嬰兒巨細(xì)胞病毒性肝炎患兒體內(nèi)一氧化氮和內(nèi)皮型一氧化氮合酶水平的研究

李曉峰 林霞 陳惠芹 蔡耘 張萍萍 陳壯桂

510630 廣州， 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院兒科(李曉峰、陳惠芹、蔡耘、張萍萍、陳壯桂)；婦產(chǎn)科(林霞)

·論著·

嬰兒巨細(xì)胞病毒性肝炎患兒體內(nèi)一氧化氮和內(nèi)皮型一氧化氮合酶水平的研究

李曉峰 林霞 陳惠芹 蔡耘 張萍萍 陳壯桂

510630 廣州， 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院兒科(李曉峰、陳惠芹、蔡耘、張萍萍、陳壯桂)；婦產(chǎn)科(林霞)

目的探討嬰兒巨細(xì)胞病毒性肝炎(ICH)患者體內(nèi)一氧化氮(NO)和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的水平及其臨床意義。方法ELISA方法檢測(cè)56例ICH患兒和50例健康對(duì)照組血清NO和eNOS的水平，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其與患兒肝功能、人巨細(xì)胞病毒(HCMV)DNA拷貝數(shù)的關(guān)聯(lián)。結(jié)果ICH組NO和eNOS的水平顯著高于健康對(duì)照組(P<0.01)。ICH組中ALT異常組NO和eNOS水平顯著高于ALT正常組(P<0.05)。ICH組中NO和eNOS的水平與ALT呈明顯正相關(guān)(r=0.682，r=0.746，P<0.05)，但與HCMV-DNA拷貝數(shù)無顯著相關(guān)性(r=-0.087，r=-0.134，P>0.05)。結(jié)論ICH患兒體內(nèi)NO以及eNOS水平顯著升高，與患兒肝臟功能損傷呈正相關(guān)。

一氧化氮(NO)是一種普遍在于各種細(xì)胞中的具有多種活性的生物介質(zhì)，內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)是內(nèi)皮細(xì)胞合成NO的主要合成酶。研究表明，NO與eNOS在病毒性肝炎發(fā)生和發(fā)展過程中具有保護(hù)性作用進(jìn)，但上述結(jié)果多在成人乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)等病毒感染患者體內(nèi)研究的結(jié)果。目前對(duì)NO和eNOS水平在嬰兒期最常見的嬰兒巨細(xì)胞病毒性肝炎(Infantile cytomegalovirus hepatitis，ICH)中的水平及與肝功能的關(guān)聯(lián)研究迄今未見報(bào)道。本研究通過檢測(cè)ICH患兒血清NO和eNOS的表達(dá)水平及與HCMV-DNA定量和肝臟炎癥程度的相關(guān)性研究，來探討其在HCMV病變進(jìn)展過程中的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象ICH組患者為2012年2月—2016年2月在中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院住院的首診ICH患兒，根據(jù)巨細(xì)胞病毒感染診斷方案[1-3]，確診為HCMV感染性肝炎(檢測(cè)血清CMVpp65陽性或CMV-IgM陽性，HCMV-DNA定量>103拷貝/ml)，排除其他病原體感染、藥物中毒性肝炎、膽道系統(tǒng)畸形以及遺傳代謝性疾病。ICH組共入組56例，其中男性32例，女性24例，平均年齡(3.54±2.72)月。健康對(duì)照組為同期兒童保健門診嬰兒，血清檢測(cè)CMVpp65和CMV-IgM均陰性，共入組50例，男性28例，女性22例，平均年齡(3.25±2.36)月。ICH組與對(duì)照組在年齡與性別構(gòu)成上無顯著性差異。所有研究對(duì)象家屬均簽署知情同意書。

1.2研究方法抽取清晨空腹靜脈血5 ml，分離血清，測(cè)定肝功能指標(biāo)，包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase, ALT)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase, AST)、膽紅素(Bilirubin，BIL)、白蛋白和球蛋白，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)法定量分析HCMV-DNA拷貝數(shù)(人巨細(xì)胞病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒購(gòu)自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)。使用ELISA方法測(cè)定NO和eNOS的濃度(人血清一氧化氮(NO)檢測(cè)ELISA試劑盒、人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)(Elisa)酶聯(lián)免疫試劑盒均購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司)。

2 結(jié)果

2.1ICH組與對(duì)照組的臨床資料分析ICH組的AST、ALT、γ-GT、TBA、TBIL、DBIL顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，56例ICH組患兒中ALT正常者23例，ALT異常者33例；而兩組間的年齡及性別構(gòu)成差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

表1 ICH組與對(duì)照組的臨床資料分析

注：與對(duì)照組相比，aP<0.05，bP<0.01

Note:aP<0.05,bP<0.01 compared with Control group

2.2NO和eNOS的檢測(cè)結(jié)果ICH組NO和eNOS水平分別為83.37±25.19 μmol/L和17.21±6.03 IU/ml，均顯著高于對(duì)照組的48.62±16.46 μmol/L和8.61±4.03 IU/ml(P<0.01)(表2)。

表2 ICH組與對(duì)照組間NO和eNOS的比較

2.3ICH患兒ALT異常組與ALT正常組比較結(jié)果 ALT異常組相較于ALT正常組NO和eNOS水平均顯著升高(P<0.05)，而兩組間HCMV-DNA定量中位數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.253)(表3)。

