HPLC法測(cè)定婦炎平陰道泡騰片中苦參堿的含量

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600

HPLC法測(cè)定婦炎平陰道泡騰片中苦參堿的含量

吳浩善馮宏玲韓麗張冬月虞小靜張慧*
遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600

目的建立 HPLC法測(cè)定婦炎平陰道泡騰片中苦參堿含量的方法，并測(cè)定10批次泡騰片中苦參堿的含量。方法采用高效液相色譜法，Shim-pack VP-ODS色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸(20∶80)(三乙胺調(diào)pH至8.0)，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng) 220 nm。結(jié)果苦參堿與相鄰組分分離度良好，且陰性液無(wú)干擾，方法的重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密度、準(zhǔn)確度試驗(yàn)均符合有關(guān)規(guī)定，苦參堿的回歸方程為y=803.66x+5.087，(r=0.9994)，苦參堿進(jìn)樣量在0.752～3.006 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。結(jié)論該法準(zhǔn)確靈敏、穩(wěn)定可靠，可用于婦炎平陰道泡騰片的質(zhì)量控制。

婦炎平陰道泡騰片；苦參；苦參堿；高效液相色譜

婦炎平陰道泡騰片由苦參、苦木、蛇床子、枯礬、珍珠層粉、冰片、薄荷腦、鹽酸小檗堿、硼酸9味中藥經(jīng)提取加工制成，具有清熱解毒、燥濕止帶、殺蟲(chóng)止癢的功效，用于肝經(jīng)濕熱、帶下量多以及滴蟲(chóng)、真菌、細(xì)菌引起的陰道炎、外陰炎等癥。婦炎平陰道泡騰片現(xiàn)已上市，但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有蛇床子素和鹽酸小檗堿的含量測(cè)定，而沒(méi)有君藥苦參相應(yīng)的含量測(cè)定內(nèi)容，不利于控制藥品的質(zhì)量?？鄥⒅兄饕猩飰A類、黃酮類成分，生物堿類成分主要為苦參堿，為指標(biāo)性化學(xué)成分[1]。2015版《中國(guó)藥典》苦參項(xiàng)下含量測(cè)定部分也將苦參堿作為含量測(cè)定項(xiàng)[2]。筆者經(jīng)方法學(xué)考察，證實(shí)苦參堿與相鄰組分分離度良好，且陰性液無(wú)干擾，方法的重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密度、準(zhǔn)確度試驗(yàn)均符合有關(guān)規(guī)定，因此確立苦參堿為本制劑中苦參的含量測(cè)定指標(biāo)，通過(guò)相關(guān)的方法學(xué)驗(yàn)證，建立了HPLC法測(cè)定婦炎平陰道泡騰片中苦參堿含量的方法，完善了本品的質(zhì)量控制體系。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent 1260 高效液相色譜儀(美國(guó) Agilent公司)；KQ250DB 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 婦炎平陰道泡騰片(批號(hào):150101、150403、150801、150802、160102、160103、160301、160302、160303、160304，江西南昌制藥有限公司)；苦參堿對(duì)照品(批號(hào)0805-200005，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Shim-pack VP-ODS；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(20∶80)(三乙胺調(diào)pH至8.0)；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL，柱溫：30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 取苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成含苦參堿0.15 mg/mL的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約1.9 g，精密稱定，精密加水50 mL，微熱使溶解，放冷，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，加濃氨試液2 mL，三氯甲烷50 mL，超聲30 min，分取三氯甲烷層，水層再用三氯甲烷15 mL分次洗滌，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相定容至10 mL量瓶中，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 取除苦參以外的其它藥材，按成品制備工藝制成陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法制成缺苦參的陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 精密吸取苦參堿對(duì)照品溶液、婦炎平陰性對(duì)照溶液、婦炎平供試品溶液各10 μL，依上法測(cè)定。結(jié)果婦炎平供試品溶液在與苦參堿對(duì)照品相同保留時(shí)間(19.9min)的位置有色譜峰，婦炎平陰性對(duì)照液色譜圖中，在與苦參堿對(duì)照品相同保留時(shí)間(19.9min)的位置無(wú)色譜峰。結(jié)果表明，婦炎平陰性對(duì)照液無(wú)干擾，專屬性良好。結(jié)果如圖 1～3所示。

