葡萄抗氧化作用的研究

倉木決，馬夢婷，黃婉雨，李巧云

葡萄抗氧化作用的研究

倉木決1，馬夢婷2，黃婉雨3，李巧云4※

目的：觀察葡萄有無抗氧化作用。方法：采用體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)，以紅景天為陽性對照，以蒸餾水為空白對照，將葡萄制汁以25%、50%、100%三種不同濃度給予小鼠灌胃20 d，測定小鼠紅細(xì)胞中的超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)，直接用人血樣本測不同濃度葡萄汁對紅細(xì)胞中MDA的抑制率。結(jié)果：體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示，紅景天組有抗氧化作用，與空白對照組比較P＜0.05；而葡萄三個劑量組對SOD和MDA沒有明顯影響，與空白對照組比較P＞0.05，沒有顯著性差異。體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度的葡萄汁對MDA都有一定的抑制作用。結(jié)論：葡萄具有體外抗氧化作用；但體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)中葡萄對SOD和MDA并未見明顯作用。

葡萄;抗氧化作用;超氧化物歧化酶;丙二醛

葡萄（Vitis vinifera），又稱蒲桃、草龍珠、山葫蘆、李桃、美國黑提，屬于葡萄屬葡萄科植物葡萄的果實(shí)，是世界最古老的植物之一。從中醫(yī)的角度來說，葡萄味甘、酸，性平，無毒。有很高的營養(yǎng)價(jià)值，成熟的漿果中含有大量的葡萄糖，可被人體直接吸收；還有多種礦物質(zhì)、維生素和氨基酸。現(xiàn)代的更多食品研究者將目光聚集在了葡萄中植物化學(xué)物的功效研究。植物化學(xué)物是植物的次級代謝產(chǎn)物，除個別維生素前體物外，均為非營養(yǎng)成分[1]，有研究者成功研究了葡萄籽的體外抗氧化功效，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明葡萄籽對自由基有較強(qiáng)清除作用[2]。也有以葡萄制品，如葡萄酒來進(jìn)行體內(nèi)抗氧化作用研究的，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明食用了紅葡萄酒的實(shí)驗(yàn)組大鼠的抗氧化酶活性和對照組有顯著性差異，并有所提高[3]。本實(shí)驗(yàn)將通過觀察紅細(xì)胞中SOD和MDA的變化，探討葡萄的體內(nèi)和體外抗氧化功效。有助于對葡萄的營養(yǎng)價(jià)值和食療作用進(jìn)行進(jìn)一步分析。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 原料與藥品

葡萄，市售，500 g。用榨汁機(jī)榨汁過濾，即得原汁，濃度標(biāo)記為100%，實(shí)驗(yàn)中作為高濃度，置冰箱低溫儲存。實(shí)驗(yàn)時用蒸餾水將原汁配稀釋成50%（中濃度）、25%（低濃度）。

紅景天混懸液，取生命紅景天膠囊（四川艾麗碧絲制藥有限公司，川衛(wèi)食準(zhǔn)字（2000）第069號，每粒膠囊含0.3g藥物），配成藥物濃度為0.06%的混懸液。

1.2 試劑

SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20110407）；MDA測試盒（南京建成生物工程研究所，批號：20110329）

1.3 儀器

紫外-可見分光光度計(jì)（UV-730，日本日立株式會社）；自動平衡離心機(jī)（TD24A-WS，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）

1.4 動物、血樣

人血樣本，本校附院提供；

昆明小鼠，體重19～21g，雌雄各25只，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動物中心提供。

2 試驗(yàn)方法

2.1 體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)

2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物的準(zhǔn)備 取小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分為五組：陽性對照組、空白對照組，高、中、低劑量實(shí)驗(yàn)組，每組10只，雌雄各5只。以每天0.2 mL﹒10g-1的劑量灌胃，實(shí)驗(yàn)組按高、中、低劑量分別給予濃度為100%、50%、25%的葡萄汁，陽性對照組的小鼠給予0.06%紅景天混懸液，空白對照組的小鼠給予蒸餾水，連續(xù)給藥20 d。最后一次給藥后50 min，通過摘取眼球的方法取各組小鼠的內(nèi)眥血約1mL，做肝素抗凝處理，測定SOD測試和MDA含量。

2.1.2 小鼠紅細(xì)胞中SOD的測試 取小鼠肝素抗凝全血50 μL加入裝有3 mL生理鹽水的離心管中，以1500 r﹒min-1的速度離心3 min，除去上清液，得離心后沉淀。按照SOD試劑盒說明加入各試劑，測各管在550 nm吸光度值。

2.1.3 小鼠紅細(xì)胞中MDA的測定 取小鼠肝素抗凝全血0.15 mL加入裝有3 mL生理鹽水的離心管中，按照MDA試劑盒說明加入各試劑。測各管532 nm吸光度值。

2.2 體外抗氧化實(shí)驗(yàn)

取新鮮人血樣本5 mL（5%EDTA抗凝），將血樣轉(zhuǎn)移入離心管以4000 r﹒min-1的速度離心10 min，將血漿分離，得到紅細(xì)胞，向其中加入等滲溶液至總體積80 mL，即得到紅細(xì)胞懸浮液。用葡萄原液稀釋配制成梯度濃度的葡萄待測液，濃度分別為5%、2.5%、1%、0.5%、0.25%、0.1%、0.05%。然后用潔凈干燥試管，按不同濃度分別給每支試管中加入1 mL紅細(xì)胞懸浮液，1 mL四氯化碳，1 mL葡萄待測液，作為實(shí)驗(yàn)測試管。再用潔凈干燥試管加入1 mL紅細(xì)胞懸液，1 mL四氯化碳和1 mL等滲磷酸鈉緩沖液，作為陽性對照管。按照MDA試劑盒說明加入各試劑。測各管532 nm吸光度值。葡萄的抗氧化作用以MDA的抑制率（IR%）表示。

