透膿散對(duì)淺部化膿性炎癥趨化因子補(bǔ)體5a、白三烯4的影響

石志強(qiáng)，班秀芬，李元奎，張小平，肖 成*

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，呼和浩特 010110；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，呼和浩特 010020）

透膿散對(duì)淺部化膿性炎癥趨化因子補(bǔ)體5a、白三烯4的影響

石志強(qiáng)1，班秀芬1，李元奎1，張小平2，肖 成2*

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，呼和浩特 010110；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，呼和浩特 010020）

目的 研究透膿散對(duì)淺部化膿性炎癥血中趨化因子補(bǔ)體5a（C5a）、白三烯4（LTB4）及局部愈合情況的影響，探討透膿散扶正托毒的作用機(jī)理。方法 將Wistar大鼠分為病模對(duì)照組，透膿散高、中、低劑量組、頭孢拉定組，采用金黃色葡萄球菌局部注射致大鼠背部淺部化膿性炎癥模型，分別給予相應(yīng)藥物灌胃，觀察膿腫大小及愈合情況，于3、6、9 d取血檢測(cè)C5a、LTB4。結(jié)果 透膿散可使膿腫縮小，促進(jìn)膿腫愈合；透膿散6 d小組能降低血C5a水平，9 d小組升高血C5a水平，且與頭孢拉定組比較差異顯著；透膿散3 d小組明顯降低血LTB4水平，6 d小組與9 d小組可升高血LTB4水平，且與頭孢拉定組比較差異顯著。結(jié)論 透膿散能使淺部化膿性炎癥縮小局限，加快愈合，并且可以影響血C5a、LTB4水平，具有雙向調(diào)節(jié)作用。

透膿散；淺部化膿性炎癥；愈合率；C5a；LTB4

Abstract:?Objective To explore effect of Tounong powder on C5a, LTB4 and abscess healing in superficial purulent inflammation, and analyse its mechanism.Methods The wistar rats were divided into disease model control group, high, middle and low doses of Tounong powder groups, cefradine group, inject staphylococcus aureus into rat’s back with superficial purulent inflammation, the different groups rats were treated with different treatment.Observing the size and healing of abscess, taking blood sample to test C5a and LTB4 on the 3,6 and 9-day.Results Tounong powder can reduce the size of abscess and promote the healing of the abscess; 6-day group of the Tounong powder can reduce the C5a level, 9-day group of it increased C5a level, and the difference was significant between it and cefradine group; 3-day group of the Tounong powder can reduce the LTB4 level, 6-day group and 9-day group of the Tounong powder can increased the LTB4 level, the difference was significant between it and cefradine group.Conclusion Tounong powder can reduce the size of abscess, promote the healing of the abscess, and affect the blood C5a, LTB4 levels with dual regulation.

Keywords:?Tounong powder; superficial purulent inflammation; healing rate; C5a; LTB4

托法是中醫(yī)外科內(nèi)治三大法則之一，適用于瘡瘍（狹義指發(fā)生于體表的化膿性疾?。┑闹衅赱1]，其中透托法代表方透膿散，由生黃芪、當(dāng)歸、川芎、穿山甲、皂角刺5味藥物組成，包涵了“托”和“透”的治療思想，可使膿腫早日成熟、破潰，病灶由深及淺，趨于局限，輕者吸收消散[2-3]。近年來(lái)，該方臨床應(yīng)用逐漸拓寬，除了廣泛用于癰[4]、乳腺炎[5]與肛周膿腫[6]等外科淺部化膿性疾病外，還用于肝腎膿腫[7]、化膿性闌尾炎[1]及肺部感染[8]等內(nèi)臟化膿性疾病，以及粉刺性乳癰[9]、急性胰腺炎[10]等，均取得了滿意療效。然而關(guān)于其作用機(jī)理研究甚少，這是需要迫切解決的問(wèn)題，是中醫(yī)學(xué)者發(fā)揚(yáng)光大透托法乃至托法的重要任務(wù)。在化膿性炎癥反應(yīng)中，血液中的白細(xì)胞發(fā)生邊集、粘著和游出，之后在趨化因子的作用下到達(dá)炎癥局部而發(fā)揮吞噬和免疫作用，構(gòu)成炎癥反應(yīng)的主要防御環(huán)節(jié)[11]。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察透膿散對(duì)皮下膿腫模型大鼠的外周血白細(xì)胞趨化因子C5a、LTB4的影響，以及對(duì)局部膿腫愈合的作用，來(lái)探討托法扶正托毒的作用機(jī)理。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)Wistar大鼠128只，雄性，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)于中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物飼養(yǎng)許可證：2012-004。

