不同藥用部位及產(chǎn)地穿心蓮藥材中4個(gè)二萜內(nèi)酯類成分的研究

肖傳學(xué)，孫玉俠，耿曉梅，高展

(天士力醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，天津 300402)

·基礎(chǔ)研究·

不同藥用部位及產(chǎn)地穿心蓮藥材中4個(gè)二萜內(nèi)酯類成分的研究

肖傳學(xué)*，孫玉俠，耿曉梅，高展

(天士力醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，天津300402)

目的：考察不同產(chǎn)地與藥用部位對(duì)穿心蓮藥材質(zhì)量的影響。方法：采用高效液相色譜法比較不同藥用部位(粗桿、細(xì)桿及葉)、不同產(chǎn)地及市售藥材中穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯苷元及4個(gè)成分總和的含量。結(jié)果：穿心蓮葉中所含有的穿心蓮內(nèi)酯及二萜內(nèi)酯類成分總含量最高，其次是細(xì)桿，粗桿含量最低。對(duì)不同產(chǎn)區(qū)間穿心蓮藥材內(nèi)酯類成分含量的比較中，以廣西平馬地區(qū)產(chǎn)穿心蓮藥材穿心蓮內(nèi)酯及二萜內(nèi)酯類成分總含量最高。而在市售穿心蓮藥材的質(zhì)量比較中發(fā)現(xiàn)差異較大，但呈現(xiàn)出與本文前述實(shí)驗(yàn)相同的規(guī)律，即穿心蓮葉含量多者，質(zhì)量較佳。結(jié)論：不同產(chǎn)地與藥用部位對(duì)穿心蓮藥材具有顯著的影響。

穿心蓮藥材；穿心蓮內(nèi)酯；新穿心蓮內(nèi)酯；脫水穿心蓮內(nèi)酯；新穿心蓮內(nèi)酯苷元

穿心蓮Andrographispaniculata(Burm.f.) Nees 主產(chǎn)于福建、廣東、廣西等地區(qū)，每年清明前播種，中秋開花前開始采收，全草或葉入藥，具有清熱解毒、消炎、消腫止痛之功效[1]。穿心蓮抗炎活性成分為二萜內(nèi)酯類化合物，主要以穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯為主[2]，穿心蓮藥材及其制劑也多以上述兩種成分含量作為質(zhì)量控制指標(biāo)。但同樣具有清熱解毒、消腫止痛作用[3]的新穿心蓮內(nèi)酯及其苷元，作為藥材質(zhì)控指標(biāo)卻鮮有報(bào)道。本文擬以穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯苷元及4個(gè)二萜內(nèi)酯類成分總量[4-5]作為研究對(duì)象，考察穿心蓮藥材不同藥用部位、不同產(chǎn)地及市售藥材間各種二萜內(nèi)酯類成分的差異，以此更加全面反映穿心蓮藥材的質(zhì)量狀況，為不同廠商選擇或開展穿心蓮藥材藥源管理等提供參考。

1 儀器與試藥

Waters e2695-2996高效液相色譜儀。對(duì)照品：穿心蓮內(nèi)酯(USP，批號(hào)：F0I344)；新穿心蓮內(nèi)酯(天津一方科技有限公司，批號(hào)：20140110)；脫水穿心蓮內(nèi)酯(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110854-201308)；新穿心蓮內(nèi)酯苷元(天津一方科技有限公司，批號(hào)：20140506)；穿心蓮對(duì)照提取物(USP，批號(hào)：F0I342)；試劑：甲醇(OMNI，批號(hào)：150617014)；乙腈(OMNI，批號(hào)：101124014)；磷酸(天津風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號(hào)：20150801)；磷酸二氫鉀(天津風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號(hào)：20131008)；超純水(公司自制)。

