素花黨參多糖對(duì)烏雞生長(zhǎng)性能、免疫功能、血常規(guī)及腸道菌群的影響

李開(kāi)菊，陳文倩，周霞，李璐潔，郝然，鄒元鋒

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 溫江 611130）

素花黨參多糖對(duì)烏雞生長(zhǎng)性能、免疫功能、血常規(guī)及腸道菌群的影響

李開(kāi)菊，陳文倩，周霞，李璐潔，郝然，鄒元鋒*

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 溫江 611130）

本試驗(yàn)旨在探討不同水平素花黨參多糖對(duì)烏雞生長(zhǎng)性能、免疫功能、血常規(guī)及腸道菌群的影響。選取120只1日齡烏雞隨機(jī)分為6組，空白組飼喂基礎(chǔ)日糧，其余組添加200mg/L氟苯尼考造模，6d后，自然恢復(fù)組每日灌胃生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃100mg/kg黃芪多糖溶液，給藥組分別灌胃200mg/kg、100mg/kg和50mg/kg素花黨參多糖粗提液，持續(xù)給藥15d。綜合對(duì)比結(jié)果表明，100mg/kg素花黨參多糖對(duì)烏雞具有一定的促進(jìn)生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡及提高免疫功能等作用。

素花黨參多糖；氟苯尼考；生長(zhǎng)性能；免疫功能；腸道微生物菌群

素花黨參為黨參中的優(yōu)良品種，藥理作用與黨參相似。黨參多糖為黨參干燥根的水溶性多糖，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，清除自由基，降血糖，抗腫瘤，抗衰老和抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理作用[1]。黨參多糖在體內(nèi)可扶植腸道正常菌群生長(zhǎng)，體外可促進(jìn)雙歧桿菌繁殖，能有效調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡[2]。本試驗(yàn)將素花黨參多糖（WCP）以不同濃度灌胃經(jīng)高劑量氟苯尼考制造的雛雞腸道菌群失調(diào)模型，并與市售黃芪多糖進(jìn)行比較，通過(guò)觀測(cè)雛雞生長(zhǎng)性能、血常規(guī)、免疫器官指數(shù)以及腸道菌群的變化，為素花黨參多糖在生產(chǎn)上的應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 本試驗(yàn)使用動(dòng)物為四川高縣本地雜種1日齡烏雞，試驗(yàn)雞自由采食、飲水，控制舍內(nèi)光照、溫度、濕度，適時(shí)通風(fēng)，每天定時(shí)打掃雞舍衛(wèi)生并消毒，進(jìn)行常規(guī)免疫接種，其他飼養(yǎng)管理均按肉雞常規(guī)管理程序進(jìn)行。

1.1.2 試驗(yàn)藥物及試劑 本試驗(yàn)所用素花黨參采自四川省九寨溝，黃芪多糖（APS）購(gòu)自北京生泰爾生物科技有限公司，氟苯尼考購(gòu)自江蘇南農(nóng)高科動(dòng)物藥業(yè)有限公司；選擇培養(yǎng)基購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司，冰醋酸、PBS緩沖液等試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.3 WCP的提取分離 取素花黨參藥材200g，洗凈、烘干，剪成小塊狀，以80%乙醇提取3次去除單糖、色素等雜質(zhì)后，按照料液比1∶30熱水浸提3次，每次1.5h，將水提濾液濃縮后加入無(wú)水乙醇至終濃度為80%，置于4℃冰箱中靜置過(guò)夜，5000r/min離心20min，取沉淀抽濾干燥即為粗多糖粉末，通過(guò)苯酚硫酸法測(cè)得多糖含量為50.96%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 給藥方法 選取1日齡雜種烏雞120只，預(yù)飼7d后隨機(jī)分為6組，每組20只。6組分別為自然恢復(fù)組（模型對(duì)照組MCK）、陽(yáng)性對(duì)照組（APS）、空白對(duì)照組（CK）以及素花黨參多糖高、中、低劑量給藥組（WCP-H、WCP-M、WCP-L），供試樣品濃度分別為高劑量：200mg/kg，中劑量：100mg/kg，低劑量 50mg/kg，陽(yáng)性對(duì)照組APS溶液濃度為100mg/kg。

