慢性阻塞性肺疾病急性加重期外周血淋巴細(xì)胞免疫分型變化的相關(guān)因素分析

劉培培,程培培,侯松萍*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 呼吸科，吉林 長(zhǎng)春130033； 2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 小兒內(nèi)科)

慢性阻塞性肺疾病急性加重期外周血淋巴細(xì)胞免疫分型變化的相關(guān)因素分析

劉培培1,程培培2,侯松萍1*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 呼吸科，吉林 長(zhǎng)春130033； 2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 小兒內(nèi)科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，目前研究結(jié)果初步顯示細(xì)胞免疫參與了COPD的病因、發(fā)病機(jī)制、恢復(fù)及預(yù)后整個(gè)過(guò)程。本文通過(guò)檢測(cè)COPD患者外周血淋巴細(xì)胞的免疫分型變化，探討COPD患者急性加重期的肺功能、血?dú)夥治?、呼吸困難量表評(píng)分、病程長(zhǎng)短等各項(xiàng)指標(biāo)與其免疫功能變化的相關(guān)性，為臨床綜合診治COPD提供一定的參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院2014年12月至2015年9月慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者137例，納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)會(huì)2013年修訂版慢性阻塞性肺疾病診治指南[1]。排除標(biāo)準(zhǔn)：不能配合完成支氣管舒張實(shí)驗(yàn)者，合并其它心肝腎等疾病者，近期使用激素、免疫抑制劑等影響免疫功能的患者，伴有其他部位慢性炎癥的患者。確診137例COPD患者，年齡35-78歲，平均66.01±10.78歲，其中男57例，女80例。測(cè)定所有患者外周血淋巴細(xì)胞免疫分型CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+、CD56+，并計(jì)算CD4+/CD8+比值。以COPD急性加重期患者淋巴細(xì)胞免疫分型的各項(xiàng)指標(biāo)作為應(yīng)變量，MMRC評(píng)分、FEV1Pred%、PaO2、PaCO2、病程、吸煙作為自變量，進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3- PC5(貨號(hào)：6607013)；細(xì)胞裂解液：OptiLyse○RNO-lysing Solution(貨號(hào)：A11894)；流式細(xì)胞儀：Beckman Coulter FC500；以上所有試劑均購(gòu)自美國(guó)Beckmen Coulter公司。肺功能測(cè)定采用MasterScreenPneumo型肺功能儀 (德國(guó)康爾福盛CareFusion公司)，技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)參考2005年美國(guó)胸科學(xué)會(huì)和歐洲呼吸協(xié)會(huì)共同制定的肺功能測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)[2]；血?dú)夥治鰷y(cè)定采用GEMpremier3500分析檢測(cè)儀(美國(guó)Instrumentation Laboratory公司)。

1.2.2 血液樣本制備 采集患者外周血2 ml，加入到EDTA抗凝的真空管中混勻。取兩只流式細(xì)胞儀上樣管，分別命名為同型對(duì)照管和實(shí)驗(yàn)管，每管中均加入100 μl抗凝全血，然后分別加入20 μl同型對(duì)照抗體、CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3-PC5抗體和CD45-FITC/CD56-PE/CD19-ECD/CD3-PC5，充分混勻，避光室溫孵育15 min；然后向每管中加入紅細(xì)胞裂解液500 μl，充分混勻，避光孵育10 min后加入500 μl PBS，1 000 r/min離心5 min，棄上清，每管加入500 μl鞘液，混勻，等待上機(jī)檢測(cè)。血?dú)夥治鰟?dòng)脈血由專業(yè)人員采集，采用一次性威世德動(dòng)脈血?dú)忉?，型?hào)3302通用性動(dòng)脈血?dú)忉?，由全自?dòng)血液細(xì)胞分析儀讀取結(jié)果。

1.2.3 指標(biāo)測(cè)定 外周血淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞檢測(cè)均采用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)，由我院中心實(shí)驗(yàn)室專人操作檢測(cè)。每管獲取細(xì)胞1×104個(gè)，以熒光抗體染色陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比記錄結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 COPD急性加重期患者病程、MMRC評(píng)分、FEV1Pred%、血?dú)夥治鼋Y(jié)果等臨床資料詳見(jiàn)表1。

表1 COPD急性加重期患者臨床資料

2.2 COPD急性加重期患者淋巴細(xì)胞免疫分型的各項(xiàng)指標(biāo)與MMRC評(píng)分、FEV1Pred%、PaO2、PaCO2、病程、吸煙相關(guān)性分析顯示： CD3+CD4+與PaO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)；CD3+CD8+與PaCO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，但是CD4+/ CD8+比值與PaCO2呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)；CD56+與mMRC評(píng)分呈顯著正相關(guān)(P<0.01)，CD3+與mMRC評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，詳見(jiàn)表2、表3。