1.2 藥物與試劑 透膿散（外科正宗方,生黃芪12 g，當(dāng)歸6 g，穿山甲3 g，皂角刺5 g，川芎9 g），購(gòu)于北京同仁堂呼和浩特藥店；頭孢拉定膠囊（廣州白云山制藥股份有限公司，批號(hào)：2150010）；金黃色葡萄球菌凍干粉（26003-5a25），培養(yǎng)為3代工作用菌；Rat LTB4 ELISA Kit（DRE 20553，批號(hào)201511）、Rat C5a ELISA Kit（DRE 20418，批號(hào)201511），均購(gòu)于武漢基因美生物科技有限公司。

1.3 主要儀器 TECAN Infinnite M200酶標(biāo)儀（瑞士TECAN公司），SIGMA 3-30 k離心機(jī)（德國(guó)sigma），DG3090型自動(dòng)洗板機(jī)（華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司），SPX-150生化培養(yǎng)箱（上海申賢恒溫設(shè)備廠）。

2 方法

2.1 動(dòng)物造模與分組 按大鼠體質(zhì)量由輕到重編號(hào)，將大鼠隨機(jī)分成6組，即病模對(duì)照組24只、透膿散高劑量組24只、透膿散中劑量組24只、透膿散低劑量組24只、頭孢拉定組24只、空白對(duì)照組8只，除空白對(duì)照組外，每組又分3小組，即3、6、9 d 小組，每小組8只。除空白組外，其他適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后，各實(shí)驗(yàn)組大鼠背部正中3 cm2區(qū)域剪毛，第2天開始在背部剪毛區(qū)域正中注射金黃色葡萄球菌懸液6×109/mL，連續(xù)3 d[12]。注射部位出現(xiàn)明顯紅腫凸起、觸痛、有膿液為造模成功。

2.2 給藥方法 將透膿散煎煮2次，過(guò)濾后水浴蒸發(fā)濃縮，分別調(diào)整含藥濃度為1.2、0.6、0.3/mL（高、中、低濃度），造模成功后，對(duì)應(yīng)給予透膿散高劑量組、中劑量組、低劑量組；每只大鼠灌胃2 mL/(200 g·d) ，2次/d ，其中3 d小組灌服3 d，6、9 d小組依此類推。頭孢拉定組每只大鼠灌服濃度18 mg/mL的頭孢拉定液2 mL/(200g·d) ，2次/d ，3、6、9 d小組灌胃同透膿散組。病模對(duì)照組每只大鼠灌服生理鹽水2 mL/(200 g·d) ，3、6、9 d小組灌胃同透膿散組?？瞻捉M正常飲水，喂食。

2.3 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法

2.3.1 局部膿腫與一般狀況觀察 每日測(cè)量大鼠背部膿腫大小變化，觀察大鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)、毛色、尾巴顏色，測(cè)量肛溫、體質(zhì)量。

2.3.2 血液采集與檢測(cè)方法 各實(shí)驗(yàn)組造模成功后給藥，分別在3、6、9 d，將各組對(duì)應(yīng)小組大鼠心臟取血，離心取血漿置 – 20 ℃冰箱內(nèi)貯存?zhèn)錅y(cè)。以Rat LTB4 ELISA Kit、Rat C5a ELISA Kit用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定LTB4、C5a。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)量資料為正態(tài)分布時(shí)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x± s ）進(jìn)行描述，方差齊時(shí)，各組資料間的比較采用方差分析；方差不齊時(shí)，采用秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料（非反應(yīng)變量有序）采用x2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法。