預(yù)飼7d后在5組烏雞的飲水中添加氟苯尼考200 mg/L（空白組除外），自由飲水，連續(xù)用藥 6d，用于造模。停藥后第1d（14日齡），MCK組每日灌胃0.5mL生理鹽水，APS組灌胃APS溶液0.5mL，給藥組灌胃WCP粗提液0.5mL。按照上述飼喂方法及給藥方案進(jìn)行試驗(yàn)，給藥組連續(xù)飼喂至29日齡，即給藥15d。

1.2.2 生長(zhǎng)性能指標(biāo) 分別在烏雞14、21、28日齡時(shí)以重復(fù)為單位，定時(shí)空腹（可自由飲水）12h后稱重，準(zhǔn)確稱量其日供料量、剩余料量及損失料量，計(jì)算出平均日采食量、平均日增重和料重比。

1.2.3 免疫功能檢測(cè) 烏雞放血處死后用濕法去毛，75%酒精浸泡消毒，剖開(kāi)腹腔和胸腔，取出脾臟、法氏囊，用濾紙吸干表面血液，稱重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)=免疫器官重量（mg）/體重（g）

1.2.4 血常規(guī)檢測(cè) 無(wú)菌采集靜脈血1mL于EDTA真空采血管中，送宜賓金貝寵物醫(yī)院檢測(cè)血常規(guī)指標(biāo)。

1.2.5 腸道菌群結(jié)構(gòu)檢測(cè) 于29日齡上午8：00每組取肉雞3只稱重，采血后斷頸處死，用5%新潔爾滅浸泡5min全身消毒，無(wú)菌條件下取出盲腸腸道，將兩端結(jié)扎，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)，采集盲腸內(nèi)容物，稱取一定量以滅菌PBS緩沖液稀釋至10 mg/mL，再分別進(jìn)行10倍系列稀釋至10-6倍。各稀釋度吸取10μL稀釋液分別接種伊紅美藍(lán)（EMB）、亞硫酸鉍（BS）、LBS和TPY瓊脂選擇培養(yǎng)基，分別進(jìn)行大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌的分離培養(yǎng)。每個(gè)稀釋度重復(fù)3次，待菌液吸收后，置于37℃細(xì)菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，具體培養(yǎng)條件見(jiàn)表1。選菌落適中的稀釋度，計(jì)數(shù)單個(gè)菌落數(shù)量，每組重復(fù)計(jì)數(shù)3次，得到平均菌落數(shù)x，代入以下公式得到腸道內(nèi)容物細(xì)菌群落總數(shù)，結(jié)果以對(duì)數(shù)表示。

腸道菌落總數(shù)（CFU/g標(biāo)本）=x×100×100×稀釋倍數(shù)

表1 腸道微生物菌培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 所有數(shù)據(jù)均用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用軟件SPSS17.0進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan法進(jìn)行多重比較，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 WCP對(duì)烏雞生長(zhǎng)性能的影響 稱量并記錄烏雞采食量和體重變化，計(jì)算得到料重比，如表2所示。

表2 WCP對(duì)烏雞生長(zhǎng)性能的影響 g/d

分析可知，1～14日齡為雛雞的預(yù)飼和造模期，各組間差異均很?。≒＞0.05）。15～29日齡，MCK組相對(duì)于CK組采食量和增重有所降低，料重比升高（P＞0.05）；3個(gè)給藥劑量組之間比較，WCP-M組的生長(zhǎng)性能最好，MCK組生長(zhǎng)性能最差（P＞0.05），表明中劑量WCP有提高烏雞生長(zhǎng)性能的趨勢(shì)（P＞0.05）。

2.2 WCP對(duì)免疫功能的影響 采集雛雞免疫器官稱重，計(jì)算得到免疫器官指數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 WCP對(duì)烏雞免疫器官指數(shù)的影響

造模前，脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)分別為1.03±0.90、1.46±0.40，造模結(jié)束后脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)分別降為 0.42±0.26、1.24±0.36（P＞0.05）；給藥后脾臟指數(shù)比造模結(jié)束時(shí)有所升高，法氏囊指數(shù)有所降低（P＞0.05）。MCK組的法氏囊指數(shù)均低于CK組（P＞0.05），WCP組的脾臟指數(shù)比APS組高或接近（P＞0.05）。給藥后，WCP高、中、低劑量組的法氏囊指數(shù)與APS、CK組以及MCK組之間無(wú)顯著差異，但MCK組的法氏囊指數(shù)最低（P＞0.05）；3個(gè)劑量在3個(gè)日齡段均為WCP-M組的法氏囊指數(shù)最高（P＞0.05）。

