2015年甘肅省外環(huán)境禽流感病毒監(jiān)測預(yù)警分析

李保娣 李紅育 張慧 劉麗琦 李梓 于德山 何健

730000 蘭州，甘肅省疾病預(yù)防控制中心(李保娣、李紅育、張慧、于德山、何健)；102206 北京，中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所國家流感中心(劉麗琦、李梓)

·論著·

2015年甘肅省外環(huán)境禽流感病毒監(jiān)測預(yù)警分析

李保娣 李紅育 張慧 劉麗琦 李梓 于德山 何健

730000 蘭州，甘肅省疾病預(yù)防控制中心(李保娣、李紅育、張慧、于德山、何健)；102206 北京，中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所國家流感中心(劉麗琦、李梓)

目的了解甘肅省外環(huán)境中禽流感病毒H5、H7、H9亞型的分布狀況，科學(xué)指導(dǎo)全省禽流感防控工作。方法采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法(Real-time fluorescence quantitative-Polymerase Chain Reaction，real-time PCR)對2015年全省14個市州采集的標(biāo)本2 015份進(jìn)行禽流感病毒核酸檢測。結(jié)果FluA、H5、H7、H9的檢出率依次為：19.90%、0.05%、0和19.65%。FluA檢出率最高的環(huán)境標(biāo)本為宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本(31.09%)，最低的為糞便標(biāo)本(13.85%)。FluA檢出率在12月份最高(28.18%)，6、7月份最低(8.59%和8.66%)。定西市和隴南市禽流感病毒核酸FluA和H9的檢出率顯著高于其他市州(χ2=4.523～88.059，P=0.000～0.043<0.05)。結(jié)論2015年甘肅省涉禽外環(huán)境中存在的禽流感病毒污染主要為H9亞型，未檢出H7N9，應(yīng)加強監(jiān)測，做好禽流感預(yù)警。

人禽流感是由甲型流感病毒某些感染禽類的亞型即禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的急性呼吸道傳染病。近年來全球多個國家發(fā)生高致病性禽流感疫情，波及范圍十分廣泛，對人類健康構(gòu)成了潛在的重大威脅[1]。為評估甘肅省人禽流感發(fā)生風(fēng)險，為早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)防禽流感疫情提供依據(jù)，本研究對2015年全省外環(huán)境中禽流感病毒H5、H7、H9亞型的分布狀況進(jìn)行分析。

圖1 2015年甘肅省環(huán)境禽流感監(jiān)測結(jié)果Fig.1 The avian influenza monitoring results of 2015 in Gansu province environment

1 材料與方法

1.1標(biāo)本收集依據(jù)監(jiān)測技術(shù)方案在全省14個市州的各監(jiān)測點[當(dāng)?shù)鼗钋菖l(fā)市場、城鄉(xiāng)農(nóng)貿(mào)市場、家禽規(guī)模養(yǎng)殖場(戶)等]采集禽類糞便、籠具內(nèi)部表面涂布物，飲水或屠宰后的污水等標(biāo)本，以市州為單位每月采集10～20份。標(biāo)本采集后，于4 ℃條件下24 h之內(nèi)送至所在市州疾病預(yù)防控制中心(CDC)的國家級流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室，實驗室收到標(biāo)本后一式三份分裝后凍存于-70 ℃冰柜備檢。本研究共檢測標(biāo)本2 015份。

1.2病原學(xué)檢測

1.2.1 病毒RNA提取: 環(huán)境標(biāo)本中核酸提取用Rneasy Mini Kit(德國Qiagen公司)，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 禽流感病毒核酸檢測: 以Real-time PT-PCR方法進(jìn)行禽流感病毒FluA核酸檢測，F(xiàn)luA陽性的標(biāo)本進(jìn)一步檢測H5、H7、H9亞型核酸。部分市州使用的核酸檢測商品化試劑盒由江蘇碩世、上海之江提供，PCR擴(kuò)增引物探針由中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所國家流感中心(CNIC)提供，擴(kuò)增試劑盒為德國Qiagen公司生產(chǎn)，所有操作均按照試劑盒說明書進(jìn)行。標(biāo)本檢測陽性者送省CDC復(fù)核，省CDC復(fù)核后的陽性標(biāo)本送至CNIC采用微量中和實驗進(jìn)行二次復(fù)核，以CNIC反饋的結(jié)果為準(zhǔn)。