穿心蓮粗桿、細(xì)桿及葉采自廣西南寧、貴港及福建漳州，穿心蓮全草藥材采自廣西南寧、貴港、橫縣、蓮塘、平馬，福建漳州、四川宜賓，市售穿心蓮藥材購(gòu)自成都通德藥業(yè)有限公司(產(chǎn)地分別為廣東、廣西、河南、河北及福建)，上述藥材均經(jīng)天士力醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司質(zhì)檢中心按照《中華人民共和國(guó)藥典》檢驗(yàn)合格。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：WatersX-BridgeShieldRP18(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相A：0.05%磷酸-磷酸二氫鉀水溶液；流動(dòng)相B：乙腈；流速：1.5mL·min-1；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：223nm；進(jìn)樣量：20μL；梯度洗脫(0～18min，5%～45%乙腈；18～25min，45%～80%乙腈；25～28min，80%～80%乙腈；28～35min，80%～45%乙腈；35～40min，45%～5%乙腈；40～45min，5%～5%乙腈)。

2.2供試品溶液的制備

取2.0g穿心蓮細(xì)粉，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50mL加熱回流15min，放冷至室溫，取上清液。重復(fù)上述操作4次，直至提取液為無色。合并所有提取液，減壓濃縮至50mL，取上述溶液25mL置50mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，混勻。用0.45μm濾膜濾過，即得。

2.3對(duì)照品溶液的制備

混合對(duì)照品溶液：取穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元4個(gè)對(duì)照品，精密稱定，分別置于10mL量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，得各對(duì)照品溶液；分別精密量取各對(duì)照品溶液5mL，置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成含穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯苷元分別為50.7、52.5、51.4、50.8μg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。

穿心蓮提取物對(duì)照品溶液：取穿心蓮對(duì)照提取物適量(約含二萜內(nèi)酯25mg)，置于50mL容量瓶中，加甲醇25mL，緩慢加熱15～20min，加乙腈定容至刻度，混勻。用0.45μm濾膜濾過，即得。

2.4分析方法驗(yàn)證

2.4.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 穿心蓮對(duì)照提取物色譜圖中穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯色譜峰的分離度為33；穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品色譜峰的理論塔板數(shù)為166449，拖尾因子為0.97，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積的RSD為1.7%。符合分析方法系統(tǒng)適用性的要求[6]。

2.4.2專屬性試驗(yàn) 取一批穿心蓮藥材按2.1.3項(xiàng)下制備供試品溶液并測(cè)定，各待測(cè)成分穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮內(nèi)酯苷元色譜峰的純度角均小于純度閾值，符合HPLC定量分析要求。

2.4.3在溶液中的穩(wěn)定性 取穿心蓮供試品、混合對(duì)照品及穿心蓮提取物對(duì)照品等的溶液分別于不同時(shí)間點(diǎn)(制備后0、2、4、8、12、16、20、24h)進(jìn)行檢測(cè)，記錄各時(shí)間點(diǎn)穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯苷元峰面積，并與0時(shí)數(shù)據(jù)相比，各時(shí)間點(diǎn)峰面積RAD≤2.0%，所有時(shí)間點(diǎn)峰面積RSD≤3.0%。結(jié)果表明，供試品溶液及對(duì)照品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4線性與范圍 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液50、40、30、20、10、5、1μL進(jìn)樣分析，以對(duì)照品質(zhì)量濃度對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸處理，得穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍，見表1。

表1 穿心蓮中4個(gè)成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批穿心蓮?fù)ㄟ^調(diào)整稱樣量制備70%、100%、130% 3個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的供試品溶液，每種濃度平行制備3份，分別計(jì)算4個(gè)二萜內(nèi)酯類成分含量及4個(gè)成分總含量。3個(gè)濃度的各自3份平行樣品間4個(gè)二萜內(nèi)酯類成分含量及4個(gè)成分總含量的RSD均小于0.89%；9份供試品溶液RSD均小于2.3%，表明重復(fù)性良好。

2.4.6 中間精密度試驗(yàn) 分別由兩名不同人員于不同日期取同一批穿心蓮?fù)ㄟ^調(diào)整稱樣量，分別制備70%、100%、130% 3個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的供試品溶液，每個(gè)濃度各1份，并分別于不同儀器上按照2.1項(xiàng)下方法色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得3個(gè)水平穿心蓮樣品中4個(gè)二萜內(nèi)酯類成分含量及4個(gè)成分總含量RSD均小于2.0%，表明中間精密度良好。