2.3 WCP對(duì)烏雞血常規(guī)的影響 檢測(cè)25～29日齡雛雞的靜脈血常規(guī)，結(jié)果顯示：相對(duì)于CK組，MCK組的中性粒細(xì)胞比率、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞壓積、血小板總數(shù)均有所降低（P＞0.05），WCP-M組的白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞比率有所升高（P＞0.05）；而相對(duì)于MCK組，WCP-M組的白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、中性粒細(xì)胞比率、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞壓積和血小板總數(shù)均有上升趨勢(shì)（P＞0.05），且恢復(fù)效果大都優(yōu)于APS組（P＞0.05）。

2.4 WCP對(duì)烏雞腸道菌群的影響 使用選擇培養(yǎng)基分離培養(yǎng)4種菌，結(jié)果見(jiàn)表4。

分析可知，相對(duì)于CK組，MCK組的大腸桿菌、乳酸桿菌數(shù)量有所升高（P＞0.05），雙歧桿菌數(shù)量有所降低（P＞0.05），沙門(mén)氏菌數(shù)量顯著升高（P＜0.05）。相對(duì)于MCK組，WCP-H組的雙歧桿菌和大腸桿菌數(shù)量顯著升高（P＜0.05），乳酸桿菌和沙門(mén)氏菌數(shù)量也有所升高，但不顯著（P＞0.05）；WCP-M 組的雙歧桿菌數(shù)量有所升高（P＞0.05），大腸桿菌和乳酸桿菌數(shù)量有所下降（P＞0.05），沙門(mén)氏菌數(shù)量顯著降低（P＜0.05）；WCP-L組的大腸桿菌、雙歧桿菌以及沙門(mén)氏菌數(shù)量有所升高（P＞0.05），乳酸桿菌數(shù)量顯著降低（P＜0.05）。

表4 WCP對(duì)烏雞腸道菌群的影響 lg CFU/g

3 分析與結(jié)論

3.1 WCP對(duì)烏雞生長(zhǎng)性能的影響 不同營(yíng)養(yǎng)水平、飼養(yǎng)方式、氨基酸等因素對(duì)雞的生長(zhǎng)性能都有影響，添加抗生素的飼糧能在一定程度上影響雞的腸道健康以及生長(zhǎng)性能[3]。石軼男等[4]研究發(fā)現(xiàn)，于每千克飲水中添加黨參多糖可溶性粉0.2g（中劑量）、0.4g（高劑量），結(jié)果發(fā)現(xiàn)21日齡和35日齡體重均明顯高于CK組，但在7日齡時(shí)與CK組無(wú)顯著差異。本試驗(yàn)1～14日齡為預(yù)飼和造模期，造模結(jié)束后，雛雞生長(zhǎng)性能與空白組無(wú)顯著差異；而15～29日齡造模結(jié)束后灌喂素花黨參多糖溶液，兩周后高劑量、中劑量組的增重比MCK組和CK組高，中劑量組的料重比比CK組和MCK組低。綜合可知，以100mg/kg WCP灌胃雛雞，具有提高其生長(zhǎng)性能的功效。

3.2 WCP對(duì)烏雞免疫功能的影響 本試驗(yàn)造模結(jié)束后脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均降低，可能是飼喂抗生素氟苯尼考后導(dǎo)致腸道菌群紊亂，進(jìn)而影響免疫功能所致。以100mg/kg WCP給藥后，雛雞脾臟指數(shù)相比MCK組有所提高，且給藥10～15d效果最佳，超過(guò)正常水平。WCP給藥組的法氏囊指數(shù)均比MCK組高，說(shuō)明WCP起到了一定的增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用，其中100mg/kg給藥組的法氏囊指數(shù)超過(guò)正常水平，隨著時(shí)間的推移，作用效果亦高于黃芪多糖（APS）。故WCP-M（100mg/kg）組對(duì)腸道菌群失調(diào)雛雞具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。