1.3主要儀器設(shè)備實時熒光PCR儀(ABI7500/7300儀)、SIGMA3-18K離心機(jī)等。

1.4統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)采用Excel 2010 和SPSS16.0軟件進(jìn)行整理和統(tǒng)計分析。率的比較用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1時間分布2015年全省共檢測外環(huán)境標(biāo)本2 015份，檢出病毒核酸FluA陽性401份，陽性率為19.90%。其中H9陽性396份，占總陽性數(shù)的98.75%，H9可疑陽性4份，H5陽性1份，未檢出H7亞型禽流感病毒。按月統(tǒng)計，2015年12月陽性率最高(28.18%)，6月最低(8.59%)。FluA在不同季度的檢出率依次在14.95%～23.46%、8.59%～20.90%、8.66%～23.70%和22.52%～28.18%之間波動，F(xiàn)luA檢出率在二、三季度總體上顯著低于一、四季度(χ2=8.155，P<0.05)，詳見圖1。

2.2不同類型標(biāo)本分布全省不同類型標(biāo)本中均檢出AIV核酸，其中檢出率最高的為宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本(31.09%)，最低的為糞便標(biāo)本(13.85%),平均檢出率為19.90%。H9檢出率最高的為宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本(30.71%)，最低的為糞便標(biāo)本(13.47%)；糞便標(biāo)本中檢出1份H5陽性，其余標(biāo)本中均未檢出。所有標(biāo)本均未檢出H7亞型禽流感病毒。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，各類型標(biāo)本中禽流感病毒FluA核酸陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=52.322，P=0.000)：宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本FluA核酸陽性率顯著高于糞便標(biāo)本、籠具表面擦拭標(biāo)本和禽類飲水(χ2=6.687～39.755，P=0.000～0.003)；清洗禽類的污水的FluA陽性率顯著高于糞便標(biāo)本和禽類飲水

表1 2015年不同標(biāo)本種類禽流感病毒核酸檢測結(jié)果

注：N,陽性數(shù)量；L,陽性率

Note: N, positive number; L, positive rate

表2 2015年甘肅省不同地市禽流感病毒核酸檢測結(jié)果

注：N,陽性數(shù)量；L,陽性率

Note: N, positive number; L, positive rate

(χ2=24.304，P=0.013)，但與籠具表面擦拭標(biāo)本和宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本的FluA核酸陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.392，P=0.0682)，詳見表1。

2.3地區(qū)分布全省14個市州除天水市外均檢出AIV核酸(401份)，其中H9亞型陽性400份，占FluA陽性數(shù)的99.75%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，河?xùn)|9市州FluA平均檢出率(21.29%)和河西5市FluA平均檢出率(17.52%)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.260，P<0.01)；定西市和隴南市禽流感病毒核酸FluA和H9的檢出率顯著高于全省其它市州(χ2=4.523～88.059，P=0.000～0.043)，詳見表2。

3 討論

甲型流感病毒的抗原變異性非常強，禽流感的暴發(fā)和流行，增加了病毒發(fā)生基因重排的機(jī)會，增加了新型流感病毒(包括可以感染人的毒株)產(chǎn)生的幾率，嚴(yán)重威脅人類健康[1]。2015年甘肅省外環(huán)境禽流感監(jiān)測結(jié)果顯示，全省外環(huán)境AIV以H9亞型為主，與2014年武威市秦讓山等人的研究結(jié)果(H9亞型占96.36%)一致[2]，H5亞型檢出率很低(0.20%)，未發(fā)現(xiàn)H7亞型AIV。2013年以來H7亞型AIV對公眾健康造成的威脅不容忽視[3]，全省要做好密切的監(jiān)測。

