通過親水相互作用色譜串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定葡萄中的乙烯利

胡三明

摘 要：乙烯利分析通常需要間接和費(fèi)力的方法，包括氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS / MS）測(cè)定前的衍生化步驟。在本文中，所描述的方法是快速的，并且基于簡(jiǎn)單的程序而沒有任何清理。加入乙烯利D4作為替代物后，進(jìn)行甲醇萃取。通過電噴霧負(fù)模式與MS / MS耦合的高效液相色譜（LC）進(jìn)行測(cè)定。在親水相互作用液相色譜（HILIC）柱上實(shí)現(xiàn)色譜分離。該方法顯著地將分析時(shí)間縮短到大約10分鐘，樣品提取和10分鐘的測(cè)定。用定量極限的葡萄樣品，50μgkg-1和200μgkg-1評(píng)估分析性能。獲得的結(jié)果符合SANCO / 12571/2013標(biāo)準(zhǔn)，回收率約96%，典型的同位素稀釋法（提取效率≈60%）。日內(nèi)重復(fù)性和日常重現(xiàn)性條件下的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別低于5%和11%。此外，所述方法是環(huán)境友好的并且允許顯著降低溶劑和試劑消耗。

關(guān)鍵詞：親水相互作用；色譜串聯(lián)質(zhì)譜法；乙烯利

1 引言

乙烯利（2-氯乙基膦酸）是合成植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。這類生理和生物物質(zhì)產(chǎn)生與內(nèi)生對(duì)應(yīng)物類似的作用。乙烯利用于改善機(jī)械收獲的水果脫落，秸稈起酥化和加強(qiáng)，增加抗倒伏性，促進(jìn)或抑制開花，促進(jìn)成熟和著色，提高糖含量。這種系統(tǒng)性農(nóng)藥轉(zhuǎn)運(yùn)到植物組織中并分解成乙烯。乙烯是活性劑，與植物生長(zhǎng)和發(fā)育過程中的各種天然生理過程有關(guān)。在比利時(shí)，乙烯利的銷售量達(dá)到每年25噸以上（“聯(lián)邦公共衛(wèi)生食品鏈安全與環(huán)境2014”）。2012年，比利時(shí)食品機(jī)構(gòu)為此植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑專門研究了123種水果。在47個(gè)樣品（聯(lián)邦食品安全署2013年）中檢測(cè)到了乙烯利殘留。報(bào)告了幾種主要用于葡萄的通知，用于食品和飼料快速預(yù)警系統(tǒng)的乙烯利（歐洲委員會(huì)2014年RASFF）。

2 材料和方法

2.1 化學(xué)試劑

乙烯利購自Sigma-Aldrich（Seelze，Germany），認(rèn)證純度為99.3%。氘代乙烯利（乙烯利D4）獲自Dr. Ehrenstorfer GmbH（Augsburg，Germany），認(rèn)證純度為98%。 通過凈化系統(tǒng)（Millipore Milli-Q Water System，Bedford，USA）獲得蒸餾水（<8MΩcm電阻率）。 甲醇和乙腈均為Biosolve的HPLC級(jí)（Valkenswaard，荷蘭）。 氫氧化銨25%和認(rèn)證純度為98-100%的甲酸購自默克（德國達(dá)姆施塔特）。 在1mg ml-1的甲醇中制備乙烯利儲(chǔ)備溶液。 在甲醇中以10μg/ ml的濃度制備內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液，乙烯利D4。通過用甲醇稀釋儲(chǔ)備溶液制備稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。 校正溶液由稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和乙烯利D4制備。所有溶液儲(chǔ)存在-18℃。

