三種方法檢測布魯氏菌病病原的結(jié)果比較

李敏，李俐睿，岳建國，周立新

（四川省成都市動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

三種方法檢測布魯氏菌病病原的結(jié)果比較

李敏，李俐睿，岳建國，周立新

（四川省成都市動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

本試驗采用試管凝集、虎紅凝集和金標(biāo)卡檢測三種方法對3141份牛羊血清進(jìn)行布魯氏菌病病原檢測，并對檢測結(jié)果的敏感性、特異性和符合率進(jìn)行分析，比較三種方法的一致性。結(jié)果證明這三種方法的敏感性都能達(dá)到100%，均能夠檢出全部陽性樣品，其中虎紅凝集試驗和金標(biāo)卡檢測的特異性相對試管凝集試驗而言能達(dá)到99%以上水平，虎紅凝集試驗的特異性和符合率稍高于金標(biāo)卡檢測，這兩種方法均可用于對日常布病病原的篩查。

布魯氏菌??；試管凝集試驗；虎紅凝集試驗；金標(biāo)卡檢測法

布魯氏菌病是一種變態(tài)反應(yīng)性傳染病，由布魯氏菌屬細(xì)菌入侵人體所引起，屬人畜共患疾病[1-2]。布病嚴(yán)重影響家畜的生產(chǎn)力發(fā)揮和動物產(chǎn)品安全，給畜牧業(yè)發(fā)展造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[3]。我國將布病列為二類動物疫病，是法定檢疫、撲殺被感染家畜的三大疫?。谔阋?、布病和結(jié)核?。┲籟4]。

目前，國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的布魯氏菌病檢測方法主要采用虎紅平板凝集試驗、全乳環(huán)狀試驗、試管凝集試驗和補體結(jié)合試驗[5-6]，適合于實驗室檢測的方法主要為虎紅凝集試驗和試管凝集試驗?；⒓t凝集試驗檢測成本低、敏感性強、操作簡單[7]，且反應(yīng)快、耗時短，適合布病大規(guī)模血清學(xué)初篩。但其容易誘發(fā)交叉凝集反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性，特異性不強，需要加做其他試驗來驗證結(jié)果準(zhǔn)確性[8]。試管凝集試驗相對于虎紅凝集試驗來說，耗時較長（至少24h），操作步驟復(fù)雜，不適合大規(guī)模樣品初篩，適合小量樣品檢測，但其特異性、準(zhǔn)確性均高于虎紅凝集試驗[9]?？傮w來說，這兩種方法各有利弊，一般采用虎紅凝集試驗進(jìn)行初篩，試管凝集試驗進(jìn)行復(fù)核。但由于兩種方法的結(jié)果判定均為肉眼判定，因此存在一定的誤差。近年來，市面上推出了一種利用膠體金免疫層析原理制作的金標(biāo)卡試劑，該檢測方法方便快捷，易于判定結(jié)果，適合于大規(guī)模初篩檢測，但其與虎紅和試管凝集試驗的符合率有待進(jìn)一步的驗證。本試驗選取了市面上某廠家的金標(biāo)檢測卡，與虎紅和試管凝集試驗進(jìn)行比較，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1 試驗材料

1.1 樣品 牛、羊血清分別采自成都市22個區(qū)（市）縣的規(guī)模場和散養(yǎng)戶，共計3141份（其中牛血清128份、羊血清3013份）。樣品共覆蓋493個規(guī)模場，2203個散養(yǎng)戶，8個交易場或屠宰場。采樣時間從2016年2月至12月。

1.2 試劑

1.2.1 布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗抗原（虎紅凝集試驗），批號：2016/06/20，購于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2.2 布魯氏菌病試管平板凝集試驗抗原（平板凝集試驗），批號：201501，購于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2.3 布魯氏菌病抗體快速檢測卡（金標(biāo)卡快速檢測試驗），批號：2301DG002，購于Y廠家。

1.2.4 布魯氏菌病陽性血清（批號：201401），布魯氏菌病陰性血清（批號：201403），均購于哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司。

2 試驗方法

2.1 試驗設(shè)計 將采集的所有樣品用三種試驗方法（平板凝集試驗、虎紅凝集試驗和金標(biāo)卡試驗）進(jìn)行檢測，其中虎紅凝集和金標(biāo)卡試驗各做一次重復(fù)。

2.2 結(jié)果判定 試驗步驟嚴(yán)格按照GB/T 18646-2002動物布魯氏菌病診斷技術(shù)和試劑盒說明書進(jìn)行。所有試劑都在有效期內(nèi)，試驗結(jié)果按規(guī)定判定。

2.3 數(shù)據(jù)處理 以試管凝集試驗數(shù)據(jù)為基準(zhǔn)，計算另外兩種試驗方法相對于試管凝集試驗的特異性、敏感性、和符合率，選出兩種相對穩(wěn)定且符合率高的方法，用于日常檢測工作。