表3 ALT異常組與ALT正常組間的比較

圖1 NO水平與ALT的相關(guān)性Fig.1 Correlation between levels of NO and ALT

圖2 eNOS水平與ALT的相關(guān)性Fig.2 Correlation between levels of eNOS and ALIT

2.4NO和eNOS水平與ALT及HCMV-DNA定量的相關(guān)性在ICH組患兒中，NO和eNOS的水平與ALT呈明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.682，r=0.746，P<0.05)(圖表1、2)，而與HCMV-DNA定量之間無明顯相關(guān)關(guān)系。(r=-0.087，r=-0.134，P>0.05)。

3 討論

內(nèi)皮細(xì)胞中由eNOS催化生成的NO是一種強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞舒血管因子，也是細(xì)胞間信息傳遞和調(diào)節(jié)的重要生物介質(zhì)。大量國(guó)內(nèi)外研究表明，HBV、HCV、HEV等病毒性肝炎患者體內(nèi)eNOS基因轉(zhuǎn)錄水平增強(qiáng)，大量生成eNOS，NO合成系統(tǒng)被激活，導(dǎo)致NO和eNOS的水平均明顯升高。NO表達(dá)水平的增高，進(jìn)一步激活鳥苷酸環(huán)化酶從而導(dǎo)致cGMP水平增高，在肝臟可發(fā)揮擴(kuò)張小血管、改善微循環(huán)、減低肝細(xì)胞有氧代謝，抑制枯否細(xì)胞對(duì)肝組織的炎癥損傷，從而發(fā)揮肝臟保護(hù)性作用[4-6]。本研究結(jié)果顯示，ICH患兒體內(nèi)NO和eNOS的水平較健康對(duì)照組均是顯著升高，與成人慢性病毒型感染患者體內(nèi)的研究結(jié)果相似，提示NO產(chǎn)生系統(tǒng)的活化也可作為一種保護(hù)機(jī)制，在HCMV感染肝臟組織后，通過相應(yīng)的病理生理過程，緩解感染后免疫炎癥對(duì)肝臟損傷。

既往研究表明，慢性乙肝患者體內(nèi)eNOS的表達(dá)水平與肝臟組織炎癥程度相關(guān)[7]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)ALT異常的ICH患兒體內(nèi)的NO和eNOS水平明顯高于ALT正常的ICH患兒，且NO和eNOS的濃度與ALT水平呈明顯正相關(guān)，提示ICH患兒體內(nèi)NO以及eNOS的水平與與ICH的病變嚴(yán)重程度密切關(guān)聯(lián)。eNOS在肝臟主要存在于肝細(xì)胞、竇內(nèi)皮細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，當(dāng)病毒通過激活免疫系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p傷肝組織時(shí)，體內(nèi)大量eNOS釋放，進(jìn)而導(dǎo)致NO水平的升高[8,9]，因此起到保護(hù)肝臟的作用，而肝臟損傷程度較輕的患者體內(nèi)NO的生成也會(huì)較正常對(duì)照組有所升高。

本研究未發(fā)現(xiàn)NO和eNOS的水平與HCMV-DNA之間的關(guān)聯(lián)，提示ICH患兒體內(nèi)的NO系統(tǒng)的活化可能與體內(nèi)HCMV的復(fù)制無關(guān)，而與病毒感染后引起的免疫損傷有關(guān)。由于本研究納入的病例數(shù)量相對(duì)較少，上述關(guān)于NO和eNOS水平與HCMV復(fù)制之間的關(guān)聯(lián)分析可能存在系統(tǒng)誤差，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量深入分析。

綜上，ICH患兒體內(nèi)NO以及eNOS水平升高及與肝臟炎癥程度加重的關(guān)聯(lián)結(jié)果與成人嗜肝病毒感染研究結(jié)果相近，表明由eNOS催生的NO對(duì)于HCMV感染的肝臟炎癥起到保護(hù)性作用。但是NO系統(tǒng)在病毒性肝炎中的具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究。

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RoleofNitricoxideandendothelialnitricoxidesynthaseininfantswithcytomegalovirushepatitis

LiXiaofeng,LinXia,ChenHuiqin,CaiYun,ZhangPingping,ChenZhuanggui.

DepartmentofPediatrics(LiXF,ChenHQ,CaiY,ZhangPP,ChenZG),DepartmentofObstetrics(LinX)theThirdAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510630,China

ChenZhuanggui,Email:chenzhuanggui@126.com

ObjectiveTo investigate the potential clinical role of nitric oxide (NO) and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in infants suffering from infantile cytomegalovirus hepatitis (ICH).MethodsNO and eNOS were measured in 56 ICH infants and 50 healthy controls by using ELISAmethod .ResultsNO and eNOS were significantly increased in ICH group as compared with the controls (P<0.01) accompanied by increased ALT in infants of ICH group (P<0.05). Both of NO and eNOS levels were significantly positively correlated with the level of ALT(r=0.682,r=0.746,P<0.05). However, neither NO level nor eNOS level was significantly correlated with the number of copies of HCMV-DNA (r=-0.087,r=-0.134,P>0.05).ConclusionsThe expressions of NO and eNOS were significantly increased in infants with human cytomegalovirus hepatitis, and were closely related to the severity of liver lesion.

Cytomegalovirus; Hepacivirs; Nitric oxide; Endothelial nitric oxide synthase; Child, hospitalized

巨細(xì)胞病毒；肝炎病毒；一氧化氮；內(nèi)皮型一氧化氮合酶；兒童，住院

2017-04-20)

(本文編輯：陳培莉)

陳壯桂，Email: chenzhuanggui@126.com

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.04.004

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81470219)；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目基金(2014A020212120)

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