從監(jiān)測結(jié)果來看，一年四季AIV均可污染外環(huán)境，但以一、四季度較為嚴(yán)重，具有明顯的季節(jié)性，這與我國部分南方省市研究結(jié)果相一致[4-5]。活禽交易市場外環(huán)境標(biāo)本檢出率以宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本和清洗禽類的污水為最高，與秦讓山等人研究結(jié)果一致[2]，表明在禽類宰殺、銷售等環(huán)節(jié)非常容易造成外環(huán)境的污染，尤其宰殺禽類時所用的案板和水等更容易被AIV污染[6]。由于活禽批發(fā)市場衛(wèi)生條件差、宰殺場所設(shè)施簡陋、活禽來源復(fù)雜、無相關(guān)的消毒管理措施等，污染機(jī)會非常大，有可能增加不同亞型病毒之間重配的幾率[7]，病毒分布的改變和變異隨時可能發(fā)生。所以應(yīng)加強健康教育，提升從業(yè)人員防護(hù)意識并加強防護(hù)措施，盡可能降低病毒擴(kuò)散的風(fēng)險。

監(jiān)測結(jié)果表明：全省14個市州中定西市和隴南市AIV核酸檢出率顯著高于其他市州，建議兩市盡快開展職業(yè)暴露人群血清學(xué)調(diào)查，對全市禽流感病毒分布狀況進(jìn)行全面分析；河西5市中，張掖市和嘉峪關(guān)市外環(huán)境禽流感污染狀況相對較輕，但毗鄰嘉峪關(guān)市的酒泉市、武威市和金昌市的高檢出率提醒河西地區(qū)要警惕人感染禽流感病例的發(fā)生。全省各市州應(yīng)加強外環(huán)境禽流感監(jiān)測工作，及時掌握本地區(qū)禽流感病毒傳播力和致病力的改變情況，及時防范可能發(fā)生的人感染禽流感風(fēng)險。禽類暴露或與禽類密切接觸是人感染禽流感的危險因素之一[8-9],建議全省建立多部門聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制，積極開展職業(yè)暴露人群禽流感感染水平監(jiān)測研究，動態(tài)評估禽流感病毒分布趨勢，做好風(fēng)險預(yù)警。

志謝：感謝在全省流感/禽流感防控工作中做出貢獻(xiàn)的人員。

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EarlywarninganalysisofavianinfluenzavirusinenvironmentalsamplesinGansuprovince，2015

LiBaodi,LiHongyu,ZhangHui,LiuLiqi,LiZi,YuDeshan,HeJian

GansuProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention,Lanzhou730000,China(LiBD,LiHY,ZhangH,YuDS,HeJ)；ChineseNationalInfluenzaCenter，NationalInstituteforViralDiseaseControlandPrevention，ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206，China(LiuLQ,LiZ)

HeJian,Email: 1014770674@qq.com;LiHongyu,Email:hongyuligs@163.com

ObjectiveTo understand the contamination status of avian influenza virus H5, H7, and H9 in environmental samples in Gansu province during 2015，and provide scientific guidance for the prevention and control of human infection with AIV in the province.MethodsWe detected the AIV nucleic acid of 2015 environmental samples with real-time PCR; the samples were collected from all of the monitoring points in the whole province, then we analyzed the result of environmental monitoring of pathogens in the province.ResultsThe detection rates of FluA, H5, H7 and H9 were 19.90%, 0.05%, 0 and 19.65% respectively. The sample specific detection rate of FluA was the highest in wipe specimen of the board surface of slaughtering or placing poultry (31.09%) and the lowest in stool specimens (13.85%). FluA detection rate was the highest in December and the lowest in June and July(8.59% and 8.66%). The detection rate of Dingxi city and Longnan city of nucleic acid of avian influenza virus FluA and H9 were significantly higher than those in other cities in the province(χ2=4.523～88.059，P<0.05).ConclusionsThe main AIV pollution of the external environment in Gansu province in 2015 were the H9 subtype, and there was no H7N9 positive, we should strengthen the monitoring and early warning for avian influenza.

Avian influenza virus; Polymerase chain reaction; Monitoring

禽流感病毒；聚合酶鏈反應(yīng)；監(jiān)測

2017-05-25)

(本文編輯：唐瀏英)

何健，Email：1014770674@qq.com；李紅育，Email：hongyuligs@163.com

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.04.007

國家“十二五”艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治科技重大專項(2012ZX10004-208)；甘肅省衛(wèi)生行業(yè)科研計劃項目(GSWSKY2017-28)

Fundprograms: State Mega-project for Infectious Disease Research of China(2012ZX10004-208)；Health Industry Scientific Research Projects in Gansu Province(GSWSKY2017-28)