2.2 高效液相色譜耦合質(zhì)譜法

使用與Waters（Milford，USA）的Xevo TQ-MS耦合的Acquity UPLC。該儀器由MassLynx?軟件4.1版本控制，由列管理器，10μl循環(huán)的樣品管理器和二元溶劑管理器組成。在距離Merck（Darmstadt，Germany）3.5μm，2.1×100mm的zic-HILIC色譜柱上實(shí)現(xiàn)LC分離，該柱與5μm，2.1×20mm的zic-HILIC預(yù)柱耦合，使用流速為0.3 ml min-1，有效運(yùn)行時(shí)間為10 min。流動(dòng)相A含有通過加入氫氧化銨使100%H 2 O達(dá)到pH9.3。流動(dòng)相B含有95%ACN和5%流動(dòng)相A.流動(dòng)相B的百分比如下改變：0分鐘，100%； 7.5分鐘，43%； 8分鐘，43%； 8.5分鐘，100%； 10分鐘，100%。注射體積為3μl，部分循環(huán)模式，針頭填滿。注射一套后，用混合水/ ACN（10/90）在60分鐘內(nèi)沖洗柱。質(zhì)譜儀在Es-中進(jìn)行。與Es +相比，我們的系統(tǒng)顯示出更好的靈敏度。乙烯利和乙烯利D4的調(diào)諧參數(shù)和MRM轉(zhuǎn)換詳見表1.氬氣用作0.35 ml / min-1的碰撞氣體。定量離子的停留時(shí)間設(shè)定為300 ms，定性離子的停留時(shí)間設(shè)定為200 ms，內(nèi)標(biāo)離子的停留時(shí)間為100 ms。這些高停留時(shí)間值通過降低噪聲來提高靈敏度。

3 結(jié)果與分析

用酸化的甲醇直接注入提取的樣品，無需任何純化，導(dǎo)致色譜圖與許多基質(zhì)干擾接近乙烯利峰。為了最小化這些干擾，測(cè)試了三種不同的純化方法：一夜間冷凍，SPEC18或PSA。不幸的是，這三次測(cè)試清除并沒有消除色譜干擾。在使用C18或PSA SPE柱的情況下，甚至觀察到一些恢復(fù)的損失。這就是為什么在提取步驟之后沒有添加清除。然而，更多的努力專門用于色譜分離。根據(jù)以前的研究，HILIC柱的特征在于親水性程度，親水疏水取代基的選擇性，分子形狀的選擇性，酸堿性質(zhì)的評(píng)價(jià)使用一些衍生物的固定相。

4 結(jié)語

已經(jīng)開發(fā)了用于量化葡萄中的乙烯利的分析方法。這種方法似乎是快速和容易地應(yīng)用，因?yàn)椴恍枰M(fèi)力的清理或衍生化步驟。一批10個(gè)樣品的過程包括空白程序和質(zhì)量控制，從提取到注射不到1小時(shí)。該批次的LC-MS / MS測(cè)定時(shí)間少于3小時(shí)。同位素稀釋技術(shù)的使用不僅補(bǔ)償了遇到的分析物損失，而且還防止了基質(zhì)效應(yīng)。色譜法基于親水相互作用。對(duì)7列進(jìn)行的測(cè)試證實(shí)，在相似的HILIC化學(xué)上獲得了不平等的結(jié)果。在選定的zic-HILIC色譜柱上，pH條件的優(yōu)化改善了峰值形狀，干擾中的分辨率和在負(fù)電噴霧電離模式下工作的質(zhì)譜儀上的乙烯利響應(yīng)。該驗(yàn)證通過了SANCO / 12571/2013標(biāo)準(zhǔn)，其恢復(fù)率約為96%，RSD遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于日內(nèi)重復(fù)性和日重復(fù)性的可接受的20%。所提出的方法也是環(huán)保的，顯著降低溶劑消耗并防止任何使用二氯甲烷。

參考文獻(xiàn)：

[1]葉德練，王玉斌，周琳，李建民，段留生，張明才，李召虎. 乙烯利和氮肥對(duì)夏玉米氮素吸收與利用及產(chǎn)量的調(diào)控效應(yīng)[J]. 作物學(xué)報(bào)，2015（11）：1701-1710.