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    四倍體刺槐組織培養(yǎng)研究

    2017-10-28 11:44:52蘇立琢
    現(xiàn)代農業(yè)科技 2017年18期

    蘇立琢

    摘要 選擇當年生長發(fā)育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養(yǎng)材料,研究組織培養(yǎng)的最佳條件。結果表明,最佳啟動培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg/L+0.3 mg/L,最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L,最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+N AA 0.1 mg/L。在對試管苗移栽過程中應做好遮蔭并控制溫室內溫度和濕度條件,確保成活率在90%左右。

    關鍵詞 四倍體刺槐;組織培養(yǎng);快速繁殖

    中圖分類號 S792.27 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739(2017)17-0140-01

    四倍體刺槐根萌蘗性較強、根系發(fā)達,自身含有豐富的根瘤菌,可提升土壤內有機質含量、改良土壤、形成土壤團粒結構,還具有耐低溫、耐貧瘠、速生豐產特性,在治理沙漠化、防風固沙、水土保持和綠化上具有優(yōu)勢,屬優(yōu)質蜜源植物,有利于促進地方養(yǎng)蜂業(yè)發(fā)展,經(jīng)濟效益和生態(tài)效益顯著。為確保優(yōu)良四倍體刺槐品種快速繁殖,對四倍體刺槐組織培養(yǎng)加強研究具有重要意義。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    四倍體刺槐生長的季節(jié)在春季,此時應選取萌發(fā)的幼嫩帶芽莖段。

    1.2 外植體滅菌

    將葉片去除并用自來水清洗干凈,在超凈工作臺無菌條件下,使用70%酒精對四倍體刺槐消毒30 s,使用0.1%升汞消毒7 min,再利用無菌水清洗3~4遍,使用無菌濾紙將材料表面水分吸收干凈,在帶腋芽莖段切取1 cm并將其在啟動培養(yǎng)基上接種[1-3]。

    1.3 啟動培養(yǎng)

    啟動培養(yǎng)基主要是將MS作為基本培養(yǎng)基,在啟動培養(yǎng)基上分別添加不同濃度的6-BA和 NAA,每瓶接種1株,每處理完30瓶,在生長30 d后觀察啟動培養(yǎng)基上四倍體刺槐生長情況,做好誘導率統(tǒng)計。

    1.4 培養(yǎng)基的篩選

    1.4.1 增殖培養(yǎng)基的篩選。將誘導成功的試管苗,分別切割成為單個小苗,接種在附加6-BA 0.1~1.5 mg/L、NAA 0.1~0.5 mg/L幾種組合的MS培養(yǎng)基上。將5株小苗放置在1個小瓶上,每完成20瓶后重復1次,在生長30 d后,觀察小苗生長,計算平均增值系數(shù)和生長量,找出最佳組合。

    1.4.2 生根培養(yǎng)基的篩選。將試管苗生長到2 cm的莖段切下,接種到生根培養(yǎng)基上,將IBA 0.1~0.5 mg/L、NAA 0.1~0.3 mg/L的幾種組合中分別附加到生根培養(yǎng)基1/2MS上,將5株小苗放置在小瓶上,每完成20瓶后重復1次,生長30 d后,觀察小苗生長,計算平均生根條數(shù)、根長、生根率,找出最佳生根條件。

    1.5 培養(yǎng)條件

    分別將白糖30 g/L、瓊脂0.6 g/L加入到增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基內,pH值6.3,培養(yǎng)溫度為25 ℃左右,光照強度2 000 lx,光照時間12 h/d。

    1.6 移栽

    4月上旬將試管苗移栽到溫室內,選取根系生長較好的試管苗,洗凈根部培養(yǎng)基,移入72穴育苗盤,以珍珠巖為基質,使用0.2%高錳酸鉀溶液消毒,澆水后,放入備好的塑料小拱棚,棚內溫度25~30 ℃,相對濕度大于85%,將遮陽網(wǎng)放置在拱棚上方。持續(xù)1周后,降低拱棚相對濕度,28 d后撤去拱棚,移栽植入大田,澆水,蓋遮陽網(wǎng),5 d后去除[4-6]。

    2 結果與分析

    2.1 激素對啟動培養(yǎng)的影響

    在帶莖段接入啟動培養(yǎng)基后,若持續(xù)>10 d,腋芽處明顯萌動,后進入芽膨大期,產生葉片;30 d后,生成3 cm高叢芽,最佳培養(yǎng)基組合為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

    2.2 激素對試管苗增殖的影響

    在將細胞分裂素6-BA加入增殖培養(yǎng)基后,出現(xiàn)增殖效果,增殖系數(shù)隨6-BA濃度增加而加大,增殖培養(yǎng)基內6-BA濃度達1.0 mg/L時,其增殖系數(shù)逐漸減少。這是由于6-BA濃度增加,易形成愈傷組織,有效苗數(shù)量減少,增殖系數(shù)降低。當NAA濃度達0.1 mg/L時,阻礙苗正常生長;當NAA濃度達0.3 mg/L時,苗生長較好。最佳增殖培養(yǎng)組合為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

    2.3 生長素對試管苗生根的影響

    若將生長素IBA單一添加到培養(yǎng)基內,會促進試管苗生根,但莖部生長發(fā)育減緩,且根部側根數(shù)量少,若在培養(yǎng)基中添加生長素NAA時,會促進莖部生長,同時根部側根數(shù)量增加,提升移栽成活率。若將生長素IBA 0.5 mg/L和 NAA 0.1 mg/L配合使用,其效果達到最佳,生根率達95%,平均生根4條/株左右,且根生長發(fā)育較好。

    2.4 苗木移栽及生長

    珍珠巖內生長25 d的生根試管苗,移栽成活率達95%,移栽大田后,生長20 d后成活和移栽成活率均大于97%。試管苗移栽當年,四倍體刺槐平均高度為20 cm左右,葉片數(shù)量為15枚;單株高度在30 cm左右,葉片數(shù)量也達40枚。

    3 結論

    選擇當年生長發(fā)育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養(yǎng)材料。分化培養(yǎng)基種類為將MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L作為啟動培養(yǎng)基,將MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L作為增殖培養(yǎng)基,將1/2MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L作為生根培養(yǎng)基。選擇4月上旬移栽,以珍珠巖為移栽基質,移栽大田成活率大于90%。

    4 參考文獻

    [1] 李曉青,張曉申,王慧瑜.四倍體刺槐組織培養(yǎng)與快速繁殖[J].陜西農業(yè)科學,2008(2):57-58.

    [2] 陳桂芳,婁利華.四倍體刺槐組織培養(yǎng)快速繁殖實驗[J].四川林業(yè)科技,2005,26(3):88-89.

    [3] 張新葉,蔡晟,胡興宜,等.四倍體刺槐的組織培養(yǎng)研究[J].湖北林業(yè)科技,2002(4):4-6.

    [4] 郭軍戰(zhàn),舒慶艷,王麗玲,等.四倍體刺槐組織培養(yǎng)中的外植體選擇和消毒研究[J].西北林學院學報,2002(1):15-18.

    [5] 蔣祥娥,蔡桁,汪建亞,等.四倍體刺槐組織培養(yǎng)技術研究[J].湖北林業(yè)科技,2006(2):8-11.

    [6] 王莉,李春燕.無機鹽質量濃度及激素配比對四倍體刺槐組織培養(yǎng)苗生根的影響[J].江蘇林業(yè)科技,2003(6):23-25.

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