2.3.2 線性關(guān)系考察 分別精密量取苦參堿對(duì)照品溶液(濃度為1.503mg/mL) 0.5、0.75、1.0、1.5、2.0mL，分別置10mL量瓶中，加入流動(dòng)相稀釋至刻度，分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，苦參堿的回歸方程為y=803.66x+5.087，r=0.9994，苦參堿進(jìn)樣量在0.752～3.006 μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖4所示。

2.3.3 精密度試驗(yàn)

2.3.3.1 儀器精密度試驗(yàn) 取重量差異項(xiàng)下的本品(批號(hào)：160304)，研細(xì)，混勻，取約1.9 g(相當(dāng)于2片)，精密稱定，按供試液品溶液制備方法制備供試品溶液，分別精密吸取同一供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定，記錄苦參堿峰面積，供試品儀器精密度結(jié)果RSD(%)=0.58，符合相關(guān)規(guī)定。

2.3.3.2 中間精密度試驗(yàn) 取重量差異項(xiàng)下的本品(批號(hào)：160304)，研細(xì)，混勻，分別取約1.9 g(相當(dāng)于2片)6份，精密稱定，由3個(gè)不同分析人員，按供試液品溶液制備方法分別制備供試品溶液，分別在3d，每人取樣2次，依法測(cè)定，計(jì)算苦參堿含量，RSD(%)=0.92，符合相關(guān)規(guī)定。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取重量差異項(xiàng)下的本品(批號(hào)：160304)，研細(xì)，混勻，取約1.9 g(相當(dāng)于2片)，共取6份，分別精密稱定，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算苦參堿含量，RSD(%)=0.65，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取重量差異項(xiàng)下本品(批號(hào)：160304)，研細(xì)，混勻，取約1.9 g(相當(dāng)于2片)，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取同一供試液，分別在0、2、4、6、8h時(shí)進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，RSD(%)=1.28，結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定，色譜峰面積無(wú)明顯變化。

2.3.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取已知含量的重量差異項(xiàng)下的本品(批號(hào)：160304，苦參堿含量為1.372mg/片)，研細(xì)，混勻，取約0.95 g，共取6份，分別精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入苦參堿對(duì)照品溶液(濃度1.410mg/mL)1 mL，其余按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算苦參堿含量，并計(jì)算平均回收率及RSD。結(jié)果顯示，苦參堿回收率在95%～105%之間，RSD為0.82%，符合相關(guān)規(guī)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 樣品含量測(cè)定 按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定本品10批樣品中苦參堿的含量。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表1加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