3 結(jié)果與分析

3.1 檢測結(jié)果 用以上三種試驗方法檢測3141份牛、羊血清樣品，結(jié)果見表1。

表1 三種試驗方法檢測結(jié)果匯總 份

3.2 檢測結(jié)果分析

根據(jù)三種方法的檢測結(jié)果比較分析，分別計算虎紅凝集試驗和金標(biāo)卡試驗相對于試管凝集試驗的敏感性、特異性和符合率，結(jié)果見表2。

表2 兩種試驗方法的敏感性、特異性和符合率比較

經(jīng)檢測，試管凝集試驗檢測到117份陽性樣品，另外兩種方法也檢測出陽性，其檢測敏感性均為100%（117/117）。特異性如下：虎紅凝集試驗為99.74%（3016/3024）、99.67%（3014/3024），金標(biāo)卡試驗為 99.40%（3006/3024）、99.60%（3 012/3024）。相對于試管凝集試驗，檢測結(jié)果符合率：虎紅凝集試驗為99.75%[（117+3016）/3141]、99.68%[（117+3014）/3 141]，金標(biāo)卡試驗為99.43%[（117+3 006）/3 141]、99.62%[（117+3012）/3141]。

4 分析討論

本試驗通過對三種方法的檢測結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)虎紅凝集試驗、金標(biāo)卡檢測與試管凝集試驗的敏感性都能達(dá)到100%，均能夠檢出全部陽性樣品。就特異性和敏感性而言，虎紅凝集試驗和金標(biāo)卡檢測都能達(dá)到99%以上水平，而虎紅凝集試驗的特異性和符合率稍稍高于金標(biāo)卡檢測，可見用虎紅凝集試驗和金標(biāo)卡檢測方法均能對日常布病病原進(jìn)行篩查。

在工作中，可以根據(jù)實際情況選擇檢測方法，但虎紅凝集、金標(biāo)卡檢測方法與試管凝集試驗相比，結(jié)果還存在一些假陽性，因此，通過初篩之后的陽性樣品應(yīng)進(jìn)一步采用試管凝集試驗進(jìn)行確診。經(jīng)比較，我們發(fā)現(xiàn)膠體金免疫層析法適合在基層推廣和使用，且免疫層析技術(shù)正朝著定量、高靈敏度、多標(biāo)記檢測等方向發(fā)展[10]。在選用金標(biāo)卡檢測方法時，應(yīng)注意選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的穩(wěn)定性好、特異性高的試劑盒，以免造成假陽性高或者特異性差的檢測結(jié)果，誤導(dǎo)診斷。

[1]林愛明，徐勇，劉佳騏，等.早期顱骨修補及腦室腹腔分流在腦外傷治療中的臨床效果[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2014，18（24）：61-62.

[2]饒國利，高芳.試管凝集試驗與虎紅平板凝集試驗判斷布魯氏桿菌病的比較[J].疾病監(jiān)測與控制雜志，2014，8（4）：248.

[3]吳彤，王慧煜，吳紹亮，等.動物布魯氏菌病快速診斷方法研究進(jìn)展[J].中國人獸共患病學(xué)報，2016，32（8）：746-751.

[4]Tiller R V，Gee J E，Lonsway D R，et al.Identification of an unusual brucella strain（BO2）from a lung biopsy in a 52 year-old patient with chronic destructive pneumonia[J].BMC Microbiology，2010，10（1）：23.

[5]中國農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所.動物布魯氏菌病診斷技術(shù)（GB/T 18646-2002）[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002.

[6]內(nèi)蒙古自治區(qū)獸醫(yī)工作站.動物布氏桿菌病控制技術(shù)規(guī)范（NY/T 907-2004）[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2005.

[7]McGiven J A.New developments in the immunodiagnosis of brucellosis in livestock and wildlife[J].Rev Sci Tech，2013，32（1）：163-176.

[8]Chothe S K，Saxena H M.Innovative modifications to Rose Bengalplate testenhance its specificity,sensitivity and predictive value in the diagnosis of brucellosis[J].Journal of Microbiological Methods，2014，97（1）：25-28.

[9]Galinska E M，Zagorski J.Brucellosis in humansetiology，diagnostics，clinical forms[J].Ann Agric&Environ Med，2013，20（2）：233-238.

[10]任志奇，吳英松，劉天才，等.新型免疫層析技術(shù)的研究進(jìn)展[J].廣東醫(yī)學(xué)，2013，34（2）：312-314.

The Comparison of the Results of Three Types of Brucellosis Test Methods

LI Min，LI Lirui，Yue Jianguo，et al.
（Animal Disease Prevention and Control Center of Chengdu City，Sichuan Chengdu 610041，China）

In this study， we selected 3 141 cattle and sheep serums， and detected the brucellosis pathogen of them by the SAT，RBPT and Gold labeled methods respectively，then analyzed the sensitivity，specificity and coincidence rate of the three methods.The results showed that the sensitivity of all the three methods could reach 100%，and could check out all the positive samples.Compared with the SAT method，the specificity of the RBPT and Gold labeled methods could reach 99%，and the specificity of the RBPT was slightly higher than Gold labeled methods.In general，both of the RBPT and Gold labeled methods could be used for the routine screening of brucellosis.

Brucellosis；SAT；RBPT；Gold labeled method

S854.43

B

1001-8964（2017）09-0029-03

2017-05-31

李敏（1986-），女，四川成都人，獸醫(yī)師，碩士，現(xiàn)從事實驗室檢測工作。