2.4.7 準(zhǔn)確度 取穿心蓮供試品稱樣量的1/2，精密稱定9份，分別加入對(duì)照品(溶液)適量，制備3個(gè)不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)(70%、100%、130%)的供試品溶液，按照2.1.1項(xiàng)下分析方法，進(jìn)行含量測(cè)定。計(jì)算穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元的回收率。結(jié)果平均回收率分別為100.9%、99.6%、100.3%、99.5%，RSD分別為0.89%、0.95%、0.61%、1.12%，表明準(zhǔn)確度良好。

2.5樣品測(cè)定

2.5.1不同藥用部位間穿心蓮二萜內(nèi)酯類成分含量分析 采用上述分析方法，分析來自3個(gè)不同產(chǎn)區(qū)的3批穿心蓮不同藥用部位(粗桿、細(xì)桿、葉)所含有的穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及新穿心蓮內(nèi)酯苷元的含量，結(jié)果見表2。

結(jié)果表明，同一產(chǎn)區(qū)中穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯及4個(gè)成分總量在葉中分布最多，其次為細(xì)桿，粗桿含量最少，但新穿心蓮內(nèi)酯苷元卻在粗桿中分布最多。3個(gè)產(chǎn)地間，穿心蓮二萜內(nèi)酯類的分布規(guī)律均相同；同一藥用部位中，不同產(chǎn)區(qū)間藥材含量最高的二萜內(nèi)酯類成分均為穿心蓮內(nèi)酯，其他3個(gè)成分則在不同產(chǎn)區(qū)同一藥用部位排列順序并不相同，無明顯規(guī)律。

表2 穿心蓮粗桿、細(xì)桿、葉中二萜內(nèi)酯類成分含量 %

2.5.2 不同產(chǎn)地穿心蓮葉中成分含量分析 對(duì)本實(shí)驗(yàn)室收集的來自3個(gè)省份7個(gè)不同產(chǎn)地穿心蓮葉中所含的二萜內(nèi)酯類成分進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果見表3。

結(jié)果表明，平馬地區(qū)穿心蓮葉中穿心蓮內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)高達(dá)3.6%，而其他6個(gè)不同產(chǎn)區(qū)穿心蓮內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)均約為2.0%。但其所含有的脫水穿心蓮內(nèi)酯及新穿心蓮內(nèi)酯苷元與其他6個(gè)地區(qū)相比，約為其他地區(qū)的1/4；不同產(chǎn)區(qū)間穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯的總和以平馬地區(qū)最高，而新穿心蓮內(nèi)酯與新穿心蓮內(nèi)酯苷元的總和以南寧地區(qū)最高。

表3 不同產(chǎn)地穿心蓮葉中所含二萜內(nèi)酯類成分含量 %

2.5.3 不同市售穿心蓮藥材成分含量分析 對(duì)來自不同產(chǎn)地的市售穿心蓮藥材(共6批)進(jìn)行二萜內(nèi)酯類成分含量分析，結(jié)果見表4。6批市售穿心蓮藥材除產(chǎn)地為廣東和安國(guó)的藥材為全草外，其余藥材均主要為穿心蓮粗桿。

綜合市售藥材及各二萜內(nèi)酯類成分含量分析，可知全草藥材中穿心蓮內(nèi)酯的含量較高，粗桿藥材中新穿心蓮內(nèi)酯苷元的含量較高，該規(guī)律與2.2.1項(xiàng)下所研究的不同藥用部位間二萜內(nèi)酯類成分分析規(guī)律相同；比較廣東及安國(guó)南北兩個(gè)不同產(chǎn)區(qū)穿心蓮全草的二萜內(nèi)酯類成分含量，安國(guó)產(chǎn)穿心蓮藥材二萜內(nèi)酯類成分總量高出廣東產(chǎn)藥材約20%，而以粗桿為主的4批市售藥材中，二萜內(nèi)酯類成分總量也以河南產(chǎn)藥材最高。這兩組數(shù)據(jù)也顯示穿心蓮藥材由南向北引種后，在二萜內(nèi)酯類成分含量方面有所提升。