表2 慢性阻塞性肺疾病急性發(fā)作期患者淋巴細(xì)胞免疫分型的多因素相關(guān)性分析

表3 慢性阻塞性肺疾病急性發(fā)作期患者淋巴細(xì)胞免疫分型的多因素相關(guān)性分析

*P<0.05，**P<0.01

3 討論

Saetta 等研究結(jié)果提示發(fā)展為COPD的吸煙者與肺功能正常、無(wú)臨床癥狀的吸煙者相比，CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)目明顯增加，提示CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞在氣道的重塑方面起到了重要作用[3]。本研究結(jié)果顯示外周血CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞與PaCO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，說(shuō)明氣道阻塞性通氣功能障礙越嚴(yán)重，CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞也隨著氣道阻塞程度加重而造成的PaCO2增高而升高。Saetta等研究結(jié)果和本實(shí)驗(yàn)結(jié)果均提示CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞在COPD患者氣道炎癥反應(yīng)過(guò)程中起重要作用。

Won-Dong Kim等研究表明彌散功能正常的COPD患者與健康吸煙者或COPD伴有彌散功能減低的患者相比，其CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞比例升高，CD4+/CD8+比值下降，且在這組患者中FEV1/FVC與CD4+/CD8+比值具有顯著正相關(guān)性，推測(cè)CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞可能參與部分COPD病人小氣道病變及氣流受限的炎癥反應(yīng)過(guò)程[4]。本研究結(jié)果顯示COPD急性加重期患者，CD4+/CD8+比值與PaCO2呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，Won-Dong Kim等研究結(jié)果和本實(shí)驗(yàn)結(jié)果均提示CD4+/CD8+比值與氣道阻塞程度密切相關(guān)。

表2、表3顯示外周血CD3+CD4+與PaO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)；CD3+CD8+與PaCO2呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，但是CD4+/CD8+與PaCO2呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，說(shuō)明動(dòng)脈血PaO2、PaCO2與外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞、CD4+/CD8+比值密切相關(guān)。表2還顯示CD3+T淋巴細(xì)胞與MMRC評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。這些結(jié)果說(shuō)明COPD患者出現(xiàn)Ⅱ型呼吸衰竭和呼吸困難時(shí)能引起機(jī)體內(nèi)CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+T淋巴細(xì)胞參與的細(xì)胞免疫功能紊亂，臨床上應(yīng)給予高度重視。

CD56分子是自然殺傷細(xì)胞 (NK細(xì)胞)主要的表面標(biāo)志，本研究結(jié)果顯示CD56+與MMRC評(píng)分呈顯著正相關(guān)(P<0.01)，說(shuō)明NK細(xì)胞參與了COPD患者的疾病進(jìn)展過(guò)程，可能隨著患者病情加重，NK細(xì)胞逐漸被激活，進(jìn)一步發(fā)揮其免疫調(diào)控作用和抗感染作用。本研究結(jié)果顯示CD19+B淋巴細(xì)胞及CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞與COPD急性加重期患者的肺功能、血?dú)夥治?、呼吸困難量表評(píng)分、病程長(zhǎng)短、吸煙等各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯相關(guān)性；Jong JWD等研究表明吸煙的COPD患者中，F(xiàn)EV1占預(yù)計(jì)值百分比與CD19+B淋巴細(xì)胞具有正相關(guān)性[5]，Zhu X等研究結(jié)果顯示在COPD患者中，吸煙可能對(duì)CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞功能產(chǎn)生抑制作用[6]，這兩項(xiàng)研究結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)不一致，因此，吸煙對(duì)COPD急性加重期患者外周血淋巴細(xì)胞亞群是否產(chǎn)生影響，還需進(jìn)一步研究。

[1]慢性阻塞性肺疾病診治指南(2013年修訂版)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)慢性阻塞性肺疾病學(xué)組[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2013,36(4)：255.

[2]Pellegrino R,Viegi G,Brusasco V，et al.Interpretative strategies for lung function tests[J].European Respiratory Journal,2005,26(5):948.

[3]Saetta M ，Stefano AD，Turato G ，et al.CD8+T-lymphocytes in peripheral airways of smokers with chronic obstructive pulmonary disease[J].American Journal of Respiratory & Critical Care Medicine,1998,157(1):822.

[4]Won-Dong K,Woo-Sung K,Younsuck K,et al.Abnormal peripheral blood T- lymphocyte subsets in a subgroup of patients with COPD[J].Chest,2002,122(2):437.

[5]Jong JWD,Belt-Gritter BVD,Koeter GH,et al.Peripheral blood lymphocyte cell subsets in subjects with chronic obstructive pulmonary disease:association with smoking,IgE and lung function[J].Respiratory Medicine,1997,91(2):67.

[6]Zhu X,Gadgil AR,George M,et al.Peripheral T cell functions correlate with the severity of chronic obstructive pulmonary disease[J].Journal of Immunology,2009,182(5):3270.

*通訊作者

1007-4287(2017)09-1364-03

2016-10-17)