IR%=（OD陽性對照-OD實(shí)驗(yàn)測試組）*100%/OD陽性對照

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 小鼠紅細(xì)胞中SOD的測試結(jié)果 所有數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，得到以下結(jié)果：見表1。

表1 葡萄對小鼠紅細(xì)胞內(nèi)SOD的影響（n=10）X±SD

紅景天組與空白對照組比較 *P＜0.05，葡萄組與對照組比較P＞0.05

結(jié)果說明：葡萄的三個劑量實(shí)驗(yàn)組與空白對照組所得數(shù)據(jù)相比，P＞0.05，未見到顯著性差異。紅景天組與空白對照組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。紅景天組對小鼠SOD有抗氧化作用。

3.1.2 小鼠紅細(xì)胞中MDA的測定結(jié)果 所有數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，得到以下結(jié)果：見表2。

表2 葡萄對小鼠紅細(xì)胞內(nèi)MDA的影響（n=10）X±SD

紅景天組與空白對照組比較 *P＜0.05，葡萄組與對照組比較P＞0.05

結(jié)果說明：葡萄的三個劑量實(shí)驗(yàn)組與空白對照組所得數(shù)據(jù)相比，P＞0.05，未見到顯著性差異，紅景組天與空白對照組相比，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。紅景天組對小鼠MDA有抑制作用。

3.2 體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果將各管的吸光度測出后，用“2.2”公式計(jì)算IR%后得到以下結(jié)果，見表3。

表3 葡萄體外抗氧化實(shí)驗(yàn)（n=10）

結(jié)果說明：體外實(shí)驗(yàn)中，葡萄能抑制紅細(xì)胞中MDA的產(chǎn)生，具有體外抗氧化作用。且有一定量效關(guān)系。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)的局限性：食品不同于藥物，本次實(shí)驗(yàn)的實(shí)施時間有限，只有20 d，給小鼠進(jìn)行葡萄的灌胃，雖然能保證進(jìn)食量，但食品的功效不一定在短期內(nèi)就能夠體現(xiàn)出來，可能需要較長時間才能表現(xiàn)出來。比如在郭金英等人做的紅葡萄酒抗大鼠脂質(zhì)過氧化作用的研究[3]中，就對大鼠進(jìn)行了為期12 w的灌胃。其次就是實(shí)驗(yàn)過程中對葡萄的保存問題：本次試驗(yàn)是將葡萄制成原汁后進(jìn)行冰箱低溫保存，這個過程中可能存在葡萄汁中有效物質(zhì)的喪失。

通過查閱文獻(xiàn)可以看出葡萄的確充滿了營養(yǎng)價(jià)值，特別是它的抗氧化功效，更是對人體健康保護(hù)具有積極作用。但葡萄的食用價(jià)值不僅僅如此，它對人體的健康促進(jìn)作用也非局限于葡萄的抗氧化功效。因此，對葡萄的特殊功效研究和有效成分的開發(fā)還具有無限的潛力。希望通過本文，能夠讓更多的人了解葡萄，重視葡萄的食療價(jià)值，從而通過食品來促進(jìn)人類的健康。

[1] 孫長顥.營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社,2007，110.

[2] 許申鴻,杭瑚,郝曉麗.葡萄籽化學(xué)成分分析及其抗氧化性質(zhì)的研究.食品工業(yè)科技.2000,21(2)：18.

[3] 李華.第四屆國際葡萄與葡萄酒學(xué)術(shù)研討會論文集.陜西：陜西人民出版社,2005,196.

Study on the antioxidant effect of grape/

CANGMU Jue, MA Meng-ting, HUANG Wan-yu, LI Qiao-yun//(1. First People 's Hospital of Tibet, Lhasa 85000, Tibet;2.Chengdu Center for Disease Control &Prevention, Chengdu 610041, Sichuan; 3. Science and Technology Department of Tibet, Lhasa 85000, Tibet;4.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, Sichuan)

Objective: To investigate the antioxidant effect of grape. Method: In vivo experiment, rhodiola was used as positive control and distilled water as blank control. Three different concentrations of grape juice (25%, 50%, 100% ) were fed to the mice for 20 days. The contents of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde ( MDA) in mice erythrocyte were detected. In vitro experiment, the inhibitory rate of different concentrations of the grape juice on MDA in human blood were tested.Result: The result of in vivo experiments showed that rhodiola had antioxidant effect compared with the blank control (P＜0.05).There was no statistically signi fi cant difference of SOD and MDA between the blank control group and each of the three different concentrations of the grape juice ( P＞0.05). The result of in vitro experiment showed that different concentrations of the grape juice had an inhibitory effect on MDA. Conclusion: Grape has antioxidant effect in vitro, but no obvious effect on SOD and MDA in vivo antioxidation experiment in mice。

Grape; antioxidation; SOD；MDA

R 285

A

1674-926X(2017)04-010-02

1 西藏自治區(qū)第一人民醫(yī)院 西藏，拉薩 850000；2 四川省疾控中心 四川，成都 610041；3 西藏科技廳 西藏，拉薩 850000；4 成都中醫(yī)藥大學(xué) 四川成都 610075

參木決，女，(1973-)，主管藥師，從事藥房處方調(diào)劑的研究Tel：0891-6371936 Email：109548977@qq.com

李巧云，女，教授 Email：xyqlqy@126.com

2016-03-24