表4 市售穿心蓮藥材成分含量分析 %

3 討論

本文采用的分析方法可同時(shí)對(duì)穿心蓮藥材中穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯及新穿心蓮內(nèi)酯苷元等4個(gè)二萜內(nèi)酯類成分含量進(jìn)行測(cè)定，該分析方法可作為《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版穿心蓮藥材質(zhì)量控制的一種有效的補(bǔ)充。

比較不同藥用部位所含二萜內(nèi)酯類成分的含量，穿心蓮葉中二萜內(nèi)酯類成分的總量幾乎為粗桿的10倍，細(xì)桿的5倍。另外，在市售不同廠家生產(chǎn)的穿心蓮藥材二萜內(nèi)酯類成分含量比較中，同樣發(fā)現(xiàn)由于葉莖比例不同，飲片含量存在較大的差異，因此，根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版穿心蓮藥材項(xiàng)下規(guī)定，制劑原料及飲片選擇穿心蓮藥材或飲片時(shí)，須根據(jù)各自產(chǎn)品的要求，結(jié)合工藝，嚴(yán)格控制穿心蓮葉與莖的比例。本研究也為制訂穿心蓮藥材或飲片的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

對(duì)3個(gè)不同產(chǎn)地的穿心蓮葉進(jìn)行分析，由于各地區(qū)的自然環(huán)境、采收期及貯藏條件等均有一定的差別，導(dǎo)致穿心蓮的質(zhì)量也存在一定差異。本實(shí)驗(yàn)也為穿心蓮提取物或穿心蓮內(nèi)酯的原料產(chǎn)地的選擇提供了一定的數(shù)據(jù)支持。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：268.

[2] 顏玉貞，謝培山.穿心蓮質(zhì)量控制的再評(píng)價(jià)[J].中藥新藥與臨床藥理，1998，9(4)：204-206.

[3] 李曙光,葉再元.穿心蓮內(nèi)酯的藥理活性作用[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2008, 26(5):984-986.

[4] 李軍，段然，黃雯，等.穿心蓮指紋圖譜和不同產(chǎn)地質(zhì)量研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2009，11(6)：21-24.

[5] 王智民,錢忠直,張啟偉，等.一測(cè)多評(píng)法建立的技術(shù)指南[J].中國(guó)中藥雜志,2011,6(6):657-658.

[6] The United States Pharmacopieial Convention. USP39-NF34[S].USA:The United States Pharmacopieial Convention，2015: 6793.

(2016-08-10)

ComparisonofDiterpenoidLactoneContentExtractedfromVariousPartsofAndrographisHerbafromDifferentOrigins

XIAO Chuanxue*，SUN Yuxia，GENG Xiaomei，GAO Zhan

(TaslyPharmaceuticalCo.，Ltd.，Tianjin300402，China)

Objective：To study the quality of Andrographis Herba from various locations and markets.Methods：HPLC method was employed to compare the content of andrographolide，neoandrographolide，dehydroandrographolide，andrograpanin and total content of the 4 components extracted from various parts ofAndrographispaniculata，including thick stem，thin stem and leaves.The contents of these diterpenoid lactone extracted fromA.paniculatacollected from various places and markets were also compared.Results：The results showed that the content of andrographolide and total content of diterpenoid extracted from leaves were higher than those extracted from stems.The content of diterpenoid extracted from thick stems was the lowest.Regarding various locations，theA.paniculatafrom Pingma，Guangxi province had a higher content than those from other locations.ForA.paniculatafrom various markets，the content of andrographolide and total content of diterpenoid fluctuated significantly.However，the distribution of effective components inA.paniculatafrom various markets was consistent，with the highest content in leaves and the lowest content in thick stems.Conclusion：Different places and medicinal parts have significant effects on the Andrographis Herba.

Andrographis Herba，andrographolide，neoandrographolide，dehydroandrographolide，andrograpanin

] 肖傳學(xué)，工程師，研究方向：中藥材及中藥制劑質(zhì)量控制、已上市中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究；E-mail：xcx@tasly.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.5.016

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