效期至第4天。

關鍵詞：五日生化需氧量；稀釋水；保存時間

1.前言

接種稀釋水是BOD5測定的一個重要影響因素，國標中普遍將一定量接種液加入到稀釋水中混合均勻，再用來稀釋樣品。因接種液含大量分解有機物質的微生物，稀釋水又含微生物所需的營養(yǎng)鹽和溶解氧，兩者的混合為微生物的繁殖提供了良好條件，若存放時間過長，會導致空白偏大，影響結果的準確性，所以接種稀釋水一般都是現(xiàn)用現(xiàn)配。筆者采用將稀釋水與接種液分開存放，使用之前再按需加入到稀釋容器里混合均勻，這樣延長了稀釋水的保存時間，稀釋水配制當天如有大量剩余，仍可放置，以供后面使用。

2.實驗

2.1主要儀器與試劑

哈希HQ40d溶氧儀，LRH-250A生化培養(yǎng)箱，溶解氧瓶：250-300ml，稀釋容器：量筒500-1000ml，虹吸管，曝氣裝置：增氧泵

鹽溶液：硫酸鎂溶液（22.5g七水合硫酸鎂溶于水，定容至1000ml），氯化鈣溶液（27.6g無水氯化鈣溶于水，定容至1000ml），氯化鐵溶液（0.25g六水合氯化鐵溶于水，定容至1000ml，），磷酸鹽緩沖溶液（8.5g磷酸二氫鉀、21.8g磷酸氫二鉀、33.4g七水合磷酸氫二鈉、1.7g氯化銨溶于水，定容至1000ml）

稀釋水：在5-20L的玻璃容器中加入一定量蒸餾水，控制水溫在（20±1）℃，用增氧泵曝氣至少1小時，使溶解氧達到飽和，使用前每升水中加入4種鹽溶液各1ml，混合均勻。此稀釋水不接種的空白值應小于0.50mg/L，接種后的空白應小于1.50mg/L。

接種液：取100g花園等處植物生長土壤，加1L水，混合均勻并靜置10分鐘，取上清液供用，使用時每升稀釋水中加10ml此接種液。

質控樣品：葡萄糖-谷氨酸標準溶液，取130℃干燥1小時的葡萄糖和谷氨酸各150mg，溶于水，定容至1000ml，此溶液的BOD5值為180-230mg/L。

2.2步驟

取質控樣品Vml于500ml量筒中，加入接種液5ml，用虹吸管沿筒壁將稀釋水慢慢加入量筒中，至500ml刻度，用帶膠板的玻璃棒小心上下攪拌均勻，操作過程應盡量避免氣泡的產(chǎn)生。將此試樣裝入溶解氧瓶中，用溶氧儀測定培養(yǎng)前的溶解氧濃度為D1，塞緊瓶塞并留有一定水封，放入生化培養(yǎng)箱中于（20±1）℃培養(yǎng)5d±4h，測定培養(yǎng)后的溶解氧濃度為D2。另取4個溶解氧瓶，2個加入接種液，2個不加接種液，用稀釋水裝滿，當作空白，分別測定其在培養(yǎng)前后的溶解氧濃度為D3、D4。

剩余的稀釋水和接種液存放在（20±1）℃的培養(yǎng)箱，供第二天使用。連續(xù)7天采用相同步驟對同一稀釋水進行空白試驗和質控樣品的BOD5測試，按以下公式計算BOD5的值。

BOD5（mg/L）=[（D1-D2）-（D3-D4）*f1]/f2

式中：f1=（500-V）/500，f2=V/500

3.結果與討論

3.1測試結果見表1。

3.2從表1可以看出，稀釋水配置的第1-4天，不接種的空白值均小于0.50mg/L，接種后的空白值均小于1.50mg/L，質控樣的BOD5值均在180-230mg/L的范圍內(nèi)，滿足一般樣品的測試要求。因稀釋水不是由無菌水配置，其中含有一定量微生物，由于微生物的繁殖作用，稀釋水的空白隨著天數(shù)的增加而逐漸增大，當稀釋水存放到第4天以上，不接種的空白值大于0.50mg/L，接種后的空白增加明顯，質控明顯偏低，誤差增大，不能滿足測試要求，應棄去。

結論：通過連續(xù)7天測試同一稀釋水的質量，得出：采用先將稀釋水和接種液分開存放，使用前再分別按需加入到稀釋容器里對樣品進行稀釋的方法，避免了接種液和稀釋水的提前混合，可以延長了稀釋水的保存時間至第4天，這樣有效地減少了每次測試BOD5前現(xiàn)配稀釋水的準備工作，節(jié)約了時間和成本。endprint