3.3 WCP對(duì)烏雞血常規(guī)的影響 血液學(xué)指標(biāo)是反映機(jī)體健康與否的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)血常規(guī)結(jié)果顯示，WCP可以改善因服用抗生素造成的中性粒細(xì)胞比例、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞壓積以及血小板總數(shù)偏低的情況，且高劑量、中劑量的效果相差不大?？偟膩?lái)看，100mg/kg劑量組對(duì)上述生理指數(shù)恢復(fù)作用較好，尤其對(duì)中性粒細(xì)胞和血小板總數(shù)的恢復(fù)能力最好，已經(jīng)超過(guò)正常水平。

3.4 WCP對(duì)烏雞腸道菌群的影響 現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，黨參多糖可以促進(jìn)雙歧桿菌、乳酸桿菌等益生菌的生長(zhǎng)，對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)沒(méi)有促進(jìn)或抑制作用，而對(duì)沙門(mén)氏菌有抑制作用，具有基本益生能力，適合作為益生元[5]。本試驗(yàn)首次研究WCP對(duì)氟苯尼考造成的雛雞腸道菌群失調(diào)的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果表明，造模結(jié)束后雙歧桿菌數(shù)量降低，大腸桿菌和乳酸桿菌升高，沙門(mén)氏菌顯著升高。給藥后，相比MCK組，WCP-H組的4種細(xì)菌均有所增加，尤以雙歧桿菌增加顯著；WCP-M組雙歧桿菌數(shù)量增加，其余3種菌數(shù)量降低；WCP-L組雙歧桿菌亦升高，乳酸桿菌有所降低，而沙門(mén)氏菌和大腸桿菌有所升高。綜合分析，WCP-H組雙歧桿菌數(shù)量雖然升高顯著，但致病菌數(shù)量也有所升高，無(wú)法起到維持腸道菌群平衡的作用；WCP-L組可能由于劑量過(guò)低，雙歧桿菌增加不顯著，無(wú)法將紊亂的腸道菌群調(diào)節(jié)到正常水平；而WCP-M組雖然雙歧桿菌升高不顯著，但其余致病菌有降低的趨勢(shì)，有助于腸道穩(wěn)態(tài)的恢復(fù)。故以100mg/kg WCP飼喂雛雞對(duì)腸道菌群的恢復(fù)最適宜。

[1]朱斌，曾淼，劉林，等.黨參中水溶性多糖研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，44（19）：109-110.

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[4]石軼男，楊絨娟，扆妍妍，等.黨參多糖可溶性粉對(duì)肉仔雞血清ND抗體水平、IgG及腸道SIgA含量的影響[J].中國(guó)獸藥雜志，2016，50（9）：47-52.

[5]白子霞，王宏軍，龍?jiān)?黨參提取物抗菌活性研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2015，42（7）：1290-1291.

Effects of Codonopsis Pilosula Polysaccharides on the Production Performance，Immune Function，Routine Blood Indexes and Intestinal Microflora of Black-bone Chicken

Li Kaiju，Chen Wenqian，Zou Yuanfeng*，et al.
（College of Veterinary Medicine，Sichuan Agricultural University，Sichuan Wenjiang 611130，China）

The aim of this study was to research the effects of polysaccharides from codonopsis pilosula Nannf.var.modesta（Nannf.）L.T.Shen（WCP）with different levels on the production performance，immune function，routine blood indexes and intestinal microflora of black-bone chicken.One hundred and twenty black-bone chickens were divided into 6 groups randomly，then 200mg/L florfenicol was added to five groups for 6 days，but the blank group was fed with the basic diets.The treatment lasted for 15 days by the method of intragastric administration with normal saline in the spontaneous recovery group，the positive control group was given 100mg/kg astragalus polysaccharides（APS），and the medication groups were given 200mg/kg，100 mg/kg and 50 mg/kg WCP.The results of the comprehensive comparison showed that 100 mg/kg WCP had good effect on growth-promoting，intestinal micro flora regulating and immunity enhancement.

Codonopsis pilosula polysaccharides；Florfenicol；Production performance；Immune function；Intestinal microflora

S853.74

B

1001-8964（2017）10-0032-04

2017-06-02

中國(guó)博士后科學(xué)基金（2016M602704）；四川省創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目（201610626060）

李開(kāi)菊（1994-），女，重慶梁平人，在讀本科生，主要從事天然藥物研究。

*通訊作者：鄒元鋒，副教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事天然藥物研究。