表2 10批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 測(cè)定指標(biāo)及流動(dòng)相條件的確定 對(duì)2015版《中國(guó)藥典》苦參項(xiàng)下苦參堿、氧化苦參堿含量測(cè)定所采用的氨基柱方法進(jìn)行優(yōu)化[2-7]，苦參堿、氧化苦參堿分離度及拖尾因子均不能滿足含量測(cè)定要求，且氧化苦參堿含量較低，作為質(zhì)控指標(biāo)成分，定量不準(zhǔn)確，因此未采用藥典方法。查閱文獻(xiàn)，采用C18柱調(diào)整流動(dòng)相比例[8-10]，苦參堿分離度良好，方法穩(wěn)定，可以滿足含量測(cè)定要求；而氧化苦參堿含量過(guò)低，定量不準(zhǔn)確，且多次試驗(yàn)摸索均難以與周圍雜質(zhì)峰分離，因此未測(cè)定氧化苦參堿含量。基于上述，確定含量測(cè)定指標(biāo)為苦參堿，以乙腈-0.1%磷酸(20∶80)(三乙胺調(diào)pH至8.0)為流動(dòng)相。結(jié)果顯示，供試品色譜中待測(cè)組分分離度及方法重復(fù)性均良好，保留時(shí)間適宜。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取苦參堿對(duì)照品精密稱定，加流動(dòng)相制成每1mL中約含25μg溶液，以流動(dòng)相為空白溶劑，在200～400nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果苦參堿在202nm處有最大吸收，因202nm為末端吸收，雜質(zhì)峰過(guò)多干擾含量測(cè)定，為此參考2015版《中國(guó)藥典》中苦參堿含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)[2]，選擇有紫外吸收的220nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.3 提取溶劑用量及超聲處理時(shí)間的選擇 鑒于本藥品中苦參已經(jīng)提取入藥，選用三氯甲烷為提取溶劑，對(duì)提取溶劑用量(25 mL、50 mL、100 mL)時(shí)的苦參堿提取量進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，三氯甲烷提取用量為50 mL、100 mL時(shí)，已基本提取完全，考慮成本，確定三氯甲烷提取用量為50 mL。選用超聲處理法制備供試液，對(duì)不同超聲處理時(shí)間(15 min、30 min、45 min)進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，超聲處理30 min，樣品中苦參堿已基本提取完全，故確立超聲處理的時(shí)間為30 min。

通過(guò)試驗(yàn)確定了用于測(cè)定苦參堿含量所采用的色譜柱類型、流動(dòng)相條件、檢測(cè)波長(zhǎng)、提取溶劑、提取時(shí)間，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，最終確立了HPLC 測(cè)定婦炎平陰道泡騰片中苦參堿含量的方法，該方法準(zhǔn)確、快速、可靠，結(jié)果穩(wěn)定，苦參堿色譜峰形及分離度均較好，可用于婦炎平陰道泡騰片君藥苦參中苦參堿的含量測(cè)定，完善了制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而能更加有效、全面地控制藥品的質(zhì)量。

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DeterminationofMatrineinFuyanpingVaginalEffervescentTabletsbyHPLC

WU Haoshan FENG Hongling HAN Li ZHANG Dongyue YU Xiaojing ZHANG Hui*

College of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Liaoning 116600，China

ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of Matrine in Fuyanping vaginal effervescent tablets and the determination of ten batches effervescent tablets Matrine content．MethodsMatrine was extracted by ultrasonic extraction and determined by high performance liquid chromatography．Shim-pack VP -ODS column ( 4.6mm × 250mm，5μm) was used．The mobile phase of acetonitrile-0.1%phosphoric acid water was 20∶80(Three ethylamine, pH ranging to 8)．The flow rate was 1.0 mL/min．The column temperature was 30℃ and the detection wavelength was 220nm．ResultsMatrine had good separation with adjacent components and the negative was of no interference．The method's reproducibility，stability，precision and accuracy of the test were in line with relevant regulations.The regression equation wasy=803.66x+5.087(r=0.9994)．The Matrine injection amount was within the range of 0.752～3.006 μg．It has a good linear relationship．ConclusionThe method is accurate and sensitive，stable and reliable and can be used for quality control in Fuyanping vaginal effervescent tablets.

Fuyanping Vaginal Effervescent Tablets；Sophora flavescens Ait；Matrine；High Performance Liquid Chromatography

R284

A

1007-8517(2017)17-0012-03

2017-05-31 編輯：陶希睿)

遼寧省高等學(xué)校優(yōu)秀科技人才支持計(jì)劃(LR2015042)。

吳浩善(1992-)，男，漢族，碩士研究生在讀，研究方向?yàn)橹兴幤焚|(zhì)評(píng)價(jià)與創(chuàng)新藥物研究。E-mail:15641186420@163.com

張慧(1970-)，女，教授，博士研究生，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幤焚|(zhì)評(píng)價(jià)與創(chuàng)新藥物研究。E-mail:syyycs@163.com