3 結(jié)果

3.1 6 d 膿腫直徑比較 見表1。

表1 6 d膿腫直徑比較(x± s ， n=16)

3.2 9 d膿腫愈合情況比較 見表2。

表 2 9 d膿腫愈合情況

3.3 對(duì)大鼠血C5a水平的影響 見表3。

3.4 對(duì)大鼠血LTB4的影響 見表4。

表3 對(duì)大鼠血C5a水平的影響(x± s ，n=8) ng/mL

表4 對(duì)大鼠血LTB4的影響(x± s ，n=8) ng/mL

4 討論

研究中，通過(guò)觀察大鼠瘡瘍模型的膿腫大小、愈合情況，可以直接反映透膿散的治療作用。各實(shí)驗(yàn)組大多給藥后6 d紅腫、觸痛消失，膿腫明顯變小而局限于結(jié)痂處，與病模對(duì)照組比較，透膿散高中低劑量組均能使膿腫縮小局限，且透膿散高劑量組作用較頭孢拉定組顯著。之后陸續(xù)痂皮翹起，脫落愈合，透膿散高中劑量組較病模對(duì)照組能明顯促進(jìn)膿腫愈合，但與頭孢拉定組比較無(wú)差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了透膿散可使膿腫趨于局限、早日愈合。

C5a具有很強(qiáng)的過(guò)敏毒素和趨化作用，可使肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等釋放組胺、白三烯、前列腺素等炎癥介質(zhì)，又可趨化中性粒細(xì)胞與單核細(xì)胞。本研究中，與病模對(duì)照6 d小組比較，血中C5a水平降低，而與病模對(duì)照9 d小組比較，透膿散組血中C5a水平升高，說(shuō)明透膿散可影響炎癥C5a水平，調(diào)節(jié)其高低。

白三烯主要來(lái)源于活化中性粒細(xì)胞的溶酶體，參與炎癥反應(yīng)，LTB4同時(shí)又能趨化中性粒細(xì)胞[12]。透膿散組與病模對(duì)照組3 d小組比較，能降低大鼠血中LTB4水平，而與病模對(duì)照6 d小組、9 d小組比較，則可升高血中LTB4水平。揭示透膿散可減輕早期炎癥反應(yīng)，避免過(guò)度損傷機(jī)體；膿腫中后期炎癥減輕，在炎癥介質(zhì)低水平的基礎(chǔ)上，透膿散又可升高LTB4，同樣可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞趨化吞噬壞死組織，加快修復(fù)。且與頭孢拉定組比較差異顯著。

綜上，透膿散能使淺部化膿性炎癥縮小局限，加快愈合。并且可以影響血中C5a、LTB4水平，具有雙向調(diào)節(jié)作用，炎癥早中期可降低C5a、LTB4水平，炎癥中后期可升高C5a、LTB4水平。中藥具有多靶點(diǎn)、多途徑的作用特點(diǎn)，其他作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

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Effect of Tounong powder on chemotactic factor C5a and LTB4 in superficial purulent inflammation

SHI Zhiqiang1, BAN Xiufen1, LI Yuankui1, ZHANG Xiaoping2, XIAO Cheng2*
(1.Inner Mongolia Medical University, Huhhot 010110, China;2.Inner Mongolia TCM Hospital, Huhhot 010020, China）

R288.5

A

2095-6258(2017)05-0703-03

2016-09-20）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.005

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81660792）;內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2014MS0838）;內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)資助項(xiàng)目（201301020）。

石志強(qiáng)（1980 -），男，碩士，副教授，主要從事中醫(yī)外科學(xué)托法、中醫(yī)外用藥藥效學(xué)研究。

*通信作者：肖 成，男，博士，主任醫(yī)師，電子信箱- xiaochengy@126.com